蝴蝶蘭組織培養關鍵技術探討

摘要：蝴蝶蘭大多是通過組織培養技術繁殖培育的。組培苗能夠保持母本性狀，減少組培苗變異和具有植株整齊等特點。通過對蝴蝶蘭組織培養關鍵技術中外植體選擇、培養基成分以及培養條件等進行探討，以期提高蝴蝶蘭組培苗的生產效益。

關鍵詞：褐變;蝴蝶蘭;外植體;組織培養

蝴蝶蘭屬于蘭科蝴蝶蘭屬，其花的形態和結構近似蛾蝶，故命名為蝴蝶蘭。迄今發現原生種70多個，大多數分布在潮濕的亞洲地區，原產于中國的有4種。蝴蝶蘭為附生蘭，喜歡溫暖、遮蔭且濕度大的環境，其氣生根可吸取空氣中的水分和樹中的腐殖質。蝴蝶蘭的繁殖方法有2種：一種是有性繁殖。但其種子非常細小，且在自然條件下極難萌發。另一種是無性繁殖，即組織培養技術。目前，花卉市場上的蝴蝶蘭大多是通過組織培養技術繁殖培育的。我們不僅需要采用合理有效的、簡化的以及低成本的技術措施，還需要保證蝴蝶蘭組培苗保持母本性狀、減少變異和植株整齊等，達到工廠化育苗和規模化生產標準，提高生產效益。

1 外植體選擇

蝴蝶蘭外植體材料的選擇非常重要，不同器官之間分化能力差異很大。合適的外植體不僅能減少變異率，還能縮短誘導時間。目前，蝴蝶蘭的外植體選擇主要有葉片、莖尖、莖段、花梗以及根部等。蝴蝶蘭組織培養苗可通過外植體誘導原球莖獲得，也可以通過誘導叢生芽獲得。原球莖誘導途徑增殖系數較高、數量大，但是變異率高，且誘導時間長。叢生芽誘導途徑技術難度較低，且保持遺傳穩定性，縮短周期。因此，叢生芽誘導途徑更適用于工廠化生產。

花梗培養的整個過程對母本的生長和花芽分化并不會造成影響。花梗培養操作簡便，且能使難以誘導原球莖的蝴蝶蘭品種均能依靠此方法進行培育，而且使用帶腋芽的花梗節段為外植體材料易獲得較多的不定芽。此外，花梗誘導原球莖的效率高于其他外植體材料。可見，花梗是蝴蝶蘭組培快繁的最佳外植體。

2 培養基成分

蝴蝶蘭品種、外植體材料和組織培養階段對培養基的要求均有不同。合適的培養基會提高外植體誘導率，降低褐變率以及玻璃化率等。一般以低無機鹽濃度的MS培養基為基礎，添加不同濃度的植物生長調節物質，如6-BA、NAA、2，4-D、KT以及有機添加物椰子汁等。培養基成分中，植物激素添加的種類和濃度起到了至關重要的作用。在蝴蝶蘭的工廠化生產中，植物激素6-BA、NAA濃度決定了原球莖發生的誘導速度，而椰子汁、香蕉泥和土豆泥等對蝴蝶蘭組培苗一致性有顯著的影響。

生根壯苗培養是提高植株成活率的一項重要內容，壯苗生根階段為試管苗的移栽和成活奠定基礎，直接影響到工廠化生產的種苗質量。在組培苗壯苗生根階段，通常提高培養基的生長素濃度，下調細胞分裂素濃度，從而促進植物發根。此外，培養基中添加了椰子汁、香蕉汁、蘋果汁等天然添加物，對蝴蝶蘭組培苗的生根壯苗有明顯的促進作用，移栽成活率也較高。

3 培養條件

在花梗誘導叢生芽過程中，適宜的溫度十分重要。較低溫度有利于腋芽轉化為花芽，而較高溫度則有利于腋芽轉化為營養芽。此外，光照強度對蝴蝶蘭試管苗的生長也有較大影響，但光照強度合適范圍還需要進一步的探究。蝴蝶蘭幼苗對溫度的要求比較高。溫度過低，蝴蝶蘭根部會停止吸收水分，從而造成生理干旱，進而葉片變黃、脫落，甚至死亡。光照過強會灼傷葉片，使葉片老化，甚至枯死。夏季在中午前后要做好遮蔭處理。

4 植物組織培養褐變

在蝴蝶蘭組織培養過程中，材料非常容易出現褐變的情況。尤其是切取莖尖進行脫除病毒的步驟，由于莖尖太小，更容易因褐化而導致死亡。因此蝴蝶蘭組織培養過程需要重視褐化問題。褐變是因植物組織多酚氧化酶與其酚類底物結合，在氧的作用下，二者發生化學反應形成醒類物質。酉昆類物質是褐色物質，當該類物質擴散到培養基時，會對植物材料造成毒害，進而影響植物體內酶的活性，阻礙植物正常代謝，嚴重時甚至導致材料死亡。

目前，常用的褐化抑制劑分為2大類：一類是吸附劑，另一類是抗氧化劑。吸附劑主要包括活性炭、檸檬酸等;抗氧化劑主要有維生素、谷胱甘肽等。活性炭是一種吸附性極強的吸附劑，可以有效抑制蝴蝶蘭褐化。但是，培養基中添加活性炭不利于蝴蝶蘭組培苗生根，也不利于叢生芽的誘導。谷胱甘肽和檸檬酸抑制褐化的效果一般，但二者對植物生根以及叢生芽誘導影響較小。除添加抑制劑以外，按時更換培養基和及時切除材料的褐化部位，也能有效地抑制褐化情況發生。

5 病毒感染

感病蘭花植物大多是由建蘭花葉病毒和齒蘭環斑病毒侵染而成，它們具有侵染性強、復合感染、潛伏期長以及危害嚴重等特點。建蘭花葉病毒和齒蘭環斑病毒會嚴重損傷蝴蝶蘭葉片，進而導致植株生長不良，影響花朵的質量。病毒侵染嚴重影響了蝴蝶蘭的觀賞性，給企業帶來嚴重的經濟損失。建蘭花葉病毒和齒蘭環斑病毒的侵染主要是由操作不規范引起的，例如接觸過染病植株的剪刀、手套等器具又接觸到健康植株或健康材料時，會造成交叉感染。因此，選取健康的蝴蝶蘭植株外植體，以及及時對操作儀器和器具進行消毒十分重要。

6 結語

蝴蝶蘭組織培養對外植體的選擇、操作過程以及培養條件等均有較高的要求，否則蝴蝶蘭組培過程中極易出現褐化問題和病毒感染問題。因此，蝴蝶蘭組培苗的生產需要規范化和標準化的工廠化育苗。通過高投入高產出的經營模式，培育出高品質的優良幼苗，進而取得規模經濟的效果，取得良好的經濟效益。

（收稿：2019-07-26）

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基金項目：楊凌職業技術學院自然科學基金項目（2030226）。

作者簡介：張雯（1989-），女，漢族，陜西西安人，講師，博士研究生，研究方向：園藝技術。