重慶地區(qū)表觀健康成年人血清睪酮參考區(qū)間的建立

田思思，羅 杰，廖 玲，雷國勤，巫志宇△

(1.陸軍軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院檢驗科，重慶 400042;2.中國人民解放軍陸軍第954醫(yī)院檢驗病理科，西藏拉薩 856000)

睪酮又稱為睪丸素，是一種由19個碳原子構(gòu)成的甾體類激素[1]，作為一種雄激素在機體內(nèi)發(fā)揮重要的生理作用，如維持生殖功能及第二性征、增強肌肉強度與質(zhì)量、維持骨密度等[2]。相關(guān)研究表明，血清睪酮水平測定有助于性腺功能減退、多囊卵巢綜合征、男性雄激素缺乏、性早熟或延遲等疾病的診斷和治療[3-6]，亦有文獻描述了血清睪酮與骨質(zhì)疏松癥、糖尿病、心血管疾病、前列腺癌、非酒精性脂肪肝、阿爾茨海默病等疾病相關(guān)[7-12]。建立血清睪酮的參考區(qū)間對臨床實踐應(yīng)用具有重要意義。目前，臨床實驗室一般套用試劑或儀器廠家提供的國外參考區(qū)間，由于種族、地域、性別、年齡等因素的差異，國外參考區(qū)間無法成為通用標(biāo)準(zhǔn)。根據(jù)美國臨床和實驗室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會C28-A3文件相關(guān)要求，本研究通過檢測重慶地區(qū)表觀健康成年人的血清睪酮水平，確立了適用于本地區(qū)血清睪酮的參考區(qū)間。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019年1-4月在陸軍軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院體檢健康成年人630例，所有研究對象均簽署《知情同意書》，其中男性315例，女性315例，平均年齡50歲(范圍20～85歲)。將所有對象按性別分組，再根據(jù)年齡劃分為2個亞組：20～<50歲組(男158例，女156例)、≥50歲組(男157例，女159例)。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)年齡≥20歲，無高血壓、糖尿病、冠心病、腫瘤、多囊卵巢綜合征、月經(jīng)不調(diào)、骨質(zhì)疏松癥等相關(guān)疾病史及癥狀；(2)體檢結(jié)果正常，包括血清學(xué)檢查肝功、腎功、乙肝、血糖、血脂、腫瘤標(biāo)志物等均正常，血常規(guī)、尿常規(guī)均正常。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)排除近期大量飲酒、手術(shù)、輸血、用藥、妊娠、哺乳期者；(2)排除溶血、脂血、信息不全等質(zhì)量不合格標(biāo)本。

1.2儀器與試劑 全自動免疫分析系統(tǒng)購自美國貝克曼公司，型號為UniCel DxI 800；睪酮測定試劑盒購自中國上海酶聯(lián)生物公司，批號831937；免疫分析質(zhì)控品購自美國Bio-Rad公司，批號40340。所有操作均按照標(biāo)準(zhǔn)操作流程進行，實驗室每天均進行室內(nèi)質(zhì)控監(jiān)測，在控后方進行相關(guān)檢測，實驗室參加的衛(wèi)生部臨檢中心的內(nèi)分泌室間質(zhì)評(含睪酮等項目)結(jié)果實驗室能力驗證成績100%通過。

1.3方法

1.3.1標(biāo)本采集與保存 所有受試者晨起空腹采血，一次性真空血清管采集靜脈血5 mL，2 h內(nèi)室溫下3 500 r/min離心10 min并分離血清，保存在有編號的小型離心管中，-70 ℃條件下冷凍保存，冷凍保存樣本最多保存3個月。

1.3.2剔除離群值 應(yīng)用Dixon法剔除離群值，將每組數(shù)據(jù)由小到大排序后，將疑似離群值與相鄰值的絕對差值(D)和極大值與極小值的差值(R)相除，若D/R≥1/3則剔除，反之保留。

