非小細(xì)胞肺癌患者血清中CD8+T 細(xì)胞、CEA 及CA199 水平與腫瘤轉(zhuǎn)移的相關(guān)性分析

楊玲

（廣東省惠州市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，惠州516003）

肺癌是我國也是全世界最常見的惡性腫瘤，也是我國城市人口死亡率最高的惡性腫瘤[1]。 其中非小細(xì)胞肺癌是最常見的肺癌，約占80%，病理類型有鱗癌、腺癌及大細(xì)胞癌[2]。 非小細(xì)胞肺癌具有增殖分裂快，腫瘤轉(zhuǎn)移時(shí)間相對較早的特點(diǎn)，且因缺少有效的診斷方法， 大部分患者發(fā)現(xiàn)時(shí)已處于中晚期，5 年內(nèi)患者死亡率較高[3]。 因此，探尋診斷非小細(xì)胞肺癌腫瘤轉(zhuǎn)移的高效血清標(biāo)志物， 對于提高患者存活率，改善預(yù)后顯得尤為重要。 有相關(guān)文獻(xiàn)指出， 外周血T 淋巴細(xì)胞與非小細(xì)胞肺癌發(fā)生、發(fā)展及腫瘤轉(zhuǎn)移過程密切相關(guān)，對于免疫功能具有重要的調(diào)節(jié)作用[4]。 同時(shí)有研究顯示，癌胚抗原（CEA）、糖類抗原199（CA199）水平在肺癌等惡性腫瘤患者血清中均增高[5]。 本研究旨在探究非小細(xì)胞肺癌患者血清中CD8+T 細(xì)胞、CEA 及CA199水平與腫瘤轉(zhuǎn)移的相關(guān)性，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2016 年7 月-2019 年3 月于我院醫(yī)治的非小細(xì)胞肺癌患者160 例（實(shí)驗(yàn)組）作為研究對象， 另選同期于我院體檢的健康人群80例作為對照組，該研究已經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。診斷標(biāo)準(zhǔn)：⑴參照《新編常見惡性腫瘤診治規(guī)范（合訂本）》中關(guān)于肺癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]；⑵病理學(xué)診斷：肺手術(shù)標(biāo)本經(jīng)病理、組織學(xué)證實(shí)行開胸探查，肺穿刺或經(jīng)纖維支氣管鏡檢查取得肺或支氣管活組織，標(biāo)本經(jīng)組織學(xué)診斷為原發(fā)性支氣管非小細(xì)胞肺癌；頸、鎖骨上和腋下等部位淋巴結(jié)、胸壁、胸膜或皮下結(jié)節(jié)等轉(zhuǎn)移灶活組織檢查，組織學(xué)表現(xiàn)符合原發(fā)性支氣管非小細(xì)胞肺癌，且肺或支氣管壁內(nèi)疑有肺癌存在，臨床上又能排除其他器官原發(fā)癌；⑶細(xì)胞學(xué)診斷：痰液、纖維支氣管鏡毛刷、抽吸、沖洗等獲得細(xì)胞學(xué)標(biāo)本，鏡下所見符合非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞學(xué)標(biāo)準(zhǔn)。 納入標(biāo)準(zhǔn)：抽血檢測前未接受肺癌外科手術(shù)、放化療、分子靶向治療等；臨床資料完整；患者均了解本研究并自愿簽署知情同意書。 排除標(biāo)準(zhǔn)：合并有其他惡性腫瘤者；心、肝、腎等腫瘤器官嚴(yán)重疾病者；合并急性、慢性感染者；免疫功能障礙、血液系統(tǒng)障礙者； 精神疾病或意識模糊等難以交流者。 實(shí)驗(yàn)組男88 例，女72 例，年齡36-78 歲，平均年齡（59.05±8.56）歲，其中病理類型為腺癌67例，鱗癌59 例，其他類型34 例。 對照組男45 例，女35 例，年齡35-76 歲，平均年齡（59.71±9.01）歲。 兩組患者的性別、年齡對比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 方法 ⑴檢測CD8+T 細(xì)胞： 抽取所有受試者清早空腹?fàn)顟B(tài)下靜脈血5ml 于試管中，混勻，置于4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?采用emiBioCytoCounter 系列全自動可視化細(xì)胞檢測儀檢測血清CD8+T 細(xì)胞比例。⑵檢測CEA、CA199：抽取所有受試者清早空腹?fàn)顟B(tài)下靜脈血5ml 于試管中， 離心（2000r/min）15min，取上清液置于-20℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?采用羅氏E601 電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀及配套試劑檢測血清CEA、CA199 水平，嚴(yán)格參照說明書進(jìn)行操作。

