外周血EB病毒DNA與非霍奇金淋巴瘤的預后相關性研究*

楊國溜，陳良遠，歐巧萍

(1.福建省立醫院檢驗科，福建福州 350001；2.福建醫科大學，福建福州 350001)

淋巴瘤是一組源于淋巴系統的惡性腫瘤，在中國,淋巴瘤男性發病率約1.39/10萬，女性發病率約0.84/10萬，發病率逐年上升。根據病理學診斷，淋巴瘤可分為：霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤兩大類。EB病毒(EBV)是由EPSTEIN和BARR于1964年首次在非洲兒童BURKITT淋巴瘤的組織培養中發現的，是第一個被確認的人類致瘤病毒，Burkitt淋巴瘤、鼻咽癌與EBV密切相關[1]。近年來，研究發現EBV在霍奇金淋巴瘤、彌漫大B細胞淋巴瘤、自然殺傷(NK)/T細胞淋巴瘤及移植后淋巴組織增殖性疾病中的檢出率明顯高于其他類型的腫瘤，可能在腫瘤發病過程中起重要作用，但系統性分析EBV在淋巴瘤組織亞型和預后等流行病學的資料并不多[2-3]。因此，本研究主要采用回顧性研究方法探討EBV在不同類型非霍奇金淋巴瘤中的表達差異、EBV與乳酸脫氫酶(LDH)、NK細胞比例關系以及EBV-DNA陽性與淋巴瘤預后的關系。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2008年1-10月在福建省立醫院經組織病理學、免疫組化(根據2008版世界衛生組織造血淋巴組織腫瘤標準)明確診斷的296例淋巴瘤，臨床隨訪資料完整。296例淋巴瘤患者中，男195例，女101例，男女性別比為1.93∶1，年齡中位數為58.5歲，209例超過50歲；B細胞淋巴瘤241例，男女性別比為1.76∶1，年齡中位數為60.0歲，13例死亡，外周血EBV-DNA陽性患者52例，T細胞淋巴瘤55例，男女性別比為2.73∶1，中位年齡61.5歲，15例死亡，外周血EBV-DNA陽性患者32例；LDH升高者90例。本研究經福建省立醫院倫理委員會批準。

1.2主要儀器 實時熒光PCR儀購自美國ABI公司，型號ViiA 7 Dx；流式細胞儀購自美國BD公司。

1.3方法 標本采用靜脈采血法采集患者清晨空腹全血(乙二胺四乙酸抗凝)；EBV-DNA 載量采用實時熒光PCR儀及配套試劑盒定量檢測人全血中EBV-DNA的水平；NK細胞比例采用流式細胞儀及其配套原裝試劑檢測；依據2015美國國立綜合癌癥網絡非霍奇金淋巴瘤治療指南，病情評價分為好轉、緩解、惡化/死亡。總體生存時間定義為診斷到死亡或隨訪截止時間。

1.4統計學處理 采用SPSS17.0進行統計學分析。外周血EBV-DNA載量與年齡、性別、LDH以及NK細胞之間的關系采用獨立樣本t檢驗或者χ2進行分析；用Kaplan-Meier法建立生存曲線，Log-rank檢驗兩曲線間的統計學意義，均為雙側檢驗，P<0.05表示差異有統計學意義。

2 結 果

2.1EBV在不同類型淋巴瘤中的表達情況 在296例淋巴瘤患者中，B細胞淋巴瘤241例，EBV-DNA陽性率為21.58%；T細胞淋巴瘤55例，EBV-DNA陽性率為58.19%。EBV在NK/T細胞淋巴瘤和外周T細胞淋巴瘤中表達率較高，而在彌漫性大B細胞淋巴瘤和濾泡性淋巴瘤中表達較低，兩者差異有統計學意義(P<0.05)。

2.2B細胞淋巴瘤的臨床特征與外周血EBV-DNA載量間的關系 分析外周血EBV-DNA與B細胞淋巴瘤患者的年齡、性別、LDH、NK細胞比例之間的關系。結果顯示，外周血EBV-DNA陽性的B細胞淋巴瘤患者更可能有高LDH水平(P=0.001)，高NK細胞比例(P=0.018)。見表1。

2.3T細胞淋巴瘤的臨床特征與外周血EBV-DNA載量間的關系 分析外周血EBV-DNA載量與T細胞淋巴瘤患者的年齡、性別、LDH、NK細胞比例之間的關系。結果顯示，外周血EBV-DNA陽性的T細胞淋巴瘤患者更可能有高LDH水平(P=0.001)，而NK細胞比例無統計學意義(P=0.849)。見表2。

