鈉離子通道調(diào)節(jié)蛋白1與肝癌患者3年預(yù)后的相關(guān)性研究

唐巧萍 段志強(qiáng) 喬悾

肝癌在各類腫瘤中發(fā)病率位居第5位，死亡率居于第3位[1]。由于早期缺乏典型癥狀，大部分患者入院就診時(shí)，病情進(jìn)展成中、晚期，增加治療難度與死亡風(fēng)險(xiǎn)。近年來，有研究發(fā)現(xiàn)鈉離子通道調(diào)節(jié)蛋白1(SCNM1)與腫瘤進(jìn)展、轉(zhuǎn)移存在關(guān)聯(lián)[2]。SCNM1可促使腫瘤細(xì)胞中鈣離子濃度改變，從而致其處于暫時(shí)性去極化狀態(tài)，促進(jìn)腫瘤進(jìn)展[3]。本研究旨在分析SCNM1與肝癌患者3年預(yù)后的相關(guān)性，便于對(duì)患者預(yù)后進(jìn)行預(yù)測(cè)，為臨床治療提供依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

資料與方法

一、一般資料

回顧性分析我院2014年2月—2016年2月收治的90例肝癌患者的臨床資料，所有患者均經(jīng)病理穿刺證實(shí)為肝癌。其中男47例，女43例，年齡35～77歲，平均(58.93±11.26)歲；腫瘤直徑：≥5 cm 41例，<5 cm 49例；腫瘤分期：Ⅰ～Ⅱ期52例，Ⅲ～Ⅳ期38例；Child-Pugh分級(jí)：A級(jí)32例，B級(jí)48例，C級(jí)10例；肝硬化：有36例，無54例。

二、納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

(一)納入標(biāo)準(zhǔn) ①經(jīng)病理檢查證實(shí)為肝癌，診斷明確；②取癌組織及癌旁組織檢測(cè)SCNM1表達(dá)水平；③入院前無肝部手術(shù)史與放療、化療史；④病例資料完整。

(二)排除標(biāo)準(zhǔn) ①合并其他惡性腫瘤；②復(fù)發(fā)性腫瘤；③未留聯(lián)系方式，無法進(jìn)行隨訪；④病理標(biāo)本不合格。

三、方法

采用RT-qPCR檢測(cè)法測(cè)定癌組織、癌旁組織的SCNM1表達(dá)水平。(1)提取標(biāo)本總RNA：①取去離子水800 mL加入燒杯內(nèi)，然后取DEPC800 μL加入，制備成DEPC水，封閉，避光下反應(yīng)4 h。將器材、耗材于DEPC水內(nèi)浸泡，將瓶口封閉，過夜。所有耗材均進(jìn)行高壓滅菌，將殘余DEPC水去除，烤干。②將組織標(biāo)本取出，取組織塊50 mg置于玻璃器皿內(nèi)。取Trizol試劑200 μL加入，待徹底研磨后，移至EP管內(nèi)。另取Trizol試劑800 μL對(duì)研磨器予以沖洗，轉(zhuǎn)移液體至EP管內(nèi)，充分混勻，在室溫下反應(yīng)5 min。③取200 μL氯仿加至EP管內(nèi)，振蕩15 min，混合充分，在室溫下反應(yīng)10 min，離心15 min(7500 rpm)。④選取一個(gè)新的EP管，將上層水相移至EP管內(nèi)。⑤取異丙醇500 μL加入，充分混勻，在-20 ℃條件下反應(yīng)20 min，離心1 min(7500 rpm)。⑥棄血清，將沉淀物留取，取提前配制的乙醇溶液1000 μL加至EP管內(nèi)，振蕩、洗滌，離心5 min(7500 rpm)。⑦棄血清，將EP管的管口打開，吹干。⑧取無菌DEPC水20 μL將沉淀溶解，獲取樣本RNA。(2)逆轉(zhuǎn)錄：①常規(guī)對(duì)標(biāo)本進(jìn)行溶解。②取總RNA 1 μg加入EP管內(nèi)，振蕩，充分混勻，短暫離心。③在70 ℃條件下進(jìn)行水浴，時(shí)間為5 min，轉(zhuǎn)入冰上。④依次取5×Buffer 4 μL、RNase抑制劑1 μL、dNTP混合物2 μL加入，振蕩，短暫離心。⑤在37 ℃條件下水浴，時(shí)間為5 min。⑥取逆轉(zhuǎn)錄酶1 μL加入，混勻，短暫離心。⑦在42 ℃條件下水浴1 h。⑧完成逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)后，在70 ℃條件下水浴10 min，反應(yīng)終止，存放于-80 ℃冰箱內(nèi)。(3)PCR反應(yīng)：SCNM1上游引物為CCGTGCAGGCA-AGAAACATC，下游為TTTCCCGTCCCATACCT-GTACT。反應(yīng)條件為98 ℃ 60 s，(98 ℃ 10 s，60 ℃ 30 s，72 ℃ 60 s，42個(gè)循環(huán))，72 ℃ 10 min。根據(jù)2-△△Ct法對(duì)其相對(duì)表達(dá)量進(jìn)行計(jì)算。