1.3 觀察指標(biāo) ⑴對比實(shí)驗(yàn)組和對照組患者血清CD8+T 細(xì)胞、CEA 及CA199 水平； ⑵對比轉(zhuǎn)移組和未轉(zhuǎn)移組患者臨床資料； ⑶非小細(xì)胞肺癌患者發(fā)生腫瘤轉(zhuǎn)移的Logistic 回歸分析；⑷血清CD8+T細(xì)胞、CEA 及CA199 水平診斷非小細(xì)胞肺癌患者發(fā)生腫瘤轉(zhuǎn)移的ROC 曲線分析

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS21.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)量資料用（平均值±標(biāo)準(zhǔn)差）表示，兩組計(jì)量資料的比較采用t 檢驗(yàn)； 計(jì)數(shù)資料用百分比表示， 計(jì)數(shù)資料的比較采用卡方檢驗(yàn)； 采用Logistic回歸分析非小細(xì)胞肺癌患者發(fā)生腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)的危險(xiǎn)因素； 采用ROC 曲線分析血清CD8+T 細(xì)胞、CEA 及CA199 水平對非小細(xì)胞肺癌患者發(fā)生腫瘤轉(zhuǎn)移的診斷價(jià)值。 P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 實(shí)驗(yàn)組和對照組患者血清CD8+T 細(xì)胞、CEA及CA199 水平對比 實(shí)驗(yàn)組患者血清CD8+T 細(xì)胞、CEA 及CA199 水平顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。 見表1。

2.2 轉(zhuǎn)移組和未轉(zhuǎn)移組患者臨床資料對比 兩組患者的性別比列、年齡、吸煙史和病理類型對比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P>0.05）。 轉(zhuǎn)移組患者血清CD8+T 細(xì)胞、CEA 及CA199 水平明顯高于未轉(zhuǎn)移組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。 見表2。

表1 兩組患者血清CD8+T 細(xì)胞、CEA 及CA199 水平對比

表2 轉(zhuǎn)移組和未轉(zhuǎn)移組患者臨床資料對比

2.3 非小細(xì)胞肺癌患者發(fā)生腫瘤轉(zhuǎn)移的Logistic回歸分析 由Logistic 回歸分析結(jié)果顯示，CD8+T細(xì)胞升高的OR 值為3.114 （95%CI：2.568-3.624，P<0.001），CEA 升高的OR 值為2.604 （95%CI：2.138-3.163，P<0.001），CA199 升 高 的OR 值 為2.190（95%CI：1.513-2.819，P<0.001）。 CD8+T 細(xì)胞、CEA 及CA199 升高均與非小細(xì)胞肺癌患者發(fā)生腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān),是非小細(xì)胞肺癌患者發(fā)生腫瘤轉(zhuǎn)移的危險(xiǎn)因素。

