2015年版中國藥典含黃連成方制劑的統(tǒng)計分析及黃連提取工藝的試驗研究

張大軍，王兆華

(吉林省中醫(yī)藥科學院，吉林 長春 130012)

黃連為毛茛科植物黃連Coptis chinensis Franch.、三角葉黃連Coptis deltoidea C.Y.Cheng et Hsiao或云連Coptis teeta Wall.的干燥根莖，有著數(shù)千年的藥用歷史，在中成藥中廣泛應用，其中黃連Coptis chinensis Franch. 應用最廣，習稱“味連”。本文對 2015 版藥典收載的 91 個含黃連成方制劑的劑型、制備方法進行了統(tǒng)計，并結合味連提取工藝的試驗結果進行分析，將為有效使用黃連提供科學依據(jù)。

1 含黃連中成藥的統(tǒng)計分析[1]

2015 版《中國藥典》收載含黃連的成方制劑共91個，劑型有片劑、膠囊劑、丸劑等 8 種，具體見表 1。

表1 含黃連成方制劑的劑型分析

由表 1 可知，藥典收載含黃連成方制劑的劑型種類較多，以丸劑、片劑、膠囊劑、顆粒劑為主。

2 含黃連成方制劑中黃連制備方法的統(tǒng)計分析

含黃連成方制劑中黃連制備方法有粉碎、水煎煮和醇提取。其中采用粉碎的有66種，采用水煎煮有17種，采用醇回流有5種、醇滲漉有3種，具體見表 2。

表2 含黃連成方制劑中黃連的制備方法分析

由表 2 可知，黃連在成方制劑中多以粉末入藥，其次為水煎煮，少數(shù)為醇回流或滲漉。醇提時，使用的乙醇濃度有50%、60%、70%、80%不等。

3 不同提取工藝對黃連有效成分含量的影響

3.1 儀器與試藥

日本島津LC-10 AT高效液相色譜儀；SPD-10A紫外檢測器；KQ-250型超聲波處理器；鹽酸黃連堿對照品(批號112026-201601，純度95.1%)、鹽酸巴馬汀對照品(批號110732-201611，純度86.8%)、鹽酸小檗堿(批號110713-201613，純度86.8%)對照品，購于中國藥品生物制品檢定研究院；表小檗堿(批號W06M8Z30708，純度98%)，購自上海源葉生物科技有限公司；黃連(味連)購自居德堂大藥房；乙腈為色譜純，其它化學試劑均為AR級。

3.2 試驗方法

3.2.1 水提物制備

黃連粗粉，水煎煮兩次，煎液濃縮，干燥，粉碎。

3.2.2 醇提物制備

黃連粗粉，4份，以50%、60%、70%、80%乙醇提取兩次，提取液分別回收乙醇、濃縮，干燥，粉碎。

3.2.3 大孔樹脂富集物制備[2]

黃連粗粉，以70%乙醇提取兩次，提取液回收乙醇、濃縮，加水溶解，濾過，濾液通過D101大孔樹脂柱，以水及50%乙醇洗脫，收集醇洗液，回收乙醇，濃縮，干燥，粉碎。

3.2.4總生物堿提取物制備[3]

黃連粗粉，以70%乙醇提取兩次，提取液回收乙醇，濃縮，加水溶解，調(diào)pH值至1.8，加適量NaCl，冷藏，濾過，濾渣干燥，粉碎。

3.2.5 精制總生物堿提取物制備

在3.2.4操作的基礎上，增加精制步驟，干燥，粉碎。

3.3 有效成分測定[1]

3.3.1 色譜條件色譜柱

安捷倫色譜柱(250×4.6 mm，5 μm)； 流動相：乙腈-0.05 moL/L磷化酸二氫鉀(50∶50)(每 100 mL加十二烷基硫酸鈉0.4 g，再用磷酸調(diào)pH值4.0)；檢測波長：345 nm；進樣量：10 μL。

3.3.2 對照品溶液制備

分別稱取表小檗堿、鹽酸黃連堿、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿對照品適量，加甲醇制成每1 mL各含43.8、42.4、52.5、68.9 μg的混合溶液，搖勻，即得。

