甲狀腺乳頭狀癌組織E-cadherin、vimentin的表達及臨床意義

唐振寧，李璐，張朝林，劉奇倫

1.寧夏醫科大學總醫院腫瘤外三科，寧夏 銀川 750004；

2.寧夏醫科大學，寧夏 銀川 750004

甲狀腺癌的發病率近年來在我國逐漸增加[1]，其中乳頭狀癌是甲狀腺癌最常見的病理類型，約占甲狀腺癌的80%。除了原發瘤發病率明顯增加外，甲狀腺乳頭狀癌的局部和遠處轉移發生率同樣呈增加的趨勢，因此研究甲狀腺乳頭狀癌的病理學行為，才能對甲狀腺乳頭狀癌進行更加精準的預防和治療[2]。上皮-間質轉化(epithelial-to-mesenchymal transition，EMT)通常是指細胞通過分子及細胞改變，使得細胞的黏附能力、極性以及上皮標記物的表達水平下降，從而獲得了細胞的活動性、梭形性以及間質樣細胞標記。目前多數研究認為EMT 過程能夠使得腫瘤細胞從瘤體脫落而發生轉移[3]，與此同時EMT 同樣參與了腫瘤的發生、發展以及對于治療的耐受過程[4]。EMT在甲狀腺乳頭狀癌的發生、進展過程中同樣起關鍵作用，但目前對甲狀腺乳頭狀癌EMT的分子標記物及具體機制仍存在爭議[5]。本文擬檢測EMT的關鍵標志物E-鈣黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(vimentin)在甲狀腺乳頭狀癌中的表達情況，并探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年1月1日至12月31日在寧夏醫科大學醫院住院治療，并經術后病理證實的甲狀腺乳頭狀癌患者標本63份，其中獲取癌旁組織標本36份，另取結節性甲狀腺腫患者標本23份。甲狀腺癌患者年齡19~80歲，中位年齡47.5 歲；男性18例，女性45例；淋巴結轉移37例，其中單純Ⅵ區淋巴結轉移20例。根據2002美國癌癥聯合會(AJCC)甲狀腺癌TNM分期，Ⅰ期41例，Ⅱ期1例，Ⅲ期11例，Ⅳa期10例。

1.2 實驗材料 E-cadherin (ZA0565)、Vimentin(ZA0511)兔抗人多克隆抗體購自中杉金橋公司，二抗及DAB試劑盒購于福州邁新生物技術公司

1.3 實驗方法 免疫組織化學使用染色鏈霉素抗生物蛋白-過氧化酶法(streptavidin-perosidase，SP法)。常規取材腫瘤組織、癌旁組織(距離腫瘤組織2 cm)。E-cadherin、Vimentin一抗的工作濃度為1∶100，以磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對照，細胞內出現棕黃色或黃褐色顆粒視為陽性表達，結果根據染色強度和陽性細胞所占百分比綜合判定。染色強度：無色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；陽性細胞所占百分比<5%為0 分，5~25%為1 分，26%~50%為2 分，51%~75%為3 分，>75%為4 分。兩者乘積0~3分為陰性(-)，4~6分為弱陽性(+)，7~9分為中等強度陽性(++)，10~12分為強陽性(+++)。

1.4 統計學方法 應用SPSS17.0 統計軟件進行數據分析，計數資料比較采用χ2檢驗或Fisher 確切概率法檢驗，以P<0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 E-cadherin 在不同類型甲狀腺組織中的表達 E-cadherin 陽性染色部位為細胞膜，胞膜呈連續棕黃色、棕褐色線性分布，見圖1。63例甲狀腺乳頭狀癌組織中E-cadherin 表達陽性45 例(71.43%)；36 例癌旁組織中E-cadherin表達陽性7例(19.44%)；23例結節性甲狀腺腫組織中E-cadherin表達陽性4例(17.39%)，甲狀腺乳頭狀癌E-cadherin 蛋白表達高于癌旁組織，差異有統計學意義(P<0.05)；癌旁組織E-cadherin蛋白表達與結節性甲狀腺腫比較差異無統計學意義(P>0.05)；甲狀腺乳頭狀癌E-cadherin 蛋白表達高于結節性甲狀腺腫，差異有統計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 E-cadherin在不同甲狀腺組織中的陽性率比較(例)

圖1 E-cadherin 在甲狀腺乳頭狀癌組織中的表達(×100，箭頭所指為陽性細胞)

2.2 Vimentin 在不同類型甲狀腺組織中的表達 Vimentin陽性染色部位為細胞漿，呈棕黃色、棕褐色巢團狀或片狀分布的顆粒，見圖2。Vimentin 在63例甲狀腺乳頭狀癌組織中表達陽性53例(84.13%)，36例癌旁組織中Vimentin表達陽性27例(75.00%)；23例結節性甲狀腺腫組織中E-cadherin 表達陽性17 例(73.91%)，三組Vimentin陽性率差異無統計學意義(χ2=0.702，P=0.704)，見表2。

圖2 Vimentin在甲狀腺乳頭狀癌組織中的表達(×100，箭頭所指為陽性細胞)

表2 Vimentin在不同甲狀腺組織中陽性率比較

2.3 不同臨床特征甲狀腺乳頭狀癌患者E-cadherin、Vimentin 表達陽性率比較 不同年齡、不同腫瘤大小以及有無淋巴結轉移的甲狀腺乳頭狀癌患者E-cadherin、Vimentin陽性率的差異均無統計學意義(P>0.05)，見表3。