表3 非小細(xì)胞肺癌患者發(fā)生腫瘤轉(zhuǎn)移的Logistic 回歸分析

2.4 血清CD8+T 細(xì)胞、CEA 及CA199 水平診斷非小細(xì)胞肺癌患者發(fā)生腫瘤轉(zhuǎn)移的ROC 曲線分析由ROC 曲線分析結(jié)果顯示， 檢測CD8+T 細(xì)胞以32.48%為截?cái)嘀禃r(shí)， 敏感度為72.60%， 特異度為70.11%，準(zhǔn)確度為71.25%。 檢測CEA 以17.18ng/ml 為截?cái)嘀禃r(shí)， 敏感度為79.45%， 特異度為68.97%，準(zhǔn)確度為73.75%。 檢測CA199 以45.61U/ml為截?cái)嘀禃r(shí)，敏感度為65.75%，特異度為52.87%，準(zhǔn)確度為58.75%。 CD8+T 細(xì)胞+CEA+CA199 聯(lián)合檢測以31.91%+16.24ng/ml+43.26U/ml 為截?cái)嘀禃r(shí)，敏感度為93.15%，特異度為94.25%，準(zhǔn)確度為93.75%。 CD8+T 細(xì)胞+CEA+CA199 聯(lián)合檢測的敏感度、特異度及準(zhǔn)確度明顯高于CD8+T 細(xì)胞、CEA和CA199 單獨(dú)檢測，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表4。

3 討論

非小細(xì)胞肺癌增殖分裂速度快、 轉(zhuǎn)移相對較早，導(dǎo)致患者死亡率較高，嚴(yán)重影響了患者的生存質(zhì)量[7]。 當(dāng)前，臨床上診斷非小細(xì)胞肺癌的金標(biāo)準(zhǔn)仍是病理組織學(xué)檢查，但該方法具有創(chuàng)傷性、操作繁瑣的缺點(diǎn)， 因此尋找非小細(xì)胞肺癌的高效診斷方法是臨床醫(yī)生的重點(diǎn)研究方向[8]。 腫瘤標(biāo)志物是反映腫瘤發(fā)生、發(fā)展的指標(biāo)，其高表達(dá)通常提示腫瘤的位置或生長， 在腫瘤的診斷及預(yù)后方面發(fā)揮著重要作用[9]。 有相關(guān)文獻(xiàn)顯示，腫瘤可導(dǎo)致T 細(xì)胞亞群發(fā)揮抑制免疫應(yīng)答的作用， 因而T 細(xì)胞亞群的水平異常， 可造成機(jī)體免疫系統(tǒng)紊亂而發(fā)生病情變化[10,11]。 CD8+T 細(xì)胞是T 細(xì)胞亞群中一個(gè)主要的類型，能分化成細(xì)胞毒性T 細(xì)胞，可以對產(chǎn)生特殊抗原反應(yīng)的目標(biāo)細(xì)胞進(jìn)行殺滅， 可殺死機(jī)體內(nèi)的腫瘤細(xì)胞[12]。 同時(shí)有研究指出，CD8+T 細(xì)胞可作用于B 淋巴細(xì)胞表面上的受體， 從而抑制了B淋巴細(xì)胞與腫瘤抗原的結(jié)合， 因此CD8+T 細(xì)胞的增高說明免疫功能的減弱[13]。黃柱華等人在非小細(xì)胞肺癌患者的腫瘤轉(zhuǎn)移與CD8+T 細(xì)胞數(shù)量關(guān)系的研究中證實(shí)， 發(fā)生腫瘤轉(zhuǎn)移患者組織中CD8+T 細(xì)胞數(shù)量明顯高于腫瘤未轉(zhuǎn)移患者， 提示CD8+T 細(xì)胞數(shù)量對于非小細(xì)胞肺癌患者發(fā)生腫瘤轉(zhuǎn)移具有指導(dǎo)作用[14]。 本研究結(jié)果表明， 實(shí)驗(yàn)組患者血清CD8+T 細(xì)胞水平明顯高于對對照組， 轉(zhuǎn)移組患者血清CD8+T 細(xì)胞水平明顯高于未轉(zhuǎn)移組， 這與上述言論一致， 提示血清CD8+T 細(xì)胞水平可能作為診斷非小細(xì)胞肺癌患者腫瘤轉(zhuǎn)移的有效指標(biāo)。

