外周血異型淋巴細(xì)胞檢查聯(lián)合EBV-DNA 定量分析在小兒傳染性單核細(xì)胞增多癥早期診斷中的價(jià)值分析

梁華 陳新敏 易娟 吳雨露 郭燕

（四川省婦幼保健院 四川 成都 610031）

傳染性單核細(xì)胞增多癥（IM）是以感染EB 病毒（EBV）并侵犯淋巴系統(tǒng)為基礎(chǔ)病理，以發(fā)熱、淋巴結(jié)腫大、咽峽炎典型三聯(lián)征，及外周淋巴細(xì)胞增高為主要表現(xiàn)的臨床常見急性自限性傳染病。小兒因機(jī)體抵抗力低下，免疫系統(tǒng)尚未建立完善，應(yīng)對(duì)外界環(huán)境應(yīng)激刺激的能力薄弱等因素的影響，為該病的高危人群。據(jù)最新的流行病學(xué)調(diào)查顯示，近年來該病的發(fā)病率呈逐漸上升趨勢(shì)，已成為威脅小兒生存治療的重要疾病因素[1]。臨床上，該病的發(fā)病機(jī)制尚未完全明確，臨床表現(xiàn)呈多樣化特點(diǎn)，且發(fā)病早期缺乏典型的臨床癥狀，因此給疾病的早期診斷帶來了困難。本文以我院收治的78 例傳染性單核細(xì)胞增多癥患兒為研究對(duì)象，探討檢查外周血異型淋巴細(xì)胞與定量分析EBV-DNA 在該病早期診斷中的應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)作如下分析。

1.資料與方法

1.1 一般資料

納入本研究的78 例IM 對(duì)象均為于我院就診的患兒，納為研究組，就診時(shí)間2017 年1 月～2018 年12 月，診斷標(biāo)準(zhǔn)參照張之楠《血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》（第三版）中關(guān)于IM 的診斷標(biāo)準(zhǔn)[2]。排除合并血液系統(tǒng)疾病者，合并免疫系統(tǒng)疾病者，及合并嚴(yán)重心肺肝腎等重要臟器疾病者。其中，男41 例，女37 例；年齡1 ～13 歲，平均（7.34±1.55）歲。另選擇同期于我院行健康體檢的80 例健康兒為對(duì)照組，男44 例，女36 例；年齡1～13 歲，平均（7.55±1.48）歲。通過統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)兩組對(duì)象一般病歷資料進(jìn)行錄入并行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，結(jié)果顯示兩組對(duì)象臨床可比性良好，在性別、年齡等的差異，P＞0.05。

1.2 方法

于對(duì)照組健康兒體檢當(dāng)天，于研究組患兒發(fā)病初期，分別采集空腹抗凝靜脈血標(biāo)本，分別作外周血涂片細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查和EBV-DNA 定量檢測(cè)。（1）外周血涂片細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查異型淋巴細(xì)胞。外周血涂片染色采用的試劑瑞氏姬姆薩染液由珠海貝索公司提供，外周血涂片細(xì)胞形態(tài)學(xué)對(duì)異型淋巴細(xì)胞的檢測(cè)步驟：取1ml 靜脈血標(biāo)本置于EDTA-K2 抗凝管中，均勻搖勻后進(jìn)行2 ～3張的血涂片，經(jīng)染色、沖洗后予以顯微鏡油鏡鏡檢，記錄異型淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)，統(tǒng)計(jì)百分比[3]。（2）EBV-DNA 定量分析。EBV-DNA定量檢測(cè)步驟：取1ml 靜脈血標(biāo)本置于EDTA-K2 抗凝管中，均勻搖勻后采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR 法檢測(cè)，檢測(cè)試劑及配套試劑盒由廣州中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司提供，檢測(cè)步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。（3）結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：外周血細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查陽性：異型淋巴細(xì)胞比例＞10%；EBV-DNA 陽性：EBV-DNA 定量值＞1.0×103coPy/ml[4]。（4）血常規(guī)指標(biāo)檢測(cè)。采集研究組患者血液標(biāo)本，采用全自動(dòng)全血細(xì)胞分析儀檢測(cè)白細(xì)胞計(jì)數(shù)（WBC）和淋巴細(xì)胞比（LY%）。

1.3 觀察指標(biāo)

（1）兩組對(duì)象外周血涂片細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查異型淋巴細(xì)胞陽性率比較。即根據(jù)1.2 檢查結(jié)果，比較研究組和對(duì)照組對(duì)象外周血涂片細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查異型淋巴細(xì)胞陽性率。（2）研究組外周血涂片細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查異型淋巴細(xì)胞陽性率、EBV-DNA定量陽性率及二者聯(lián)合檢查陽性率。（3）研究組異型淋巴細(xì)胞陽性組、陰性組和EBV-DNA 定量陽性組、陰性組患者WBC、LY%指標(biāo)值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用中文版SPSS20.0 軟件予以兩組患者數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，本研究中統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)為計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)，表示形式為[n(%)]百分比形式，數(shù)據(jù)間的對(duì)比處理用χ2檢驗(yàn)；統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)為計(jì)量數(shù)據(jù)，表示形式為（±s）標(biāo)準(zhǔn)差形式，數(shù)據(jù)間的對(duì)比處理用t檢驗(yàn)，P＜0.05提示數(shù)據(jù)間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1 兩組異型淋巴細(xì)胞陽性率、EBV-DNA 定量陽性率比較

