鈦離子注入種子對油茶幼苗葉綠體DNA、葉綠素含量和光合參數的影響

李維偉　黎傲日　郭怡菲　李觀林　肖文靜　曾艷玲

摘要：【目的】探討鈦離子注入對油茶生長過程中葉綠體及光合作用的影響，利用離子注入技術進行油茶種質創制及選育提供科學依據。【方法】以油茶品種華碩為試材，設置6×1016、9×1016、12×1016、15×1016和18×1016 Ti2+/cm2 5種劑量的鈦離子，分別注入油茶種子，以未進行注入處理的種子作為對照，在相同條件下播種培育。采摘幼葉進行DNA提取，對葉綠體基因組的部分基因片段的序列進行擴增、純化，并定期測量其葉綠素含量和光合參數，連續3年（2016—2018年）追蹤研究其葉綠體DNA的變異、葉綠素相對含量及凈光合速率（Pn）、氣孔導度（Gs）、胞間CO2濃度（Ci）和蒸騰速率（Tr）的變化規律。【結果】鈦離子注入處理會引起葉綠體DNA少數堿基置換，雖然注入劑量越大置換相對增多，但不存在明顯的缺失或插入現象;葉綠素相對含量和光合參數均呈現馬鞍形變化;鈦離子注入濃度為6×1016和12×1016 Ti2+/cm2時，葉綠素含量相對較高，但隨著生長年份增加，優勢逐漸減小;處理后當年各試驗組Pn差異不顯著（P>0.05，下同），但第2和第3年，6×1016 Ti2+/cm2注入組Pn顯著高于對照組（P<0.05，下同），分別增加13.94%和12.56%;第1、2年中Gs和Tr各組差異不明顯，而第3年差異開始增大，在注入濃度為0及6×1016 Ti2+/cm2時Gs分別為最低組的235.78%和249.55%，而在注入濃度為6×1016 Ti2+/cm2 Tr是最低組的239.24%;在第1年中，對照組Ci為508.4074 ?L/L，是最低組的213.72%，第2年中對照組與其他各組均存在顯著差異，達該年度最高值，為288.2563 ?L/L，較其他處理組增加6.66%～17.98%，但第3年對照與其他組差異減小。【結論】鈦離子注入濃度的差異對葉綠素的影響暫時不穩定，但當鈦離子注入濃度為6×1016 Ti2+/cm2時，對油茶的綜合作用效果最佳，能促進油茶凈光合速率的提升以及蒸騰作用的加強。

關鍵詞： 油茶;鈦離子注入;葉綠體DNA;葉綠素相對含量;光合參數

中圖分類號： S794.4 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻標志碼： A 文章編號：2095-1191（2020）11-2738-09

Effects of titanium ion implantation on chloroplast DNA， chlorophyll content and photosynthetic parameters

of Camellia oleifera

LI Wei-wei， LI Ao-ri， GUO Yi-fei， LI Guan-lin， XIAO Wen-jing， ZENG Yan-ling*

（The Key Lab of Cultivation and Protection for Non-wood Forest Trees of Ministry of Education/ The Key Lab of Non-wood Forest Products of Forestry State Forestry Administration/Technology Laboratory of China National Center for

Oil-tea Science，Central South University of Forestry and Technology， Changsha ?410004， China）