表3 不同臨床特征甲狀腺乳頭狀癌患者E-cadherin、Vimentin陽性率比較

3 討論

甲狀腺癌的發病近幾十年間在世界范圍內明顯增加，其中甲狀腺乳頭狀癌的發病率的增加在各種類型中最為顯著[6]。雖然甲狀腺乳頭狀癌與其他類型的甲狀腺癌相比，具有發展慢、療效好和預后好的特點，但淋巴結轉移與遠處臟器轉移仍然是影響甲狀腺乳頭狀癌患者生存及生活質量的主要因素，有報道顯示約有15%甲狀腺乳頭狀癌淋巴結轉移患者伴有局部侵犯并對傳統治療耐受[7-9]。目前術前可以通過超聲或增強CT 來評估甲狀癌患者的頸部淋巴結情況，但這些手段的靈敏度僅有23%~67%[9]。傳統的甲狀腺乳頭狀癌治療方式包括：手術、甲狀腺激素治療以及核醫學治療，上述的治療方式對人體都具有一定的副作用。因此了解甲狀腺乳頭狀癌的發生及轉移機制，進而對探索甲狀腺乳頭狀癌的預防及治療新手段有著重要的意義。

多數研究發現：腫瘤細胞能夠通過EMT,改變其細胞黏附分子的表達，從而獲得移動和侵襲特性，促使腫瘤細胞由原發癌遷移播散[10]。EMT 的作用已在多數實體腫瘤的演進中得到證實，與腫瘤的發生、轉移、耐藥以及腫瘤干細胞的形成有著密切關系[11-12]。由于甲狀腺乳頭狀癌生物學行為具有特殊性，EMT在甲狀腺乳頭狀癌的作用及機制目前仍存在爭議[13]。進一步了解EMT在甲狀腺癌發生及轉移過程中作用和機制，通過抑制這一轉化過程，達到防治的目的，不失為甲狀腺癌防治的新策略。

目前的研究主要通過上皮或間質標記物表達的改變來確定EMT 發生，上皮特性的標記物包括Ecadherin，閉鎖蛋白(occludins)等，vimentin、N-鈣黏蛋白(N-cadherin)則是間質特性的標記物[10]。本研究選取常見的標志性標記分子E-cadherin 和vimentin 作為研究對象，探討兩者在甲狀腺癌組織中的表達及意義。鈣粘蛋白是一個鈣相關的細胞黏附糖蛋白，是由鈣粘 蛋白1 基 因 編 碼，E-cadherin 通 過β-catenin 和α-catenin 通路調節細胞骨架[14]。E-cadherin 的表達和下調通常是由遺傳、體細胞突變、啟動子的甲基化以及一些轉錄因子的抑制造成的[15]。EMT 過程中，Ecadherin 的表達通常會表現降低。本研究結果顯示，甲狀腺乳頭狀癌組織中的E-cadherin陽性表達率高于癌旁組織和結節性甲狀腺腫組織，與國外研究結果一致[16]。研究顯示E-cadherin 表達缺失，會增加甲狀腺癌局部復發率和遠處轉移率[17]，E-cadherin的表達與甲狀腺乳頭狀癌患者淋巴結轉移、臨床分期相關，與患者的性別、年齡及腫瘤的大小無關[18]。ZHOU 等[19]近期對46 項研究進行meta 分析顯示：E-cadherin 的表達和甲狀腺淋巴結轉移、分化程度以及TNM 分期相關。而SETHI等[16]研究則發現，E-cadherin的表達與甲狀腺癌包膜侵犯、淋巴結轉移轉移無關。本研究結果表明甲狀腺癌乳頭狀癌患者E-cadherin的表達與發病年齡、腫瘤大小、淋巴結轉移無關。MITCHELL等[2]研究同樣發現，E-cadherin的表達與腫瘤大小、腺體外侵犯等預后相關因子均無關，認為甲狀腺乳頭狀癌EMT并不通過缺失E-cadherin而發生，其發生機制可能與其他腫瘤不同。也有研究表明E-cadherin可能與甲狀腺癌的分化程度有關，分化型甲狀腺癌向未分化型甲狀腺癌轉化的過程中，E-cadherin蛋白的表達逐步減少[15]。

在EMT 過程中，細胞骨架蛋白通過重組，使得細胞與間質充分接觸，增加細胞與周圍細胞分離并發生遷移和侵襲的能力。vimentin是細胞骨架蛋白中一個重要成員，是EMT的重要因子。一些細胞學的研究發現vimentin 參與了甲狀腺癌EMT 過程[4]，也有文獻報道甲狀腺乳頭狀癌vimentin 的表達與腫瘤的分期、淋巴結轉移相關，與患者年齡、性別、腫瘤大小無關[20]。本研究結果顯示，vimentin的表達在甲狀腺乳頭狀癌、癌旁組織以及結節性甲狀腺組織中無顯著性差異，與甲狀腺良惡性病變與否無關。同時本研究結果表明，vimentin 的表達與甲狀腺乳頭狀癌的大小、患者年齡及淋巴結轉移無關，與CALANGIU等[21]的研究結果相符。因此vimentin表達在甲狀腺乳頭狀癌的意義仍然需要進一步研究。也有學者報道，經典和濾泡型甲狀腺乳頭狀癌的vimentin表達水平高于高細胞型乳頭狀癌[21]，提示今后的研究需要考慮甲狀腺乳頭狀癌的組織學亞型因素。

綜上所述，E-cadherin 可能參與了甲狀腺乳頭狀癌的形成過程。本研究中未發現vimentin在甲狀腺乳頭狀癌和良性病變的差異，研究結果未提示E-cadherin、vimentin表達與甲狀腺乳頭狀癌的大小、患者年齡及淋巴結轉移相關，今后需要進一步擴大樣本量，或采用其他研究方法進一步進行驗證。