冠心病患者血清趨化因子配體12和腫瘤壞死因子-α表達水平及臨床意義

張福宸 劉婧 張明亮 張立敏 賈偉佳 李大鵬 張桂霞

(佳木斯市中心醫(yī)院 1心內(nèi)科，黑龍江 佳木斯 154002；2放射科)

冠狀動脈粥樣硬化性心臟病(簡稱冠心病)是由冠狀動脈狹窄或梗阻引起的冠狀動脈粥樣硬化病變和管腔內(nèi)斑塊形成，從而減少富氧血液流向心臟，導(dǎo)致心臟缺血、缺氧或壞死。冠心病以動脈粥樣硬化引起的管腔狹窄或閉塞為特征，從而阻礙正常的血液循環(huán)〔1〕。血管性炎癥反應(yīng)可改變血管壁形狀，引發(fā)血栓形成，促使斑塊由穩(wěn)定狀態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)榇嗳鯛顟B(tài)，從而導(dǎo)致栓塞〔2〕。不同類型的免疫細胞在早期動脈粥樣硬化斑塊的形成中起重要作用，這些免疫細胞釋放的效應(yīng)分子可加速斑塊形成。因此，動脈粥樣硬化被認為是一種炎癥性疾病，是免疫因素和代謝危險因素共同作用的結(jié)果〔3〕。本文比較炎性細胞因子趨化因子配體(CXCL)12和腫瘤壞死因子(TNF)-α在不同臨床類型冠心病患者和正常人群中的表達情況，探討其在冠心病發(fā)生中的可能作用機制。

1 材料與方法

1.1實驗用試劑、耗材及儀器 人CXCL12酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)試劑盒(雅吉生物，上海)；人TNF-α ELISA試劑盒(索萊寶，北京)；移液器(艾本德，德國)，多功能自動酶標(biāo)儀(賽默飛世爾，美國)；電熱恒溫水箱(億能實驗儀器廠，常州)；真空采血離心管(Streck，美國)。

1.2臨床資料及實驗分組 2016年8月至2018年8月佳木斯市中心醫(yī)院62例冠心病患者和健康體檢27例健康人群作為受試對象。冠心病患者中男27例，女35例，平均年齡(61.52±11.28)歲；健康人群中男12例，女15例，平均年齡(61.78±13.59)歲。根據(jù)冠狀動脈造影檢查結(jié)果和臨床癥狀體征，將冠心病患者分為穩(wěn)定型心絞痛、不穩(wěn)定型心絞痛和急性心肌梗死組。入選研究對象排除先天性心臟病、肝腎功能不全、血液系統(tǒng)疾病、惡性腫瘤、自身免疫性疾病、重度感染等病變。

1.3ELISA 受試者于清晨空腹抽取肘靜脈血4 ml，4℃環(huán)境下離心20 min(3 000 r/min)，吸取上層血清于-80℃冰箱中凍存?zhèn)溆谩０聪率霾襟E利用ELISA試劑盒檢測血清CXCL12和TNF-α水平：在4℃環(huán)境下將血清樣本和試劑盒中試劑進行解凍；將100 μl血清樣本和各種濃度的標(biāo)準(zhǔn)品依次加入酶標(biāo)板孔中；封口膜封閉后將酶標(biāo)板置于電熱恒溫水箱中，在37℃下靜置 90 min；甩去板內(nèi)液體，并在吸水紙上用力拍打7～8次；各孔中依次加入100 μl CXCL12或TNF-α抗體工作液，在37℃電熱恒溫水箱中靜置60 min；每孔用300 μl洗滌緩沖清洗3次，每次浸泡1 min；各孔中依次加入100 μl卵白素-生物素-酶復(fù)合物(ABC)工作液，37℃電熱恒溫水箱中靜置30 min；每孔用300 μl洗滌緩沖清洗5次，每次浸泡2 min；各孔中依次加入90 μl顯色液，37℃電熱恒溫水箱中避光靜置20 min；各孔中依次加入100 μl終止液；酶標(biāo)儀讀取450 nm處吸光度值；繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算各樣本血清中分泌型蛋白水平。

