錯(cuò)配修復(fù)基因蛋白表達(dá)與老年子宮內(nèi)膜癌患者臨床病理特征的相關(guān)性

秦慧芬

(包頭醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，內(nèi)蒙古 包頭 014010)

子宮內(nèi)膜癌是女性常見(jiàn)的生殖系統(tǒng)惡性腫瘤疾病之一，在全部女性惡性腫瘤疾病中占比為4%～7%，近幾年發(fā)病率逐年升高，且越來(lái)越趨于年輕化，死亡率也在不斷攀升〔1〕。

子宮內(nèi)膜癌又被稱(chēng)作Lynch綜合征相關(guān)性子宮內(nèi)膜癌，其是除結(jié)直腸癌、卵巢癌等原發(fā)腫瘤之外，最為常見(jiàn)的與Lynch綜合征相關(guān)的家族性腫瘤〔2〕。Lynch綜合征是遺傳性非息肉性結(jié)直腸癌，是一種染色體顯性遺傳性疾病，主要由DNA錯(cuò)配修復(fù)基因(MMR)突變導(dǎo)致發(fā)病〔3〕。因子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展可能與Lynch綜合征有關(guān)，故有研究認(rèn)為，MMR基因突變可能是導(dǎo)致子宮內(nèi)膜癌發(fā)生的關(guān)鍵〔4〕；且相關(guān)指南推薦可以將免疫組織化學(xué)法測(cè)定的MMR蛋白情況作為子宮內(nèi)膜癌的普查手段，可以幫助患者獲益〔5〕。但這一觀點(diǎn)至今未明確，且相關(guān)的研究也不多見(jiàn)。本研究觀察老年子宮內(nèi)膜癌患者M(jìn)MR蛋白表達(dá)情況，并分析MMR蛋白與其臨床病理特征的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1納入對(duì)象及標(biāo)準(zhǔn) 回顧性分析包頭醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院2015年6月至2019年6月經(jīng)手術(shù)治療并在術(shù)后經(jīng)病理確診為子宮內(nèi)膜癌老年患者112例臨床資料，年齡60～85歲，平均(70.12±5.11)歲；主要癥狀表現(xiàn)：91例絕經(jīng)后陰道出血、21例陰道出血淋漓不斷；病理類(lèi)型：94例子宮內(nèi)膜樣癌、7例黏液腺癌、4例漿液性癌癥、7例透明細(xì)胞癌；臨床分期〔6〕：91例Ⅰ期、11例Ⅱ期、10例Ⅲ期。

患者病歷資料均完整，均接受全子宮切除術(shù)治療，術(shù)后經(jīng)組織病理學(xué)診斷確診，患者年齡≥60歲，術(shù)前均未接受放化療、生物治療等輔助治療，所選取的內(nèi)膜標(biāo)本組織均為甲醛溶液固定石蠟包埋組織。排除：合并其他惡性腫瘤疾病者、術(shù)前接受其他輔助治療者、合并重要臟器功能不全者、合并其他可能對(duì)免疫組化檢查結(jié)果有影響的血液系統(tǒng)疾病、免疫系統(tǒng)疾病者。本研究的設(shè)計(jì)與開(kāi)展符合倫理學(xué)規(guī)定，病歷資料的采集與閱覽、組織樣本的收集與使用均得到患者與家屬的同意。

1.2主要試劑 試驗(yàn)所需試劑盒均由北京中山生物技術(shù)有限公司提供，包括鼠抗人mut1同源物(MLH1)、MLH2、MLH6、減數(shù)分裂后分離增強(qiáng)蛋白(PMS)2單克隆抗體、免疫組化檢測(cè)試劑盒、顯色試劑盒。試驗(yàn)所需試劑包括磷酸鹽緩沖液、蘇木素染液、伊紅染色液。

1.3主要儀器 德國(guó)MEDITE公司提供的MEDITE A550型切片機(jī)、江蘇同君科技提供的DHP-9052型恒溫培養(yǎng)箱、西門(mén)子提供的BCD-280W型電冰箱、奧林巴斯提供的BX53型顯微成像系統(tǒng)、廣州康邁醫(yī)療器械提供的LX-B型醫(yī)用高壓鍋。

