>>訾玉玲一、 原題呈現[生物——選修3:現代生物科技專題]基因工程中可以通過PCR技術擴增目的基因。回答下列問題。(1)基因工程中所用"/>
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[生物——選修3:現代生物科技專題]
基因工程中可以通過PCR技術擴增目的基因。回答下列問題。
(1)基因工程中所用的目的基因可以人工合成,也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括_____和_____。
(2)生物體細胞內的DNA復制開始時,解開DNA雙鏈的酶是 。在體外利用PCR技術擴增目的基因時,使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是 。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的_____。
(3)目前在PCR反應中使用Taq酶而不使用大腸桿菌DNA聚合酶的主要原因是_____。
(1)基因組文庫 cDNA文庫
(2)解旋酶 加熱至 90℃ ~95℃ 氫鍵
(3)Taq酶熱穩定性高,而大腸桿菌DNA聚合酶在高溫下會失活
筆者對2016年到2019年全國Ⅰ卷選修3部分的試題進行了對比,如下表:

2016——2019年全國Ⅰ卷選修3試題比較
2019年選修3試題注重對基礎知識的考查,根據抽樣模擬數據分析,為近四年來平均分最高,考生作答情況良好,滿分率大于25%,高于13分的人數超過1/3,成績圖呈現出不完全正態分布。當然,評價試卷難度不能只看某一道試題,雖然38題比較容易,但全卷整體答題情況顯示試題是難易適中的。

圖1
2019年全國Ⅰ卷理綜生物38題分值分布圖
(橫軸為分數,縱軸為某得分考生占考生總數的比例)

圖2
2019年全國Ⅰ卷理綜生物38題模擬抽樣1

圖3
2019年全國Ⅰ卷理綜生物38題模擬抽樣2
通過對抽樣答題情況分析,匯總錯誤原因如下。
基因文庫、基因組文庫和部分基因文庫中cDNA文庫的概念層級關系弄不清楚,把基因組文庫答成“基因文庫”,把cDNA文庫答成“cDNA”等含義模糊的答案。甚至有的同學自創用語,把教材中“國家圖書館”的比喻當成“國家基因庫”,基礎知識亟待加強。
各種酶催化的化學鍵不清楚,該答的化學鍵寫成“空間結構”“堿基結構”等。
PCR反應中使用Taq酶而不用大腸桿菌DNA聚合酶的原因,應該同時答出“Taq酶熱穩定性高”和“大腸桿菌DNA聚合酶高溫下會失活”兩層含義,但很多同學只答出其中一層含義。甚至有個別同學出現圖3中的科學性錯誤。
基因文庫是將含有某種生物不同基因的許多DNA片段,導入受體菌的群體中儲存,各個受體菌分別含有這種生物不同的基因。根據所含基因的不同可以分為基因組文庫和部分基因文庫,部分基因文庫重點介紹了cDNA文庫。人教版選修3教材第10頁“生物技術資料卡”中,介紹了基因文庫的構建方法,并列表對比了兩種文庫的區別。對于真核生物來說,基因組文庫包含了基因的外顯子、內含子和編碼區上游及下游的非編碼序列,而cDNA文庫來源于編碼區轉錄成的mRNA的反轉錄,不包含內含子和非編碼區。原核基因的基因組文庫的基因包含編碼區和非編碼區,而cDNA文庫不包含非編碼區。
這兩個過程的共同點是都需要模板和脫氧核苷酸為原料,主要不同體現在以下幾點。
①發生的場所不同:DNA復制在細胞內,PCR技術在細胞外,主要在PCR擴增儀內。
②解旋方式不同:DNA復制在解旋酶催化下完成解旋,而PCR技術中DNA在高溫作用下解旋。
③涉及的酶的種類不同:細胞內DNA復制依賴解旋酶和DNA聚合酶等催化,而PCR技術中要使用耐高溫的Taq酶,因其特殊性不需要每個循環加酶,使成本降低,技術簡捷。
④溫度條件不同:DNA復制在細胞內溫和溫度下完成,而PCR技術需要控制溫度,在較高溫度下進行。
⑤引物來源不同:細胞內DNA復制通常從固定的起始點開始,先合成RNA引物,再合成DNA片段,最后把片段連接成完整的子鏈,進而形成子代DNA。為什么在細胞內DNA合成由RNA引物引發?因為DNA聚合酶不能啟動新鏈合成,只能催化已有鏈的延長。RNA聚合酶只要有模板存在,不需要引物就可以轉錄出新的RNA。因此,細胞內先由RNA聚合酶合成RNA引物,DNA聚合酶再從RNA引物的3ˊ端開始合成新的DNA鏈。PCR技術中需要人工合成與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物,引物延伸一般在72℃下進行。