Abstract：【Objective】To investigate the effects of titanium ion implantation on chloroplast and photosynthesis during the growth of Camellia oleifera， ?ion implantation technique was used to enrich the way of C. oleifera germplasm creation and breeding. 【Method】C. oleifera Huashuo was used as the test material. Set 6×1016， 9×1016， 12×1016， 15×1016 and 18×1016 Ti2+/cm2 as five doses of titanium ions， injecting into C. oleifera seeds， and use seeds that have not been implanted as control. The seeds were cultivated under the same conditions. Picked young leaves for DNA extraction， amplified and purified the sequence of some gene fragments of the chloroplast genome， and regularly measured its chlorophyll content and photosynthetic parametersto track and study the variation of chloroplast DNA， the changes of srelative content of chlorophyll and net photosynthetic rate， stomatal conductance， intercellular CO2 concentration and transpiration rate during 2016-2018. 【Result】The results showed that the titanium ion implantation treatment would cause the substitution of mino-rity bases in chloroplast DNA. Although the larger the injection dose， the replacement was relatively increased， but there was no large deletion or insertion. The relative content of chlorophyll and photosynthetic characteristics both showed a sa-ddle-type change. When the concentrations of titanium ion implantation were 6×1016 and 12×1016 Ti2+/cm2， the chlorophyll content was relatively high， but as the growth year increased， the advantage gradually decreased. After treatment， the net photosynthetic rate of each test group was not significantly different（P>0.05， the same below）， but in the second and third years， the net photosynthetic rate of the 6×1016 Ti2+/cm2 injection group was significantly higher than that of the control group（P<0.05， the same below）， increasing by 13.94% and 12.56% respectively. The differences in stomatal conductance and transpiration rate in the first and second years were not great among the groups， while in the third year the differences began to be great. At the injection concentration of 0 and 6×1016 Ti2+/cm2， the stomatal conductance was 235.78% and 249.55% of the lowest group， and the transpiration rate at the injection concentration of 6×1016 Ti2+/cm2 was 239.24% of the lowest group. In the first year， the intercellular CO2 concentration in the control group was 508.4074 ?L/L， which was 213.72% in the lowest group. In the second year， the control group was significantly different from the other groups， reaching the highest in the year（288.2563 ?L/L）， an increase of 6.66%-17.98% compared with other experimental groups， but the difference was smaller between control and other treatments in the third year. 【Conclusion】The effects of ?titanium ion implantation concentration are unstable on chlorophyll. The comprehensive performance of C. oleifera is best when the implantation dose is 6×1016 Ti2+/cm2. Net photosynthetic rate and and transpiration of C. oleifera can be enhanced.

Key words： Camellia oleifera; titanium ion implantation; chloroplast DNA; relative chlorophyll content; photosynthetic parameters

Foundation item： Hunan Natural Science Foundation（2019JJ50986）; Key Scientific Research Project of Department of Education of Hunan（18A152）

0 引言

【研究意義】油茶（Camellia oleifera）泛指山茶科山茶屬中具有生產價值的油用樹種，是我國南方地區重要的木本食用油料樹種，也是世界四大木本油料作物之一（袁軍等，2017;邵蕊等，2018）。油茶具有很高的經濟價值，其產品在林業、農漁、食療、醫藥、日化和輕紡等方面有非常廣闊的應用，集經濟、生態和社會效益于一體，極具栽培價值（王保明等，2019;王文斌和李雪，2019）。盡管我國科技人員對油茶進行了長期、細致的研究，發現從改善林分的撫育程度、種植密度及水肥管理等方面提高油茶產量（游璐等，2015;羅小彥，2019），但提高程度有限，且受制于原種質質量。目前我國油茶育種技術主要有常規育種、抗性育種、輻射誘變育種及生物技術育種等（黃欣等，2010）。油茶的常規育種周期較長，且受到遠緣雜交不親和性等條件的限制;抗性育種僅在抗油茶炭疽病及抗寒性等方面研究較多;生物技術育種起步較晚;而輻射誘變育種在近20～30年作為新興技術正被廣泛應用（徐斌等，2017）。正如離子束注入技術已不再將研究對象僅限于物理學和材料科學，其在對生命科學領域也創造了可能，且發展迅速，取得了許多顯著成就（Feng et al.，2006;黃國偉等，2009）。同時，離子注入誘變育種作為一種育種技術，開拓了林木選育工作的研究領域。因此，嘗試分析離子注入后對油茶葉綠體DNA變異及其光合參數的影響，對油茶選育及提高油茶種質資源具有重要意義。【前人研究進展】大量研究發現離子注入種子和芽等材料后，不僅能提高植物的產量、品質，且具有突變率高和廣突變譜的特點，是比太空輻射和放射性同位素輻射更安全經濟的誘變新途徑（郝杰等，2014）。目前，離子注入技術不僅在菌類的選育及培養方面發揮了重要作用（陳方新等，2018;陳浩等，2018），還拓寬至小麥和水稻等植物的種質資源（袁兵，2014;郭明明等，2019）。曾艷玲等（2011）發現鈦離子注入油茶種子的劑量在6×1016～12×1016 Ti2+/cm2時，種子的過氧化物酶（POD）和超氧化物歧化酶（SOD）活性達到峰值，同時電解質外滲率最低。Ya等（2012）也發現通過低能氮離子注入能誘導水稻種子增強其幼苗的活力指數，促進脫落酸的生物合成和染色質修飾的變化，從而促進水稻幼苗生長。Han等（2013）研究表明，低能碳離子注入的低流量可提高花生的日平均光合速率。郝杰等（2015）發現鈦離子注入對植物葉綠素總量、葉綠素a及葉綠素b的產生具有一定促進作用，可提高光合作用的能力。張斌（2018）研究表明鈦離子注入效果較氮離子注入好，不僅能使杉木幼苗在耐陰性和適應面具有較佳的表現，同時還能明顯提高光能利用效率。【本研究切入點】前人針對離子注入技術的研究僅涉及酶含量等的變化，尚未涉及葉綠體DNA及光合參數的改變。【擬解決的關鍵問題】在前期研究基礎上，探究鈦離子注入對油茶葉綠體DNA、葉綠素相對含量及光合參數的影響，進一步論證促進油茶生長的最佳鈦離子注入濃度，以期為今后采用離子注入技術進行油茶良種創制及選育提供科學依據。

