E鈣黏蛋白和骨橋蛋白在侵入性胎盤組織中水平的表達和意義

趙明陽,劉亞梅,宋學薇,孫 佳,保秀翠,胡 鑫,紀江海,閆 芳

侵入性胎盤是由于胎盤種植部位的子宮內膜缺損或發育不良，導致胎盤絨毛直接種植在子宮肌層甚至深入肌層的病理現象[1-2]。根據侵入的深度可分為粘連性胎盤(侵及淺肌層)、植入性胎盤(侵及深肌層)和穿透性胎盤(穿透子宮壁達子宮漿膜層甚至侵入鄰近器官)[3-4]。侵入性胎盤是產后出血發生的重要原因之一[5]。

近年來，隨著社會經濟的發展、人們生育觀念的變化，剖宮產、人工流產等子宮操作越來越多，侵入性胎盤的發生率也越來越高，該病對產婦及其胎兒十分不利。因此，本研究探討了E鈣黏蛋白和骨橋蛋白在侵入性胎盤組織中水平的表達和意義，旨在為臨床診治提供依據。現報告如下。

1 資料和方法

1.1納入排除標準

1.1.1納入標準：①侵入性胎盤患者根據病史、臨床表現、實驗室檢查、影像學檢查等，符合其診斷標準[6]。正常晚期妊娠婦女無自然流產、死胎死產等不良妊娠史，本次妊娠經B超證實為宮內晚期妊娠。②納入者平素月經規律，月經量、質、色正常。對胎盤組織取材知情同意并簽署同意書，本研究經醫院倫理委員會批準。

1.1.2排除標準：合并妊娠高血壓綜合征、妊娠期糖尿病、心臟病、子癇、胎盤前置、胎膜早破等妊娠期并發癥者。患嚴重心腦血管疾病、肝腎功能異常、內分泌系統、血液系統、惡性腫瘤等疾病者。妊娠期吸煙、飲酒史者及口服藥物史者。

1.2一般資料 選取2017年4月—2019年4月于本院婦產科住院待產的48例侵入性胎盤患者為觀察組，同時期待產的41例健康晚期妊娠孕婦為對照組，將89例納入者娩出的胎盤組織行免疫組化檢測E鈣黏蛋白和骨橋蛋白表達水平。對照組年齡22～30(26.54±2.81)歲；孕周36～41(37.96±1.83)周；妊娠次數0～3(1.16±0.88)次。觀察組年齡23～32(27.17±2.59)歲；孕周34～40(37.15±2.46)周；妊娠次數1～3(1.31±0.75)次。觀察組根據其侵入的深度可分為粘連性胎盤組和植入性胎盤組。粘連性胎盤組31例，年齡(28.31±2.97)歲，孕周(37.39±2.94)周；妊娠次數(1.24±0.62)次。植入性胎盤組17例，年齡為(26.90±2.77)歲，孕周(36.95±2.52)周；妊娠次數(1.49±0.92)次。觀察組和對照組，粘連性胎盤組和植入性胎盤組在年齡、孕周、孕次方面比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。見表1和表2。

表1 觀察組和對照組孕婦一般狀況比較

注：觀察組為侵入性胎盤患者，對照組為正常晚期妊娠的孕婦

表2 植入性胎盤和粘連性胎盤孕婦一般情況比較

1.3方法

1.3.1主要試劑：①骨橋蛋白測定：一抗為兔抗骨橋蛋白單克隆抗體，1∶150，由北京中杉金橋生物技術有限公司提供；二抗、染色液二氨基聯苯胺溶液，均由DAKO公司提供。②E鈣黏蛋白測定：一抗為鼠抗人E鈣黏蛋白單克隆抗體，1∶60，由北京中杉金橋生物技術有限公司提供。

1.3.2測定方法：①骨橋蛋白測定采用En Vision二步法進行，分別取對照組胎盤母面中間帶部分胎盤組織和觀察組胎盤母面侵入母體子宮內膜肌層部分的胎盤組織各2塊，每塊約1 cm×1 cm×1 cm大小，避開出血、壞死、鈣化部分，沖洗、脫水，石蠟包埋，取5 μm厚度切片。常規脫蠟、水化，于pH 6.0乙二胺四乙酸液中高溫抗原修復2 min，PBS液沖洗，滴加一抗，37℃孵育60 min，滴加二抗，孵育30 min，二氨基聯苯胺溶液顯色。陰性參考為以一抗稀釋液代替一抗的結果。②E鈣黏蛋白測定采用En Vision二步法檢測，取石蠟切片常規脫蠟、水化，高溫抗原修復，滴加一抗，孵育60 min。陰性參考為以一抗稀釋液代替一抗的結果。

1.3.3陽性結果標準：①骨橋蛋白在光學顯微鏡下觀察，細胞質被染成黃色、棕色或棕褐色的細胞為陽性[7-8]。每張切片隨機選取5個視野，計算每個視野的陽性細胞數目。陽性標準按陽性細胞數目及染色濃度比較：陽性細胞<25%或細胞無顯色為0分；陽性細胞數目26%～50%或黃色為1分；陽性細胞數目50%～75%或棕色為2分；陽性細胞數目>75%或棕褐色為3分。從0～6分計算每例綜合評分，0分為陰性，1～2分為弱陽性，3～4分為陽性，5～6分為強陽性。②E鈣黏蛋白在光學顯微鏡下觀察，細胞質被染成淡黃色、棕黃色或棕褐色的細胞為陽性[9]。每張切片隨機選取5個視野，計算每個視野的陽性細胞數目。陽性標準按陽性細胞數目及染色濃度比較：陽性細胞<5%或細胞無顯色為0分；陽性細胞數目6%～25%或淡黃色為1分；陽性細胞數目26%～50%或棕黃色為2分；陽性細胞數目51%～75%或棕褐色為3分；陽性細胞數目>76%為4分。從0～7分計算每例綜合評分，0～1分為陰性，2～3分為弱陽性，4～5分為陽性，6～7分為強陽性。陽性率=(弱陽性+陽性+強陽性)例數/總例數×100%