1.4統(tǒng)計分析 應(yīng)用SPSS20.0軟件進行q檢驗和Spearman相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1各組血清CXCL12和TNF-α水平 與健康人群相比，穩(wěn)定型心絞痛、不穩(wěn)定型心絞痛和急性心肌梗死患者血清CXCL12表達水平顯著增高，且不穩(wěn)定型心絞痛和急性心肌梗死患者顯著高于穩(wěn)定型心絞痛患者；與健康人群和穩(wěn)定型心絞痛患者相比，不穩(wěn)定型心絞痛和急性心肌梗死患者血清TNF-α的表達水平顯著升高(P<0.05)。見表1。

表1 各組血清CXCL12、TNF-α水平

與健康人群比較：1)P<0.05；與穩(wěn)定型心絞痛比較：2)P<0.01，3)P<0.05

2.2冠心病患者血清CXCL12和TNF-α水平相關(guān)性 CXCL12和TNF-α的表達水平在不穩(wěn)定型心絞痛(r=0.500 8，P<0.05)和急性心肌梗死患者血清中具有相關(guān)性(r=0.479 7，P<0.05)，但在穩(wěn)定型心絞痛患者中不具有相關(guān)性(r=0.383 1，P>0.05)。

3 討 論

迄今為止，人們對炎癥在冠心病發(fā)病中的作用有了越來越深入的認識，它是免疫因素和代謝危險因素共同作用的結(jié)果，表現(xiàn)為血管壁內(nèi)動脈粥樣硬化斑塊的形成〔4〕。各種免疫細胞，如中性粒細胞、單核細胞、巨噬細胞和淋巴細胞等均可引起血管壁內(nèi)各種免疫反應(yīng)而參與冠心病發(fā)展與演進。在此過程中，炎性細胞因子發(fā)揮了重要調(diào)節(jié)作用。

作為CXC類趨化因子中的一員，CXCL12又稱為基質(zhì)細胞衍生因子(SDF)-1，它具有穩(wěn)定免疫系統(tǒng)、促進炎癥細胞增殖、聚集炎性因子等作用〔5〕。血清CXCL12水平是預(yù)測冠心病預(yù)后不良的一個獨立指標(biāo)，在去除其他危險因素的情況下，血清高CXCL12水平可使心血管疾病(包括心肌梗死)的發(fā)生風(fēng)險和病死率增加4.8倍〔6〕。另外，血清CXCL12 水平升高與冠脈管腔狹窄和閉塞具有顯著相關(guān)性，因此其可以作為評價冠脈病變風(fēng)險的一個重要指標(biāo)〔7〕。Walsh等〔8〕報道了CXCL12參與動脈粥樣硬化形成的可能機制，指出，當(dāng)血小板被二磷酸腺苷、腎上腺素和凝血酶等物質(zhì)活化后，可將存在于α-顆粒中的活性物質(zhì)包括CXCL12釋放出來，這些由血小板和其他細胞產(chǎn)生的CXCL12 可經(jīng)自分泌和旁分泌途徑識別并活化血小板表面的CXCL2特異性受體(CXCR)4，進而加速血小板的黏附、聚集和釋放，最終加劇動脈粥樣硬化的病變程度。

CXCL2可由TNF-α等促炎性因子誘導(dǎo)表達，這提示CXCL2與TNF-α在功能上具有一定關(guān)聯(lián)〔9〕。在炎癥反應(yīng)中，TNF-α是一種出現(xiàn)最早、最重要的炎性因子，它具有激活中性粒細胞、淋巴細胞等免疫細胞、增加血管內(nèi)皮細胞通透性、影響不同組織代謝過程、誘導(dǎo)各種細胞因子產(chǎn)生和釋放等多種功能。在動脈粥樣硬化進程中，斑塊中巨噬細胞分泌的TNF-α 可對內(nèi)皮細胞產(chǎn)生毒性作用并誘發(fā)炎癥反應(yīng)，造成血管內(nèi)皮損傷和黏附分子的表達，這可促使更多的巨噬細胞招募其間并分泌更多的TNF-α，最終加重動脈粥樣硬化斑塊的不穩(wěn)定性。本研究顯示，冠心病患者血清CXCL12和TNF-α表達在不穩(wěn)定型心絞痛和急性心肌梗死患者中有相關(guān)性。這說明CXCL12和TNF-α可作為單獨指標(biāo)來評估冠脈病變風(fēng)險。聯(lián)合檢測CXCL12和TNF-α水平對冠心病臨床診斷和病情程度評估可能具有更高的參考價值。