1 材料與方法

1. 1 試驗材料

試材為國家審定油茶品種華碩，由中南林業科技大學經濟林培育與保護教育部重點實驗室選育。樣品采集自湖南省長沙市望城縣東城鎮油茶基地，為5年生油茶種。

1. 2 試驗方法

1. 2. 1 試驗方案 于2015年10月底采摘華碩油茶成熟果實，去果皮后，根據本課題組前期研究設計試驗處理梯度（曾艷玲等，2011），即應用LCD21000型離子注入機，對種子分別進行6×1016、9×1016、12×1016、15×1016和18×1016 Ti2+/cm2等5個劑量的鈦離子注入處理，依次記為Ti2、Ti3、Ti4、Ti5和Ti6處理，并以未進行注入處理的種子為對照，記為Ti1，每個濃度3組重復，為Ti1-1、Ti1-2和Ti1-3，以此類推至Ti6-3，即共有18個樣本。經沙藏至2016年3月底進行播種。

1. 2. 2 DNA提取 于2017年4月采摘并稱取 0.1 g左右新抽嫩葉，根據植物基因組DNA快速抽提試劑盒[生工生物工程（上海）股份有限公司]說明提取基因組DNA。

1. 2. 3 葉綠體基因組部分基因間隔區擴增及測序 采用葉綠體DNA條形碼通用引物，rpl2：5'-GATAATTTGATTCTTCGTCGCC-3';trnH：5'-CGG ATGTAGCCAAGTGGATC-3'擴增rpl2和trnH間的基因間隔區。PCR反應體系（50.00 ?L）：上、下游引物（10 ?mol/L）各2.0 ?L，10×Buffer（TaKaRa）5.00 ?L，dNTPs（2.5 mmol/L）4.00 ?L，MgCl2（25 mmol/L）3.00 ?L，Taq DNA聚合酶（5 U/?L）0.25 ?L，基因組DNA（100 ng/?L）1.00 ?L，取無菌純水補足50.00 ?L。擴增程序：94 ℃預變性5 min;94 ℃ 1 min，55 ℃ 1 min，72 ℃ 1 min，進行35個循環;72 ℃延伸8 min。擴增產物委托上海博亞生物技術有限公司進行測序。

1. 2. 4 光合特性參數測定 采用Li-6400便攜式光合測定系統，選取枝條生長良好的中上部葉片進行光合指標測定，光源為太陽光，溫度、相對濕度和CO2濃度均為自然狀態下。測定時間為2016、2017和2018年的10月初天氣晴朗的上午9：00—10：00，每年1次，1 d內將數據收集完善。當系統穩定后進行記錄，每片葉片記錄3次數據，即重復測定3次，并計算平均值。直接記錄的數據有凈光合速率（Pn）、氣孔導度（Gs）、蒸騰速率（Tr）和胞間CO2濃度（Ci）等指標。

1. 2. 5 葉綠素相對含量測定 采用SPAD-502Plus測量葉片在2個波長段里的吸收率，評估葉片葉綠素的相對含量。

1. 3 統計分析

DNA序列采用生物信息學軟件GenDoc進行對比分析。光合參數及葉綠素相對含量均采用Excel 2010和SPSS 17.0進行試驗數據統計，并以Duncans新復極差法進行顯著性分析。