2 結果

2.1觀察組與對照組胎盤組織中骨橋蛋白和E鈣黏蛋白的表達情況比較 觀察組骨橋蛋白陽性表達率顯著高于對照組，差異有統計學意義(P<0.01)。見表3。觀察組E鈣黏蛋白陽性表達率顯著低于對照組，差異有統計學意義(P<0.01)。見表4。

注：觀察組為侵入性胎盤患者，對照組為正常晚期妊娠的孕婦；與對照組比較，bP<0.01

表4 觀察組與對照組孕婦胎盤組織中E鈣黏蛋白的表達情況比較[例(%)]

注：觀察組為侵入性胎盤患者，對照組為正常晚期妊娠的孕婦；與對照組比較，bP<0.01

2.2不同類型侵入性胎盤E鈣黏蛋白和骨橋蛋白的表達情況比較 粘連性胎盤組骨橋蛋白陽性表達率低于植入性胎盤組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表5。粘連性胎盤組E鈣黏蛋白陽性表達率高于植入性胎盤組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表6。

表5 不同類型侵入性胎盤骨橋蛋白的表達情況比較[例(%)]

注：與植入性胎盤組比較，aP<0.05

表6 不同類型侵入性胎盤E鈣黏蛋白的表達情況比較[例(%)]

注：與植入性胎盤組比較，aP<0.05

2.3E鈣黏蛋白和骨橋蛋白在侵入性胎盤組織中表達的相關性 在48例侵入性胎盤組織中，E鈣黏蛋白和骨橋蛋白的表達水平呈負相關(r=-0.569,P<0.05)。

3 討論

胚胎發育及胎兒生長過程中，正常妊娠維持的重要環節是胎盤的形成與母胎循環的建立[10]。胎盤絨毛滋養細胞對母體組織的侵襲是有節制的，其通過對排異反應的抵御,從母體吸收營養供給胚胎，幫助完成受精卵著床、植入和生長的過程。妊娠期的子宮內膜發生蛻膜化反應形成蛻膜層，既可作為通道供給胎兒發育所需的營養物質，亦可抵御絨毛滋養細胞對母體的過度侵襲行為。當子宮內膜損傷或發育不良時，缺乏蛻膜層的屏障，絨毛滋養細胞增生和侵襲行為不受控制，胎盤侵入種植于子宮肌層深部，甚至穿透子宮表面漿膜層，形成穿透性胎盤。

骨橋蛋白介導細胞間黏附、細胞遷移及細胞外基質的相互作用，具有促使腫瘤發生發展、抗炎、損傷修復的作用[11-12]。骨橋蛋白在子宮內膜和胎盤組織中表達，參與受精、胚胎著床、胎盤形成、母胎界面黏附、信號轉導以及母胎免疫調節等生殖的全過程[13]。細胞因子、細胞外基質、黏附分子共同調控著絨毛滋養細胞的侵襲行為，形成動態平衡。平衡一旦被打破，則可出現滋養細胞侵襲行為異常，發生病理妊娠[14]。本研究結果顯示，骨橋蛋白在正常妊娠胎盤組織的陽性表達率為21.95%，在侵入性胎盤組織的陽性表達率為77.08%，表明侵入性胎盤組織中骨橋蛋白高表達，滋養細胞侵襲能力上調，侵襲過度。骨橋蛋白在粘連性胎盤組織的陽性表達率為67.74%，在植入性胎盤組織的陽性表達率為94.12%，表明骨橋蛋白表達越高，滋養細胞侵襲能力越強，侵入子宮內膜肌層越深。

E鈣黏蛋白是鈣依賴性跨膜糖蛋白，屬于黏附分子家族，具有介導黏附同種細胞、使上皮層細胞的完整性和極性得到維持[15-16]，E鈣黏蛋白的表達水平升高，細胞間黏附能力增強，可降低細胞的遷移及浸潤能力[17]，表達水平下降則加強了細胞遷移和浸潤能力。文獻報道，E鈣黏蛋白的表達水平升高與胚胎停育、自然流產等病理妊娠的發生有密切的關聯[18]。本研究結果顯示，E鈣黏蛋白在正常妊娠胎盤組織的陽性表達率為100.00%，在侵入性胎盤組織的陽性表達率為85.42%；在粘連性胎盤組織的陽性表達率為93.55%，在植入性胎盤組織的陽性表達率為70.59%。說明E鈣黏蛋白的表達水平降低促使了侵入性胎盤的發生。這可能與細胞間黏附能力減弱，滋養細胞浸潤能力增強有關[19]。本研究結果顯示，48例侵入性胎盤組織中，E鈣黏蛋白和骨橋蛋白的表達呈負相關。表明E鈣黏蛋白表達越低，骨橋蛋白表達越高，則滋養細胞侵襲能力越高，促使侵入性胎盤的發生。

綜上所述，侵入性胎盤患者胎盤組織中骨橋蛋白陽性率高于正常妊娠者、E鈣黏蛋白低于正常妊娠者，兩者呈負相關，可影響侵入性胎盤的發生。