家禽胚蛋注射技術的應用研究(綜述)

賈良梁

摘? 要：本文討論了多種為提高家禽健康和生產性能對正在孵化的種蛋注射各種不同物質的禽胚注射法或胚蛋注射法，也稱卵內注射法。家禽胚胎（又稱禽胚或胚蛋）的羊膜已被證實是注射的有效部位，卵內注射通常在孵化的種蛋落盤時進行。注射物質所需的體積和劑量或濃度取決于家禽的種類、胚蛋的大小、注射的時機和部位、孵化系統、注射方式以及物質的類型。業已證明，人工注射或機械注射均能產生良好的效果。然而，商業應用要求注射方式實現自動化。本文所述的注射物質包括過去20年或更長時間內用于禽胚的疫苗、藥物、激素、競爭性排斥培養物（competitiv exclusion cultures）、益生元和營養補充劑。被批準用于胚蛋接種的疫苗包括馬立克氏病疫苗、傳染性法氏囊病疫苗、禽痘苗、新城疫疫苗和球蟲病疫苗，其中一些材料已被證明可作為提高家禽免疫力以及促進胚胎發育和雛雞出雛后生長的有效備選材料。多篇論文指出，益生菌可有效預防家禽腸道感染細菌，而葉酸、卵清蛋白和多種氨基酸（包括L-精氨酸、L-賴氨酸、L-組氨酸、β-羥基-β-甲基丁酸和蘇氨酸）的單獨使用或聯合使用已被證明能夠有效促進家禽的胚胎發育或出殼后的生產性能。此外，胞嘧啶鳥嘌呤（Cytosine-phosphate-Guanine，CpG）寡聚脫氧核苷酸、維生素C、維生素E以及百里香和香芹也具有增強家禽免疫力的潛力，碳水化合物可用于提高家禽組織的糖原儲備量，肌酸可以用于促進家禽肌肉的生長。微量元素和維生素D3可提高家禽的骨強度，而氯化鉀可作為疫苗稀釋液中的一種有效替代性電解質。這些物質和其他材料在胚蛋上的應用將會得到推廣，并會給養禽業帶來更多裨益。

關鍵詞：胚蛋注射;疫苗;家禽

中圖分類號：S815 文獻標志碼：C 文章編號：1001-0769（2020）01-0001-02

大約26年前，入孵種蛋注射技術（有時稱“卵內注射技術”、“胚蛋注射技術”或“胚蛋供養技術”）就開始用于肉雞孵化場雛雞的免疫接種。在此之前，馬立克氏病（Marek's Disease，MD）疫苗一般采用人工方法對出雛后的肉雛雞進行頸后部皮下接種。Embrex公司制造的Inovoject?注射機是首個引入美國的自動化胚蛋注射系統（圖1）。目前，超過90%的美國孵化場采用四家不同公司制造的胚蛋注射機。這些機器具有每小時接種25 000～62 000個胚蛋的能力。Williams和Zedek發表了一篇報道，在考慮種雞日齡和落盤胚齡的情況下，他們比較了兩家美國制造商生產的不同胚蛋注射系統對種蛋孵化率和孵化場廢棄物分析結果的影響。胚蛋注射的優勢包括：能夠更快地免疫接種更多的胚蛋，可降低人工成本以及人為失誤，能提前誘導雛雞產生免疫應答。胚蛋注射通常在入孵種蛋從孵化器轉移到出雛器的限定時間內快速進行，一般在孵化第17.5天和第19.2天實行，具體時間取決于所使用的孵化系統。

業已證明，采用胚蛋注射法對入孵種蛋后期胚胎接種疫苗是安全的，對孵化率的影響極小。然而，眾多因素均可影響胚蛋注射的效率，這些因素包括接種部位、注射時胚胎所處的發育階段以及孵化設施、胚蛋接種設備和疫苗制劑的無菌控制水平。Wakenell等證明，當MD疫苗被注射到入孵種蛋的氣室或尿囊膜時，疫苗不會產生有效的免疫作用;然而，當其被注射到入孵種蛋的胚胎或羊膜中時，疫苗會產生有效的免疫力。胚蛋的羊膜已被證明是疫苗的最佳注射部位，因為它能讓胚胎吸入或吸收疫苗，從而使系統轉化更完全。當采用Nature Form和Jamesway孵化系統時，入孵種蛋的羊膜可在孵化的第18.5天有效刺入，相當于胚胎發育階段評分為2或3時，此時處于胚胎啄殼之前，且胚胎的頭正處在兩腿中間。為了對準胚蛋的羊膜，Keralapurath等和Zhai等建議從肉用雞種蛋大頭頂端注入約2.49 cm。此外，用于胚蛋注射的溶液的體積很重要。McGruder等建議避免使用體積等于或大于2 000 μL的各種電解質溶液。Zhai等主張，為了使種蛋孵化率達到90%，碳水化合物注射液的體積不應超過700 μL。MD商業化疫苗的常用體積是50 μL。

被批準可用于胚蛋接種的疫苗包括馬立克氏病疫苗、傳染性法氏囊病疫苗、禽痘苗、新城疫疫苗和球蟲病疫苗。雖然胚蛋注射法尚未得到商業化應用，但是在過去的20年中，不同的實驗室對其他疫苗、藥物、激素、競爭性排斥培養物以及多種營養補充劑在提高雛雞免疫力和促進其生長方面的應用進行了不斷地研究，這些研究的結果已經發表于多種出版物上。為了調查這些疫苗、培養物和營養補充劑的潛在效力和商業化應用前景，相關研究人員引入了人工接種（人工注射）和自動接種（商用單蛋或多蛋注射）。除了已商業化應用的疫苗外，其他試驗性測試疫苗包括禽流感疫苗和雞敗血支原體病疫苗。

眾多營養素（如卵清蛋白、氨基酸、縮氨酸、碳水化合物、核苷酸、電解質、維生素、L-肉毒素、肌酸和植物提取物）可通過胚蛋注射法注射促進入孵種蛋的胚胎發育，提高種蛋孵化率和雛雞出殼后的生產性能。Pinchasov和Noy以及Vieira和Moran指出，在生產中，人們常會在原種雞場和肉雞場見到雛雞由于推遲入舍而無法及時采食和飲水，這可能會對雛雞隨后的生產性能產生不利影響。胚蛋供養已經受到養禽業的關注。Uni和Ferket指出，在出殼后的關鍵時期（此時它們必須適應新的環境和營養源），出殼雛雞的死亡率可以通過在胚胎發育后期注射胚蛋營養素來降低。然而，這些營養素的使用均待商業化養禽業的認可和推廣應用。

本綜述的目的是簡要回顧家禽胚蛋注射技術的起源和發展，并評估其在疾病預防和營養補充方面的各種應用以及后續文獻報道的相關結果。

原題名：In ovo applications in poultry： a review（英文）

原作者：E. D. Peebles（密西西比州立大學）