2 結果與分析

2. 1 鈦離子注入對葉綠體DNA的影響

利用通用引物對rpl2和trnH間的基因間隔區進行擴增，得到單一條帶，片段大小約200 bp（圖1）。測序分析結果表明，不同濃度鈦離子注入后油茶實生苗葉片葉綠體DNA的rpl2-trnH區域的長度范圍為213～217 bp（圖2，表1），G+C堿基的含量在40.5%～41.4%，符合葉綠體DNA序列G+C堿基含量較低的特點。共檢測出11個變異性狀，均為堿基置換，其中1個為顛換，10個為轉換。在第4組即鈦離子濃度為12×1016 Ti2+/cm2的第2個重復組（Ti4-2）中有2個堿基發生置換，且均發生在引物rpl2區域，即第4個堿基由A顛換成T，第16個堿基由C轉換成T;樣本Ti3-2堿基置換最多，分別位于47、58～61及109 bp，其中4處為C轉換成T，2處為T轉換成C;發生堿基置換最多的位點在58 bp處，其中該位點有6組為T、12組為C。雖然隨著鈦離子注入劑量的增加，堿基置換現象有所增加，但不存在缺失或插入的現象。

2. 2 鈦離子注入對油茶葉片葉綠素含量的影響

對3年所測得葉綠素相對含量進行方差分析可知，年份與鈦離子注入量的交互效應對葉綠素相對含量的顯著值（P）為0.02，說明兩者存在交互效應且對葉綠素相對含量具有顯著影響（P<0.05，下同）;同時發現，2016與2017年間無顯著差異（P>0.05，下同），但2018與2016和2017年均存在顯著差異。

由圖3可知，在2016年，Ti2與Ti4處理的葉綠素SPAD較高，分別為57.10和51.80，較Ti1處理增加22.80%和11.40%，且二者差異不顯著，說明Ti2和Ti4處理均能促進葉綠素的產生。在2017年，各處理間差異不顯著，葉綠素SPAD值順序依次為Ti2>Ti6>Ti5>Ti1>Ti4>Ti3，其中，Ti2處理的SPAD值達48.40，為Ti1處理的105.91%。在2018年，Ti1和Ti4處理與Ti3和Ti6處理存在顯著差異，且前兩組葉綠素含量較高，SPAD值分別為72.80和74.27。可見，鈦離子的注入對于提高葉綠素含量并不具有穩定性，可能還受其他因素的影響。

2. 3 鈦離子注入對油茶葉片光合參數的影響

2. 3. 1 鈦離子注入對油茶葉片Pn的影響 方差分析結果（表2）顯示，從2016—2018年，處理結果差異顯著值在逐漸增加，其中，2016年P=0.295>0.05，說明各處理組間Pn差異不顯著，鈦離子注入處理對油茶實生苗萌芽階段光合影響不明顯;2017年P=0.040，各處理間差異顯著，2018年P<0.001，各處理間差異極顯著，表明鈦離子注入處理對油茶實生苗后期生長過程中Pn有明顯影響，且存在逐漸放大的趨勢。由圖4-A可知，在2016年，各處理間差異不顯著，Ti4處理的葉片Pn為9.8952 ?mol/（m2·s），為Ti1處理的109.73%;在2017和2018年，Ti2處理與其他處理均存在顯著差異，且Pn達較高水平，分別為3.5842和11.189 ?mol/（m2·s），較Ti1處理分別增加13.94%和12.56%。說明適當濃度的鈦離子注入對植物Pn提高有促進作用。綜合3年的情況分析可知，一方面，在幼苗期鈦離子注入對葉片Pn影響不顯著，隨著植物的生長發育，鈦離子注入的影響逐漸放大;另一方面，Ti2處理的鈦離子注入對葉片Pn提高有促進作用。

2. 3. 2 鈦離子注入對油茶葉片Gs的影響 方差分析結果（表2）顯示，從2016—2018年，各年份顯著值P分別為0.390、0.039和0.000，因此可得出不同年份各處理組的顯著性在逐漸增大，說明鈦離子注入處理對油茶葉片Gs的影響與其對葉片Pn的影響相似，均隨著油茶的生長發育而逐漸增強。由圖4-B可知，在2016年，各組Gs差異不顯著，Ti2處理葉片Gs達0.1734 mol/（m2·s），為Ti1處理的127.69%。在2017年，除Ti6處理的Gs極低以外，其他各組差異均不顯著，Ti1處理的葉片Gs為0.0499 mol/（m2·s），為Ti6處理的236.49%;在2018年，Ti1與Ti2處理差異不顯著，分別為0.1575和0.1667 mol/（m2·s），為Ti6處理的235.78%和249.55%。綜合3年情況來看，適當的鈦離子注入有提高Gs的作用，但濃度高于15×1016 Ti2+/cm2后會大幅度抑制氣孔張開。