3.3.3 供試品溶液制備

取2項下的提取物約50 mg，精密稱定，加入甲醇-鹽酸(100∶1)混合溶液25 mL，密塞，超聲處理30 min，重量法定容，濾過，取續(xù)濾液2 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，取續(xù)濾液，即得。

3.3.4 標準曲線的制備

吸取混合對照品溶液2，4，8，12，16，20 μL，注入液相色譜儀中，按3.3.1項下的色譜條件測定，以表小檗堿、鹽酸黃連堿、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿對照品的進樣量為橫坐標(x)，以峰面積積分值為縱坐標(y)，進行線性回歸，回歸方程和線性關系為：y=2222.67x-35015.05，r=0.9984、y=2168.58x+7619.25，r=0.9995、y=2658.6x-8278.92，r=0.9998、y=2334.40x-39015.38，r=0.9982，表明表小檗堿在87.6～876 μg、鹽酸黃連堿在84.8～848 μg、鹽酸巴馬汀105～1050 μg、鹽酸小檗堿小檗堿在137.8～1378 μg范圍內(nèi)進樣量與峰面積積分值線性關系良好。

3.3.5 精密度試驗

精密吸取總生物堿提取物的供試品溶液10 μL，連續(xù)6次重復進樣，測定。表小檗堿、鹽酸黃連堿、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿峰面積積分值的RSD分別為1.33%、0.84%、1.26%、0.97%。

3.3.6 穩(wěn)定性試驗

取總生物堿提取物的供試品溶液在 0、2、4、6、8 h，分別進樣10 μL，測定。結果表小檗堿、鹽酸黃連堿、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿峰面積的RSD分別為1.35%、1.11%、1.24%、1.05%，表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定性較好。

3.3.7 重現(xiàn)性試驗

精密稱取總生物堿提取物 6份，按3.3.3項下操作，依法進樣分析，樣品中表小檗堿、鹽酸黃連堿、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿含量的RSD分別為2.17%、1.79%、1.77%、1.99%，結果表明重現(xiàn)性良好。

3.3.8 加樣回收率試驗

精密稱取表小檗堿、鹽酸黃連堿、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿對照品適量，加入到已測表小檗堿、鹽酸黃連堿、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿含量的總生物堿提取物樣品中，按3.3.3項下操作，依法進樣分析，計算回收率。表小檗堿、鹽酸黃連堿、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿平均回收率分別為98.17%、98.79%、98.67%、99.19%。

3.3.9 樣品測定

分別精密稱取各黃連提取物，按3.3.3項下制備供試品溶液，再按3.3.1項下方法測定并計算小檗堿、鹽酸黃連堿、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿的含量。結果見表 3。

表3 黃連不同提取物中生物堿含量測定結果

表3(續(xù))

4 小結與討論

(1)黃連是一種常用中藥，應用廣泛，目前對其成分及藥理作用的研究頗多。從2015年版《中國藥典》收載含黃連的91種成方制劑中可以看出，黃連的制備方法多樣，且相對集中。多數(shù)制劑以粉碎入藥(66/91)，尤其是傳統(tǒng)劑型丸散劑中多以粉碎入藥(45/47)，現(xiàn)代劑型的顆粒劑多采用水煎煮(7/9)、膠囊劑采用粉碎和水煎煮的比例各半、片劑以粉碎和醇提工藝的比例約各半。

(2)試驗中發(fā)現(xiàn)，大孔樹脂對黃連生物堿的吸附力及吸附量均較小，采用大孔樹脂富集黃連生物堿，工時費及成本較高。

(3)本實驗以不同溶劑和不同方法制備了多種黃連提取物并測定提取物中表小檗堿、鹽酸黃連堿、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿的含量，結果表明各提取物中所測成分含量和提取率均有較大差別，提示我們，為了更好地發(fā)揮黃連的藥效，隨著對黃連成分及藥理作用的深入研究，在使用黃連時，應根據(jù)不同的化學成分發(fā)揮不同藥理作用，采用最適宜的提取工藝。