①解旋酶:這一類酶包括許多蛋白質,它們作用的底物是DNA,利用ATP釋放能量,作用結果是斷開堿基對之間的氫鍵,驅動DNA兩條鏈分開,形成單鏈DNA。
②限制酶:基因工程中重要的工具酶之一,通過對DNA分子特定位點中的磷酸二酯鍵的水解實現切割作用,限制酶切割DNA的方式有兩種,交錯切割形成黏性末端,平整切割形成平末端。
③DNA酶:作用于DNA分子,斷開磷酸二酯鍵,將DNA水解成單個的脫氧核苷酸。
④DNA聚合酶:一般是識別出模板DNA鏈上的一個堿基,按照堿基互補配對原則,從細胞質中“選出”一個互補的脫氧核苷酸(dNTP),借助形成磷酸二酯鍵,進而形成新的DNA。
⑤Taq酶:是從水生棲熱菌中分離出來的,作用效果與DNA聚合酶相同,特點是熱穩定性高,耐高溫,可以耐受90℃以上的高溫而不失活。人教版選修3教材16頁“拓展視野”中,介紹了中國科學家對PCR的貢獻——發現并分離了耐高溫的DNA聚合酶。
⑥DNA連接酶:是基因工程重要的工具酶之一,具有底物專一性,能在DNA雙鏈中的單鏈缺口處,將兩個核苷酸以5ˊ端磷酸根與3ˊ端羥基共價連接,催化修復斷裂的單鏈DNA的磷酸二酯鍵,進而封閉缺口,形成新的DNA。該酶不同于DNA聚合酶的是作用于DNA分子片段而非單個脫氧核苷酸。
基因工程這項新興技術在育種、基因治療、藥物生產等方面,都有廣泛應用。最近四年選修3考查的重點都在基因工程,說明這部分內容具有先進技術的典型性,但不等于高考對選修3的考查僅僅局限在基因工程。再向前追溯幾年,細胞工程、胚胎工程、生態工程的知識都曾經是考查的內容。因此,2020年的備考需要抓全冊,不偏廢,有重點,無虛焊。
在知識主線的牽引下,抓核心重點知識,如“基因工程”復習中的“二、三、四”,即兩種工具酶、三種工具、四步曲,必須熟記熟背,全面理解,系統掌握。但是對于一些細節也要關注,如:Ti質粒上T-DNA怎樣從農桿菌轉移到植物細胞內?構建基因表達載體時會出現哪些錯誤的連接方式?這些連接方式通過怎樣的方法可以篩選出來?復習時不能眉毛胡子一把抓,而是把教材知識清障之后,有重點地縱橫聯系,要做到“點點通,連成線;線線清,聚成面”,讓選修3的知識脈絡清晰,體系完整。
因為選修3是現代生物科技專題,每一個工程技術都是相對成熟、廣泛應用的,所以,任何一個專題的復習都不能只停留在概念的背誦上,而要聯系具體實例,真正掌握這項技術在生產生活實踐中的具體應用,能夠分析和解決現實問題,做到弄懂原理、知道過程、熟練應用。
《現代生物科技專題》共有4大工程,以工程技術為主線可以對比這4個工程的原理、技術和目的等。以每一章前邊的“科技探索之路”為主線,可以串起每一個工程發展的過程及學習內容所處的位置。如基因工程中除了之前的“二、三、四”外,還可以以“受體細胞”為主線,總結轉基因植物、轉基因動物和轉基因微生物的方法及應用。“細胞工程”可以以細胞工程技術為主線,或者以全能性大小為主線進行復習。“胚胎工程”和“生態工程”也可以挖掘出不同主線,構建出有主干有分支的知識網絡,做到廣角透視,形成“枝繁葉茂”的知識樹。