2. 3. 3 鈦離子注入對油茶葉片Tr的影響 方差分析結果（表2）顯示，從2016—2018年，處理結果顯著性在逐漸減小，P分別為0.403、0.054和0.001，說明鈦離子注入處理對Tr的影響隨油茶幼苗的生長逐年增大。由圖4-C可知，在2016年，各處理間差異不顯著，Ti6處理達2.9044 mmol/（m2·s），為Ti1處理的185.74%;在2017年，除Ti6處理Tr顯著低于Ti2、Ti3和Ti4處理外，其他各處理間差異不顯著，Ti4處理達1.0526 mmol/（m2·s），為Ti1處理的131.39%;在2018年，Ti1和Ti2與Ti3處理間無顯著差異，但3個處理與Ti6處理均存在顯著差異，各處理Tr排序為Ti2>Ti3>Ti1>Ti5>Ti4>Ti6，其中Ti2處理為2.9489 mmol/（m2·s），是Ti6處理的239.24%。可見，一方面，鈦離子注入對Tr的影響在油茶生長后期才開始體現;另一方面，適當濃度鈦離子注入可促進蒸騰作用，而過高濃度的鈦離子注入會抑制蒸騰作用。

2. 3. 4 鈦離子注入對油茶葉片Ci的影響 方差分析結果（表2）顯示，3年組間差異顯著值P先減后增，2018年P值為0.058，說明此時各處理組間Ci差異不顯著。由圖4-D可知，在2016年，前3個處理與后3個處理均存在顯著差異，且在Ti3至Ti4時出現陡降現象，Ti1處理的Ci為508.4074 ?L/L，是Ti6處理的213.72%;在2017年，Ti1處理與其他處理均存在顯著差異，達該年度最高值，為288.2563 ?L/L，較其他處理增加6.66%～17.98%，其他各處理Ci排序為Ti2>Ti4>Ti3>Ti5>Ti6;在2018年，各處理的Ci排序為Ti1>Ti2>Ti5>Ti3>Ti4>Ti6。以上分析說明對照的葉片細胞對CO2的利用效率沒有試驗組的高，適當濃度的鈦離子注入有利于細胞對Ci的利用。此外，顯著性在逐漸減小說明植物可能產生某種機制的應對這種變化，具有自我修復的能力。

由表3可知，油茶幼苗Pn、Gs、Tr在相鄰年間差異顯著，即2016與2017年、2017與2018年差異顯著，但2016與2018年差異不顯著，可能是因為2017年的氣候、水肥條件與其他2年相比存在差異而導致這3個光合指標年際間差異顯著。而對于Ci，2016年與另外2個年份均存在顯著差異，可能是由于油茶幼苗生長初期葉肉細胞葉肉導度不完善而引起。

3 討論

葉綠體DNA序列片段的非編碼區在植物種間存在較高變異性，常被作為顯花植物種間鑒定的DNA條形碼（王以紅等，2009）。鈦離子誘變效應可能通過影響一些與葉綠體DNA復制、轉錄或修復相關的酶，從而激活或抑制這些酶活性來影響DNA的正常復制、轉錄和修復;鈦離子也可能直接作用于DNA上，通過影響其構象或其與蛋白質的相互作用而產生突變（張寧等，2006）。本研究中所采用的劑量梯度均未涉及到明顯的葉綠體DNA突變，僅出現少量堿基置換而不存在堿基缺失或插入現象，即各處理組葉綠體DNA序列變異性較小，一方面說明所取試材品系純正，另一方面說明鈦離子注入對油茶葉綠體DNA影響不明顯。此外，根據Yu（2000）的研究，注入的離子在葉綠體雙鏈DNA鏈中打散組成分子的原子，并迫使其從原始位置進行移動;轉移的原子可能會與DNA分子中的其他元素相互作用并形成其他新分子，或完全移位并在其原始位置留出空白空間。前者會導致遺傳效應，如堿基取代;后者導致單個堿基或小DNA片段的缺失和插入，甚至染色體斷裂和易位。在本研究中并未出現后一種情況，可能是由于不同離子的注入在植物體內導致的化學性質及生物活性不同，因而引起不同的生物效應，而鈦元素不屬于植物的微量元素，對植物產生的生物效應會較弱（郝杰等，2014）;也可能由于油茶自身存在某種修復機制，能在一定程度上修復斷裂的部分。葉綠素是植物光合作用的物質基礎，其濃度和組成直接影響葉片的光合速率（Fan et al.，2013）。適當的離子注入能促進植物幼苗產生更多葉綠素，從而提高葉片吸收光能的作用（張斌等，2010）。本研究結果顯示，離子注入量為6×1016 Ti2+/cm2時，葉綠素含量相對較高，但鈦離子注入的影響隨著油茶幼苗的生長存在“大小大”的現象，即在注入后第1年對葉綠素含量的影響較大，而第2年影響減小，第3年影響又繼續增大。上述現象說明鈦離子注入作用尚未涉及葉綠體DNA構象，未產生穩定的DNA突變，因此導致適當離子注入提高葉綠素含量的現象并不穩定。