1.4具體操作方法 首先將選擇石蠟包埋組織4 μm切片，標(biāo)本組織經(jīng)蘇木精-伊紅(HE)染色，按照相關(guān)步驟染色結(jié)束后封片。采用免疫組化法測(cè)定，并使用已經(jīng)判斷為陽(yáng)性的切片組織做空白對(duì)照實(shí)驗(yàn)，使用每一種抗體特異性表達(dá)組織切片作為陽(yáng)性對(duì)照，染色步驟主要包括脫蠟、水化、抗原修復(fù)、切片加阻斷劑孵育、去除緩沖液、去除血清、去除緩沖液、自來(lái)水沖洗顯色、蘇木素復(fù)染、封片、光學(xué)顯微鏡觀察并拍照保存。

1.5免疫組化法結(jié)果判讀 MMR蛋白在細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞核呈棕褐色著色為陽(yáng)性表達(dá)(圖1)，反之則為陰性表達(dá)。MLH1、MLH2、MLH6、PMS2中至少1項(xiàng)著色的陰性便可確定其屬于表達(dá)缺失。陽(yáng)性對(duì)照：子宮內(nèi)膜正常腺上皮、間質(zhì)細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、濾泡生發(fā)中心均為陽(yáng)性表達(dá)。

MLH1

MLH2

PMS2

MLH6

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)、秩和檢驗(yàn)及Spearman相關(guān)性分析。

2 結(jié) 果

2.1MMR蛋白在老年子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá) 112例子宮內(nèi)膜癌組織中，MLH1、MLH2、MLH6、PMS2 4種蛋白同時(shí)表達(dá)者83例(74.11%)，均為散發(fā)癌；至少有1種MMR蛋白表達(dá)缺失者29例(25.89%)，為可疑的Lynch綜合征。29例缺失的MMR蛋白包括12例MLH1/PMS2，占比41.38%；7例MLH2/MLH6，占比24.14%；5例MLH6，占比17.24%；4例PMS2，占比13.79%；1例MLH1/PMS2，占比3.45%。

2.2老年子宮內(nèi)膜癌患者不同臨床病理特征MMR蛋白缺失情況比較 老年子宮內(nèi)膜癌患者不同年齡段、不同分化程度、不同肌層浸潤(rùn)深度、不同病理類(lèi)型、不同脈管內(nèi)癌栓情況中MMR蛋白缺失情況比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；累及子宮下段者、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者、病理分期為Ⅲ期者M(jìn)MR蛋白缺失率高于其他未累及子宮下段者、未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者及病理分期為Ⅰ～Ⅱ期者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 老年子宮內(nèi)膜癌患者不同臨床病理特征MMR蛋白缺失情況〔n(%)〕

2.3MMR蛋白與老年子宮內(nèi)膜癌患者主要臨床病理特征的相關(guān)性 將差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的臨床病理特征納入，包括累及子宮下段、臨床分期為Ⅲ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，老年子宮內(nèi)膜癌患者M(jìn)MR蛋白與累及子宮下段、病理分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均呈正相關(guān)(r=0.429、0.379、0.353，均P<0.001)。即老年子宮內(nèi)膜癌患者檢出MMD蛋白缺失可能預(yù)示著腫瘤累及子宮下段、病理分期高、淋巴結(jié)發(fā)生轉(zhuǎn)移。

3 討 論

Lynch綜合征又被稱(chēng)作遺傳性非息肉性結(jié)直腸癌，是一種因編碼MMR基因異常或突變導(dǎo)致的染色體顯性遺傳病，以對(duì)結(jié)直腸癌及其他某些腸癌惡性腫瘤(卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌等)的易感性為主要表現(xiàn)〔6，7〕。在全部結(jié)直腸癌患者中有大約20%以微衛(wèi)星不穩(wěn)定為主要表現(xiàn)，與女性子宮內(nèi)膜癌關(guān)系最為密切，故子宮內(nèi)膜癌也多稱(chēng)之為L(zhǎng)ynch綜合征相關(guān)性子宮內(nèi)膜癌。Lynch綜合征相關(guān)性子宮內(nèi)膜癌與散發(fā)性子宮內(nèi)膜癌不同，其終身患病率高達(dá)15%～60%，在全部子宮內(nèi)膜癌中占比為2%～6%，嚴(yán)重威脅女性生命安全，通常這類(lèi)患者若發(fā)現(xiàn)較早或檢出后診斷為低級(jí)別，多預(yù)后較好；反之，若患者已經(jīng)發(fā)生轉(zhuǎn)移或?qū)儆诟呒?jí)別癌變則預(yù)后較差，故疾病的早期篩查、診斷與治療極為關(guān)鍵〔8～10〕。