2 結(jié) 果

2.1數(shù)據(jù)分布 在630例樣本中，剔除溶血19例，脂血7例。用Dixon法在>49歲的女性組中發(fā)現(xiàn)2個離群值，其中一個離群值(1.7 ng/mL)與相鄰值的D為0.94，R為1.74，D/R=0.54>1/3，同理，另一個離群值(1.84 ng/mL)的D/R=0.62>1/3。故最終有602例納入本研究，整體血清睪酮測定結(jié)果呈非正態(tài)分布(P<0.05)。按性別分組，男性血清睪酮測定結(jié)果呈正態(tài)分布(P=0.17)，女性血清睪酮測定結(jié)果呈非正態(tài)分布(P<0.05)。

2.2不同性別及年齡組血清睪酮水平 男性血清睪酮水平明顯高于女性組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=57.47，P<0.05)。男性20～<50歲組與男性≥50歲組之間的睪酮水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=1.905，P>0.05)，可合并為一組；而女性兩個年齡亞組之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=11.7，P<0.05)，20～<50歲組的睪酮水平明顯高于≥50歲組。見表1、2。

表1 不同性別血清睪酮測定結(jié)果比較

注：與男性比較，*P<0.05；-表示此項無數(shù)據(jù)。

表2 各年齡亞組血清睪酮測定結(jié)果比較

注：與女性組20～<50歲比較，*P<0.05。

2.3血清睪酮水平參考區(qū)間建立 建立了表觀健康成年人血清睪酮的95%參考區(qū)間：男性為2.28～7.50 ng/mL，女性20～<50歲為0.10～1.03 ng/mL，女性≥50歲為0.10～0.70 ng/mL。見表3。

2.4進一步年齡分組比較血清睪酮測定結(jié)果 將血清睪酮測定結(jié)果的年齡分組進一步細化，每隔10歲為一個小組(≥70歲為一組)，可細分為6個小組，再對同性別的6個小組進行組間比較。可以發(fā)現(xiàn)男性6個年齡組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.056 1)，女性6個年齡組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。20～<30歲組的血清睪酮水平達到最高峰，其明顯高于40～<50歲、50～<60歲、60～<70歲、≥70歲等4個年齡組，并隨著年齡的增長逐漸降低而后趨于平穩(wěn)，在≥50歲以后的3個年齡組間血清睪酮的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。而男性血清睪酮水平隨年齡增長變化不大。見表4、圖1。

表3 表觀健康成年人血清睪酮參考區(qū)間

注：A表示女性血清睪酮水平隨著年齡增長的變化趨勢；B表示男性血清睪酮水平隨著年齡增長的變化趨勢。

圖1不同性別的血清睪酮水平隨著年齡增長的變化趨勢

表4 以10歲為間隔劃分年齡組比較血清睪酮水平

續(xù)表4 以10歲為間隔劃分年齡組比較血清睪酮水平

注：與女性20～<30歲年齡組比較，*P<0.05；與女性30～<40歲年齡組比較，#P<0.0；與女性40～<50歲年齡組比較，△P<0.05。

2.5不同實驗室的血清睪酮參考區(qū)比較 不同實驗室的血清睪酮參考區(qū)間存在較明顯的差異，其中表現(xiàn)最為突出的是女性的參考區(qū)間。見表5。

表5 不同來源的血清睪酮參考區(qū)間的比較

注：-表示此項無數(shù)據(jù)。

3 討 論

睪酮是一種重要的雄激素，臨床應(yīng)用廣泛，可用來協(xié)助診斷男性性腺機能減退及評估睪酮替換治療的效果，還能用來評估女性多毛癥、多囊卵巢綜合征、更年期女性、性早熟與延遲等[13]。準(zhǔn)確的睪酮水平測量對臨床實踐具有重要意義。