衡量光合作用的主要指標是Pn，其為光合作用積累的總量除去呼吸作用消耗的量（孫少波等，2016），可直接體現光合系統的功能。外界與植物進行氣體交換主要是通過植物葉片的氣孔進行，衡量氣孔開張程度的指標是Gs，其不僅反映植物蒸騰耗水的程度，還是檢測植物抗旱性能的重要指標（郭成龍，2019;朱紹丹等，2019）。本研究結果顯示，隨著鈦離子注入劑量的增加，油茶幼苗葉片Pn和Gs均呈現馬鞍型圖線的趨勢，即低劑量注入時Pn及Gs較小，中高劑量注入時反而有所增高，但高劑量注入時有所下降。究其原因可能是：在低劑量離子注入時生物特性改變主要是能量沉積效應和動量傳遞效應綜合作用的結果，電荷作用效應其次，能量沉積所產生的大量自由基會導致DNA和生物膜等其他生物大分子的損傷，而中高劑量注入時電荷積累發揮作用，大量電荷的堆積會產生很強的庫侖斥力，這種庫侖斥力能對被注入細胞形成一個保護屏障，阻礙后續注入離子對細胞的直接接觸所造成損傷，從而達到對細胞的保護作用（宋道軍等，1999;劉志高等，2013;龔洪恩等，2014）。但高劑量注入時，能量沉積和動量傳遞所造成的負面影響已超出電荷積累發揮的積極作用，因此出現生活力下降的趨勢。

蒸騰作用是植物重要的生理活動，影響著植物體內水分的平衡、運輸與吸收;從蒸騰耗水的規律可深入了解其水分代謝的特點和水分利用的效率（Wang et al.，2016;趙夏緯等，2019）。葉片Tr由于受到眾多因素如Gs、細胞活力、水分管理等的綜合影響，因此其數值的柱形圖隨鈦離子注入劑量變化無明顯的規律性。但進一步分析發現，隨著植物的生長發育，低濃度注入的處理有較高值，蒸騰速率較快，代謝較快。Ci是指植物進行光合作用時細胞內環境的CO2濃度，可反映植物葉片光合作用對CO2的利用情況，直接影響到光合作用暗反應階段的羧化速率，從而影響光合作用（楊澤粟等，2017;周罕覓等，2019）。Ci取決于4個可能變化的因素：葉片周圍空氣的CO2濃度、Gs、葉肉導度和葉肉細胞的光合活性（陳根云等，2010）。本研究結果顯示，油茶種子注入鈦離子后隨注入劑量增加，追蹤觀察的油茶幼苗生長過程中Ci所呈現的趨勢均為先下降、后上升、再下降的形式，與Gs的趨勢均一致，因此這4個影響因素中，Gs起關鍵性作用。高劑量鈦離子注入出現Ci陡降的現象，說明高劑量離子注入存在抑制葉片利用CO2的現象，且影響較明顯。

4 結論

鈦離子注入濃度差異對葉綠素的影響暫時不穩定，但當鈦離子注入濃度為6×1016 Ti2+/cm2時，對油茶的綜合作用效果最佳，能促進油茶凈光合速率的提升及蒸騰作用的加強。

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（責任編輯 鄧慧靈）

收稿日期：2020-01-17

基金項目：湖南省自然科學基金項目（2019JJ50986）;湖南省教育廳科學研究重點項目（18A152）

作者簡介：*為通訊作者，曾艷玲（1980-），博士，教授，主要從事經濟林栽培育種研究工作，E-mail： zengyanling110@126.com。李維偉（1999-），研究方向為經濟林栽培育種，E-mail： liweiweiorg@126.com