多波長(zhǎng)高效液相色譜法測(cè)定杜仲3 類有效成分的價(jià)值探討

加米拉·巴依木拉提

（阿勒泰地區(qū)哈薩克醫(yī)醫(yī)院 新疆 阿勒泰 836500）

杜仲又叫膠樹，屬于杜仲科杜仲屬[1]。樹皮呈灰褐色且粗糙。葉呈橢圓形，薄革質(zhì)。適宜在濕潤(rùn)的氣候和光照充足的環(huán)境，有較強(qiáng)得抗凍性、抗寒性。本次研究中，分析探討采用多波長(zhǎng)高效液相色譜法測(cè)定杜仲3 類有效成分的價(jià)值。具體如下：

1.儀器與試劑

1.1 儀器

超聲波清洗器（功率250W，頻率25kHz），F(xiàn)Z102 型微型植物粉碎機(jī)，分析天平利用瑞士的Piecisa，高效液相色譜儀用戴安UltiMate。

1.2 試劑

將綠原酸、松脂醇二葡萄糖苷、京尼平苷酸、桃葉珊瑚苷作為對(duì)照品。杜仲皮，二次蒸餾水，甲醇。

2.方法

2.1 對(duì)照品溶液的制備

取綠原酸、松脂醇二葡萄糖苷、京尼平苷酸、桃葉珊瑚苷適量，將其放置于10ml 的容量瓶中，加入色譜純甲醇溶液將其溶解，并進(jìn)行有效的稀釋至刻度，使其京尼平苷酸的濃度達(dá)到1.2g/l，桃葉珊瑚苷的濃度為0.7g/l、松脂醇二葡萄糖苷的濃度為0.5g/l、綠原酸的濃度為3.3g/l 的對(duì)照品混合儲(chǔ)備液，將其進(jìn)行冷藏。

2.2 供試品的制備

杜仲藥材50g，利用FZ102 型微型植物粉碎機(jī)將其研制為粉末狀，去2g 粉末將其放置于75%溶液60ml 的甲醇中，對(duì)其進(jìn)行稱重，在用超聲提取30min，冷置后在進(jìn)行稱重，有效的補(bǔ)足減少的量[2]。再對(duì)其過濾，將過濾的藥渣重復(fù)操作。經(jīng)過兩次過濾后，減壓濃縮，用相同濃度的甲醇溶液進(jìn)行定容20ml。搖勻后以0.45um 微孔濾膜過濾，可的其供試品。

2.3 色譜具備的條件

C18 色譜柱（220mm×4.6mm，10um）；甲醇-0.1%磷酸水梯度洗脫作為流動(dòng)相，流速為0.7ml/min；柱溫為26℃；檢測(cè)的波長(zhǎng)為 200nm，220nm，260nm，280nm。

3.結(jié)果與分析

3.1 優(yōu)化提取條件

3.1.1 提取方法：利用超聲法和回流法 超聲法：將2g 的杜仲藥材粉末放置于100ml 的錐形瓶?jī)?nèi)，將其在哪找有效的方法以75%的甲醇溶液作為提取溶劑進(jìn)行操作。回流法：將2g 的杜仲藥材粉末放置于100ml 的圓底燒杯中，加入適當(dāng)?shù)募状既芤海瑢⑵浠亓?0min 后進(jìn)行過濾，藥渣重復(fù)操作，經(jīng)過兩次過濾利用相同濃度的甲醇溶液定容至20ml，搖勻并且以0.45um 微孔濾膜進(jìn)行有效的過濾。便可得到。

3.1.2 超聲提取條件優(yōu)化 取將2g 的杜仲藥材粉末，共有九份。對(duì)超聲提取杜仲主要成份的時(shí)間、次數(shù)、料液比以及溶液濃度進(jìn)行比較各因素水平

表 正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)因素水平

3.2 色譜條件的優(yōu)化

3.2.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇：對(duì)樣品采用PDA-3000 光電二極管進(jìn)行全波長(zhǎng)的掃描，其作用是減少干擾，增強(qiáng)吸收。對(duì)四種物質(zhì)的光譜性質(zhì)進(jìn)行有效利用。避免其單波檢測(cè)的局域性，對(duì)其物質(zhì)進(jìn)行有效的定量分析。

3.2.2 流動(dòng)相的優(yōu)化 實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用對(duì)其梯度洗脫進(jìn)行不斷的改進(jìn)使其流動(dòng)相比例具有準(zhǔn)確性，達(dá)到杜仲有效成份檢測(cè)的準(zhǔn)確性。結(jié)果表明，當(dāng)甲醇的水位流動(dòng)相時(shí)，出峰較多，分離好，但有掃尾的現(xiàn)象。

3.3 方法學(xué)考證

3.3.1 線性關(guān)系考察 對(duì)四種物質(zhì)有效進(jìn)樣5ul，進(jìn)行55 次平行測(cè)定，結(jié)果顯示，四種物質(zhì)的峰面積與其進(jìn)樣的濃度具有很好的線性關(guān)系。

3.2.2 方法的穩(wěn)定性、重復(fù)性以及回收率分析 選取相同批次的5 份供試品，采用相關(guān)的方法對(duì)其進(jìn)行測(cè)定，對(duì)重復(fù)的RSD進(jìn)行有效計(jì)算，結(jié)果顯示，在24h 內(nèi)，試品溶液的穩(wěn)定性良好，且實(shí)驗(yàn)具有良好的重復(fù)性[4]。

3.4 杜仲樣品測(cè)定

將2g 的杜仲藥材粉末進(jìn)行稱重，再去愛最優(yōu)色譜條件下進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果分別在200nm，220nm，260nm，280nm 的波長(zhǎng)條件下進(jìn)行有效測(cè)定。這種波長(zhǎng)能夠?qū)Ω鞣N化合物的含量進(jìn)行精準(zhǔn)的測(cè)定。

4.討論

本實(shí)驗(yàn)采用多波長(zhǎng)高效液相色譜法對(duì)杜仲3 類有效成分進(jìn)行有序的測(cè)定，在一定程度上可根據(jù)相同的色譜條件下采用不同的波長(zhǎng)對(duì)其進(jìn)行測(cè)定，對(duì)其多個(gè)成分進(jìn)行同時(shí)測(cè)定，能夠提高檢測(cè)的效率和相關(guān)的精準(zhǔn)度，且與相關(guān)的要求相符[3]。同時(shí)，進(jìn)行進(jìn)行方法學(xué)的考察，提取條件的優(yōu)化，色譜條件的優(yōu)化，最終確定其提取條件，在選定的色譜條件下，峰形較好。最后試驗(yàn)利用多長(zhǎng)波同時(shí)檢測(cè)的方法對(duì)其樣品中四種物質(zhì)的成分進(jìn)行含量的測(cè)定，其結(jié)果精準(zhǔn)可靠。能為杜仲內(nèi)治療的控制提供條件和相關(guān)的依據(jù)。