目前，放射免疫分析法和化學(xué)發(fā)光免疫法是臨床總睪酮測量使用最廣泛的檢測方法，具有快速、操作簡單、除干擾蛋白質(zhì)、靈敏度高等優(yōu)點[13]。不同方法學(xué)之間的結(jié)果無可比性，但即使是同一種方法學(xué)，由于來自不同廠家試劑的溯源性不同，制造商提供的參考區(qū)間也不盡相同，分析測量結(jié)果之間同樣存在較大差異。此外，制造商建立參考區(qū)間時使用的參考樣本群體往往是同他們產(chǎn)品市場的地理分布具有相似性，參考個體地域不同會導(dǎo)致分組不同，而且影響因素不僅有地域因素，還包括環(huán)境、飲食習(xí)慣和種族背景等因素。因此，每個實驗室建立適用于自己的參考區(qū)間是十分必要的。

本研究表明，血清睪酮水平存在性別和年齡的差異，男性血清睪酮水平明顯高于女性，約高10倍，且其睪酮水平與年齡沒有顯著相關(guān)性，本研究得出的男性參考區(qū)間與貝克曼庫爾特公司提供的血清睪酮檢測試劑說明書的參考區(qū)間差異不大，參考值下限在(2.28 ng/mL)稍高于說明書的參考值下限為(1.75 ng/mL)。女性血清睪酮水平隨年齡增長而降低，50歲以上的血清睪酮水平顯著低于50歲以下的女性，且通過組間比較可以得出，女性血清睪酮水平在20～<30歲年齡段時達到最高峰，在50歲后其水平趨于平穩(wěn)。試劑說明書中沒有考慮到年齡對女性血清睪酮的影響，本研究結(jié)果顯示，在20～<50歲年齡段女性的睪酮參考值上限(1.03 ng/mL)顯著高于說明書提供的參考值上限(0.75 ng/mL)。和本研究類似的是YU等[14]的研究，他們使用的檢測儀器同本實驗室使用的是同一品牌和型號，其研究對象來自中國5個城市的表觀健康成年男性(多中心研究)，他們得出的參考區(qū)間與本研究差異不大。但遺憾的是，他們沒有做女性參考區(qū)間的研究，故不能與之進行參考和比較。除此之外，KANNENBERG等[15]的研究中男性睪酮的參考值上限顯著高于本研究的參考值上限，女性睪酮的參考值上限顯著低于20～<50歲年齡段女性的睪酮參考值上限。BUI等[16]的研究中女性睪酮的參考值上限也顯著低于本研究。除了地域和種族的影響，檢測方法的不同也可能是造成參考區(qū)間差異的因素。KANNENBERG等[15]的研究中使用的是氣相質(zhì)譜法，BUI等[16]的研究使用的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜。據(jù)TAIEB等[17]報道，用免疫法測定的女性睪酮水平比液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測定的高，測定的男性睪酮水平比液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測定的低。

本研究的創(chuàng)新之處在于展示了血清睪酮水平存在性別和年齡的差異，尤其是女性人群需根據(jù)年齡分組采用不同的參考區(qū)間。參考區(qū)間的準(zhǔn)確性、適用性直接影響著疾病的診治效率，參考區(qū)間的不確定甚至?xí)?dǎo)致錯誤的醫(yī)學(xué)判斷或醫(yī)學(xué)干預(yù)。本研究初步建立了重慶地區(qū)表觀健康成年人血清睪酮水平參考區(qū)間，對于本實驗室提高醫(yī)療質(zhì)量，推進合理治療，有效利用醫(yī)療衛(wèi)生資源具有非常重要的意義。

但是，本研究仍存在一些局限，首先是本研究為單中心研究，可能存在研究人群的偏倚；其次，研究納入的樣本量稍顯不足，不能滿足用于年齡細化分組后建立每組參考區(qū)間所需的最小樣本量，在后續(xù)的研究中可加大樣本量作進一步分析。

4 結(jié) 論

本研究通過對重慶地區(qū)表觀健康成年人血清睪酮水平的分析，展示了血清睪酮水平存在性別和年齡的差異，初步建立了適用于本地區(qū)的血清睪酮參考區(qū)間，尤其是女性人群需根據(jù)年齡分組采用不同的參考區(qū)間，這為臨床實踐應(yīng)用提供了有效幫助。