異型淋巴細(xì)胞陽性率、EBV-DNA 定量陽性率研究組分別為51.28%、55.13%，對(duì)照組為10%、11.25%，兩組比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 兩組異型淋巴細(xì)胞陽性率、EBV-DNA 定量陽性率比較[n(%)]

2.2 研究組患兒異型淋巴細(xì)胞陽性率、EBV-DNA 定量聯(lián)合檢測(cè)陽性率

單純異型淋巴細(xì)胞陽性率、單純EBV-DNA 定量陽性率及聯(lián)合檢測(cè)陽性率研究組分別為51.28%、55.13%、84.62%，聯(lián)合檢測(cè)陽性率高于單純異型淋巴細(xì)胞陽性率、單純EBV-DNA 定量陽性率（P＜0.05），見表2。

表2 研究組78例患兒異型淋巴細(xì)胞陽性率、EBV-DNA定量聯(lián)合檢測(cè)IM陽性率[n(%)]

2.3 研究組患兒WBC、LY%指標(biāo)值

平均WBC、LY%指標(biāo)值，異型淋巴細(xì)胞陽性組均高于陰性組（P＜0.05）；但EBV-DNA 定量陽性組、陰性組比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表3。

表3 異型淋巴細(xì)胞和EBV-DNA 定量陽性組、陰性組患兒WBC、LY%指標(biāo)值比較（±s）

表3 異型淋巴細(xì)胞和EBV-DNA 定量陽性組、陰性組患兒WBC、LY%指標(biāo)值比較（±s）

組別 例數(shù) WBC（×109/L） LY異型淋巴細(xì)胞 - - -陽性 40 18.76±4.24 67.24±5.35陰性 38 14.21±3.02 59.27±4.92 EBV-DNA 定量 - - -陽性 43 16.42±3.64 63.29±4.77陰性 35 15.87±3.25 61.57±3.92

3.討論

在全球調(diào)查數(shù)據(jù)中EBV 感染率高達(dá)90%，但I(xiàn)M 患者臨床癥狀及體征呈現(xiàn)出多樣化及不典型性特點(diǎn)，導(dǎo)致該病的早期診斷缺乏臨床依據(jù)，診斷準(zhǔn)確率不高[5]。因此，尋找新的準(zhǔn)確且可靠的早期IM 診斷方法為臨床關(guān)注的熱點(diǎn)。本研究中，通過對(duì)IM 患兒及健康兒異型淋巴細(xì)胞陽性率、EBV-DNA定量陽性率的檢測(cè)及比較，結(jié)果顯示IM 患兒異型淋巴細(xì)胞陽性率、EBV-DNA 定量陽性率均高于健康兒（P＜0.05），提示異型淋巴細(xì)胞比例升高及EBV-DNA 表達(dá)水平升高在IM的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮了重要的參與意義，可為該病的早期診斷提供參考依據(jù)。其中，在異型淋巴細(xì)胞上，IM 患兒感染EBV后，EBV 結(jié)合B 淋巴細(xì)胞受體，在增值、復(fù)制過程中由體內(nèi)T 淋巴細(xì)胞識(shí)別，造成抑制性T 細(xì)胞被激活，進(jìn)而發(fā)生增值、自身轉(zhuǎn)化，從而產(chǎn)生細(xì)胞毒性效應(yīng)；且在血液循環(huán)作用下T淋巴細(xì)胞發(fā)生異常增值，最終發(fā)生與正常形態(tài)有顯著差異的形態(tài)變異，而臨床上通過對(duì)IM 患兒淋巴細(xì)胞形態(tài)學(xué)的觀察，通過其變異特征可為疾病的臨床診斷提供信息[6]。在EBVDNA 定量上，其為診斷IM 的金標(biāo)準(zhǔn)，具有準(zhǔn)確可靠、操作簡便的顯著優(yōu)點(diǎn)[7]。

同時(shí)，本研究結(jié)果顯示，研究組患兒異型淋巴細(xì)胞、EBV-DNA 定量聯(lián)合檢測(cè)陽性率均高于單純異型淋巴細(xì)胞陽性率、單純EBV-DNA 定量陽性率（P＜0.05），提示異型淋巴細(xì)胞檢測(cè)聯(lián)合EBV-DNA 定量檢測(cè)可有效提高早期IM 的檢出率，對(duì)促進(jìn)臨床制定針對(duì)性的治療方案，改善患兒預(yù)后具有重要的意義。另外，在本研究中，在平均WBC、LY%指標(biāo)值上，異型淋巴細(xì)胞陽性組均高于陰性組（P＜0.05）；但EBV-DNA定量陽性組、陰性組比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。提示，通過對(duì)早期IM 患兒異型淋巴細(xì)胞陽性率的檢測(cè)可為患兒病情的評(píng)估提供參考依據(jù)，而EBV-DNA 定量檢測(cè)在患兒病情判斷中的應(yīng)用并不具有臨床價(jià)值[8]。

綜上，外周血異型淋巴細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查聯(lián)合EBV-DNA 定量分析可有效提高IM 早期診斷率，且異型淋巴細(xì)胞檢測(cè)可為IM 病情的評(píng)估提供參考依據(jù)。