近年來(lái)，隨著國(guó)內(nèi)外基因組測(cè)序、微衛(wèi)星不穩(wěn)定、免疫組化等方法的出現(xiàn)與應(yīng)用，子宮內(nèi)膜癌的早期篩查與檢出率大大提高，其中免疫組織化學(xué)染色法成為最主要的子宮內(nèi)膜癌患者M(jìn)MR蛋白檢測(cè)方法〔11〕。目前與MMR基因相關(guān)的蛋白主要包括MLH1、MLH2、MLH6及PMS2，且以MLH1、MLH2研究相對(duì)多見(jiàn)。Banno〔12〕指出，在子宮內(nèi)膜癌患者中MMR蛋白的缺失率接近20%。亞洲人群的MMR蛋白缺失則主要以MLH1缺失較常見(jiàn)〔13〕。本研究顯示，MMR蛋白缺失率略高于文獻(xiàn)報(bào)道中的20%〔12〕，缺失情況以MLH1/PMS2配對(duì)表達(dá)缺失占主要比重，其次為MLH2/MLH6，較少見(jiàn)MLH6與PMS2單獨(dú)表達(dá)缺失，產(chǎn)生這一結(jié)果的原因可能與本次研究的類(lèi)型(回顧分析)有關(guān)，石蠟包埋切片均為封存較長(zhǎng)的組織，檢測(cè)結(jié)果可能與實(shí)際有一定出入，加之納入的樣本量相對(duì)較少，且均為老年患者，故可能無(wú)法很好地代表實(shí)際情況，針對(duì)該局限還應(yīng)在未來(lái)展開(kāi)前瞻性、大樣本的研究加以驗(yàn)證。但整體而言，本研究中所得子宮內(nèi)膜癌患者整體MMR蛋白表達(dá)缺失率基本接近于既往研究〔12〕，仍具有一定的臨床價(jià)值。無(wú)刺激素刺激癥狀、伴或不伴不規(guī)則陰道出血等均是Lynch綜合征相關(guān)性子宮內(nèi)膜癌主要臨床表現(xiàn)，子宮內(nèi)膜癌是其常見(jiàn)病理類(lèi)型，且分化級(jí)別多為高分化，宮體下段是病變好發(fā)部位，但一般不會(huì)累及宮頸內(nèi)口〔14〕。研究發(fā)現(xiàn)，累及子宮下段的子宮內(nèi)膜癌易出現(xiàn)與腫瘤分化程度各異的脈管內(nèi)癌栓及深肌層浸潤(rùn)，且在檢測(cè)其MRR蛋白表達(dá)缺失時(shí)以MLH1突變常見(jiàn)〔15〕。本研究顯示，老年子宮內(nèi)膜癌MMR蛋白表達(dá)缺失者更容易累及子宮下段，這類(lèi)患者臨床分期更高，且更容易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，均以MLH1表達(dá)缺失常見(jiàn)，與郭駿輝等〔16〕結(jié)果一致。在年齡方面，He等〔17〕進(jìn)行的一項(xiàng)相關(guān)研究中發(fā)現(xiàn)，年齡<50歲的子宮內(nèi)膜癌患者，若其具有Lynch綜合征家族史，其檢出MMR蛋白表達(dá)缺失的情況遠(yuǎn)遠(yuǎn)多于無(wú)家族史者，表明年輕子宮內(nèi)膜癌患者M(jìn)MR蛋白缺失情況更為常見(jiàn)。但在本研究中，不同年齡段的子宮內(nèi)膜癌患者M(jìn)MR蛋白表達(dá)缺失率比較未見(jiàn)顯著差異，這可能與本研究納入樣本均為老年患者有關(guān)。還有研究指出〔18〕，MMR蛋白表達(dá)缺失可能與腫瘤肌層浸潤(rùn)的深度相關(guān)，但在本研究中未見(jiàn)不同肌層浸潤(rùn)深度患者在MMR蛋白表達(dá)缺失方面的差異，推測(cè)可能與本研究納入樣本量較少或不同患者地區(qū)分布有關(guān)，故應(yīng)進(jìn)一步行大樣本、前瞻性的研究加以驗(yàn)證說(shuō)明。

綜上所述，MMR蛋白表達(dá)異常(缺失)與老年子宮內(nèi)膜癌患者病理分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理特征相關(guān)，可考慮將其輔助用于老年子宮內(nèi)膜癌初步篩選，利于疾病的早期篩查與診斷。