2.4EBV-DNA對T細胞淋巴瘤總體生存的影響 截至隨訪時間(2018年12月)，15例患者死亡，其中EBV-DNA陽性患者28例中死亡12例，T細胞淋巴瘤EBV-DNA陽性的患者比EBV-DNA陰性患者的病情進展快，預后差，二者比較差異有統計學意義(P<0.05)。見圖1。

表1 外周血EBV-DNA與B細胞淋巴瘤臨床特征的關系

表2 外周血EBV DNA與T細胞淋巴瘤臨床特征的關系

圖1 EBV-DNA對T細胞淋巴瘤總體生存的影響

2.5EBV-DNA對B細胞淋巴瘤總體生存的影響 截至隨訪時間(2018年12月)，13例患者死亡，其中EBV-DNA陽性患者57例中死亡3例，B細胞淋巴瘤中EBV陽性和EBV陰性患者的中位生存時間分別為62.0個月和73.0個月，二者比較差異無統計學意義(P=0.475)。

圖2 EBV-DNA對B細胞淋巴瘤總體生存的影響

3 討 論

EBV屬于人類皰疹病毒科，是雙鏈DNA病毒，基因組平均172 kb。國內外對于淋巴瘤患者EBV-DNA的檢測可采用全血、血漿、組織標本、單個核細胞等，但血漿或者血清中的EBV-DNA水平往往低于血細胞中的水平，所以全血是檢測EBV-DNA水平的最合適標本[4-5]。

在非霍奇金淋巴瘤中，EBV陽性的T細胞淋巴瘤遠較EBV陽性的B細胞淋巴瘤多，尤其是NK/T細胞淋巴瘤和血管免疫母細胞性T細胞淋巴瘤[6]，說明EBV可能對某一免疫表型的淋巴瘤具有特殊親和力。本次研究中也發現EBV在T細胞淋巴瘤中的表達率明顯高于B細胞淋巴瘤(P<0.05)，此結論與QIN等[7]對662例淋巴瘤的回顧分析結果相接近。EBV在不同類型淋巴瘤中的感染率不同，與CHEN等[8]研究中使用PCR檢測相應淋巴瘤所對應的結果相仿。通過數據分析顯示，EBV-DNA在不同類型的淋巴瘤中的感染率存在一定的差異性，比如NK/T細胞淋巴瘤和彌漫性大B細胞淋巴瘤的EBV-DNA陽性率存在著明顯差異(P<0.05)，在臨床中，能否把抗EBV治療作為治療某種類型淋巴瘤的手段之一需繼續深入研究。

無論是T細胞淋巴瘤還是B細胞淋巴瘤中，EBV-DNA陽性者更可能出現高LDH水平，而與患者年齡，性別無關，與安娜等[9]報道相似。LDH作為淋巴瘤預后的一個重要指標[10]，與腫瘤的負荷和侵襲性密切相關，最近研究發現EBV病毒感染可促進機體淋巴結細胞產生LDH-A和乳酸，從而影響淋巴細胞形態和增殖能力[11]。而NK細胞是一群具有NK細胞受體和T細胞受體的T細胞亞群。研究表明，NK細胞可直接作為效應細胞在抗腫瘤免疫反應中發揮效應，此外，NK細胞也與抗感染，免疫調節等相關。研究發現，腫瘤患者外周血NK細胞也會減少，而NK細胞減少，會導致機體免疫功能的逐漸下降，因此NK細胞可用于評估病情療效及免疫狀態[12-14]。本次研究中T細胞淋巴瘤EBV-DNA陽性與陰性患者的NK細胞水平差異無統計學意義，提示EBV是否感染，T細胞淋巴瘤患者的免疫功能都比較低。B細胞淋巴瘤EBV-DNA陽性比EBV-DNA陰性的患者NK細胞水平高(P<0.05)，關于EBV陽性的B細胞淋巴瘤患者NK細胞水平反而升高，可能與EBV除了以B細胞為靶細胞外，還會侵襲NK細胞，刺激NK細胞增殖有關，但有資料提及EBV陽性的淋巴瘤患者NK細胞活性通常是降低的[15-16]。EBV可通過基因異常表達而導致細胞周期紊亂，進而至人細胞惡性轉變，因此EB與淋巴瘤的預后密切相關，本研究T淋巴預后生存曲線直接表明了這一結果[17-18]。

4 結 論

EBV在不同淋巴瘤類型中的檢出率不同。EBV-DNA與B細胞淋巴瘤的預后指標LDH等相關，且與T細胞淋巴瘤的預后密切相關，因此外周血EBV-DNA檢測對淋巴瘤診斷、治療指導及預后判斷具有一定價值。