表4 血清CD8+T 細(xì)胞、CEA 及CA199 水平診斷非小細(xì)胞肺癌患者發(fā)生腫瘤轉(zhuǎn)移的ROC 曲線分析

近年來， 新的腫瘤標(biāo)志物被不斷報(bào)道， 其中CEA、CA199 由于在非小細(xì)胞肺癌患者血清中呈高表達(dá)水平， 與腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)而被臨床醫(yī)生廣泛研究[15,16]。汪碩敏等通過研究證實(shí)，非小細(xì)胞肺癌患者血清CEA、CA199 水平高于健康人群，且與肺癌轉(zhuǎn)移具有相關(guān)性[17]。CEA 是一種具有人類胚胎抗原特性的酸性糖蛋白，是一種廣譜腫瘤標(biāo)志物，在惡性腫瘤中其水平明顯升高， 但其診斷腫瘤的特異性較低[18,19]。CA199 是一種新型腫瘤標(biāo)志物，為細(xì)胞膜上的糖脂質(zhì)，在肺癌、乳腺癌等惡性腫瘤中呈高表達(dá)水平[20]。 本研究結(jié)果表明，實(shí)驗(yàn)組患者血清CEA 及CA199 水平顯著高于對照組， 轉(zhuǎn)移組患者血清CEA 及CA199 水平顯著高于未轉(zhuǎn)移組，提示血清CEA、CA199 水平可在非小細(xì)胞肺癌患者腫瘤轉(zhuǎn)移的診斷中具有重要作用。 由Logistic 回歸分析結(jié)果顯示，CD8+T 細(xì)胞升高的OR 值為3.114（95%CI：2.568-3.624，P<0.001），CEA 升 高 的OR值為2.604 （95%CI：2.138-3.163，P<0.001），CA199升高的OR 值為2.190 （95%CI：1.513-2.819，P<0.001）。 提示CD8+T 細(xì)胞、CEA 及CA199 升高均與非小細(xì)胞肺癌患者發(fā)生腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)， 是非小細(xì)胞肺癌患者發(fā)生腫瘤轉(zhuǎn)移的危險(xiǎn)因素。 應(yīng)用腫瘤標(biāo)志物診斷的優(yōu)勢是創(chuàng)傷性、可重復(fù)、簡便等，切點(diǎn)是特異性較低， 因此可通過聯(lián)合檢測血清腫瘤標(biāo)志物提高診斷的準(zhǔn)確性。 由ROC 曲線分析結(jié)果顯示， 檢測CD8+T 細(xì)胞以32.48%為截?cái)嘀禃r(shí)，敏感度為72.60%， 特異度為70.11%， 準(zhǔn)確度為71.25%。 檢測CEA 以17.18ng/ml 為截?cái)嘀禃r(shí)，敏感度為79.45%，特異度為68.97%，準(zhǔn)確度為73.75%。檢測CA199 以45.61U/ml 為截?cái)嘀禃r(shí)， 敏感度為65.75%， 特異度為52.87%， 準(zhǔn)確度為58.75%。CD8+T 細(xì)胞+CEA+CA199 聯(lián)合檢測以31.91%+16.24ng/mL+43.26U/ml 為截?cái)嘀禃r(shí)， 敏感度為93.15%，特異度為94.25%，準(zhǔn)確度為93.75%。 CD8+T細(xì)胞+CEA+CA199 聯(lián)合檢測的敏感度、 特異度及準(zhǔn)確度明顯高于CD8+T 細(xì)胞、CEA 和CA199 單獨(dú)檢測， 提示CD8+T 細(xì)胞+CEA+CA199 聯(lián)合檢測可有效提高診斷的準(zhǔn)確性。

綜上所述， 血清CD8+T 細(xì)胞、CEA 及CA199水平與非小細(xì)胞肺癌患者腫瘤轉(zhuǎn)移具有相關(guān)性，三者水平升高可能預(yù)示著腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移。 血清CD8+T 細(xì)胞、CEA 及CA199 水平均是診斷非小細(xì)胞肺癌患者腫瘤轉(zhuǎn)移的有效指標(biāo)，且CD8+T 細(xì)胞+CEA+CA199 聯(lián)合檢測可有效提高非小細(xì)胞肺癌患者腫瘤轉(zhuǎn)移診斷的準(zhǔn)確性。