四、觀察指標(biāo)

比較癌組織、癌旁組織的SCNM1表達(dá)水平。記錄患者的臨床資料，包括性別、年齡、腫瘤直徑、肝功能分級(jí)、肝硬化，分析SCNM1表達(dá)水平與臨床特征的關(guān)系。利用電話隨訪3年，記錄患者的生存、死亡情況，分析SCNM1表達(dá)于3年預(yù)后的關(guān)系。

五、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

結(jié) 果

一、癌組織、癌旁組織的SCNM1表達(dá)水平比較

癌組織中SCNM1表達(dá)量為(11.64±3.26)，顯著高于癌旁組織的(7.49±2.76)(t=9.217，P=0.000)。

二、SCNM1表達(dá)水平與臨床特征的關(guān)系分析

男性患者癌組織SCNM1表達(dá)量為(10.23±3.95)，與女性患者的(10.15±3.89)比較無顯著差異(t=0.097，P=0.923)。年齡≥60歲患者的SCNM1表達(dá)量為(11.21±2.12)，與年齡<60歲患者的(11.06±2.20)相比無顯著差異(t=0.329，P=0.743)。腫瘤直徑≥5 cm患者的SCNM1表達(dá)量為(10.93±2.12)，顯著高于腫瘤直徑<5 cm患者的(8.23±2.05)(t=6.127，P=0.000)。Child-Pugh A級(jí)患者的SCNM1表達(dá)量為(7.13±1.24)，顯著低于B、C級(jí)患者的(10.45±2.08)、(10.81±2.23)(t=8.245，P=0.000)。有肝硬化患者的SCNM1表達(dá)量為(10.96±2.46)，顯著高于無肝硬化患者的(8.04±1.34)(t=7.266，P=0.000)。

三、不同預(yù)后患者SCNM1表達(dá)分析

通過電話隨訪3年，提示在90例患者中，有43(47.78%)例存活，47(52.22%)例死亡。死亡患者的SCNM1表達(dá)量(10.75±2.37)顯著高于存活患者(7.93±1.76)(t=9.063，P=0.000)。

討 論

本研究發(fā)現(xiàn)與癌旁組織相比，癌組織中的SCNM1表達(dá)量顯著增高，提示其表達(dá)水平上調(diào)與肝癌進(jìn)展可能存在關(guān)聯(lián)。SCNM1是離子通道的重要組成部分，它對(duì)維持機(jī)體活動(dòng)而言意義重大，在腫瘤進(jìn)展中也發(fā)揮著作用。研究表明鈉離子通道可通過濃度門控鈉離子、酸質(zhì)子門控鈉離子、電壓門控鈉離子三類通道被激活，這類通道在多種惡性腫瘤中存在表達(dá)，包括肺癌、前列腺癌、結(jié)腸癌等[4]。另有研究提示SCNM1可促使SCN8A突變表型的表達(dá)發(fā)生變化，從而對(duì)鈉離子通道進(jìn)行調(diào)控，參與腫瘤進(jìn)展[5]。筆者推測(cè)這可能是SCNM1參與肝癌進(jìn)展的重要機(jī)制。

通過分析SCNM1表達(dá)水平與臨床特征的關(guān)系，提示其表達(dá)量與患者腫瘤直徑、腫瘤分期、肝功能分級(jí)、肝硬化情況有關(guān)。而腫瘤直徑腫瘤分期、肝功能分級(jí)以及肝硬化均已被證實(shí)對(duì)肝癌患者預(yù)后的影響非常大[6]。基于此，本次研究隨訪3年，分析SCNM1表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系，提示與生存患者相比，死亡患者的癌組織中SCNM1表達(dá)水平更高。這表明SCNM1表達(dá)量越高，死亡風(fēng)險(xiǎn)越大。既往有研究人員針對(duì)結(jié)直腸癌患者進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)SCNM1在其癌組織中表達(dá)上調(diào)，但具體機(jī)制并未明確[7]。有研究指出SCNM1與癌癥患者新生血管生成存在關(guān)聯(lián)，它能促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞的增殖、分化[8]。筆者推測(cè)SCNM1可能通過促進(jìn)新生血管生成，加重患者病情，導(dǎo)致癌細(xì)胞增殖、分化、轉(zhuǎn)移，從而影響肝癌患者預(yù)后。

綜上，SCNM1在肝癌患者的癌組織中呈高表達(dá)水平，其表達(dá)量與腫瘤直徑、腫瘤分期、肝功能分級(jí)、肝硬化情況有關(guān)，患者SCNM1表達(dá)量越高，則死亡風(fēng)險(xiǎn)越高。此外，本研究也有不足，如僅選取90例患者，樣本量少，未來需擴(kuò)大樣本量對(duì)此予以探討。