P53、P63、P120在甲狀腺癌患者的表達(dá)及聯(lián)合檢測(cè)診斷效能研究

薛玉欽

福建醫(yī)科大學(xué)附屬福州市第一醫(yī)院病理科，福建福州 350009

甲狀腺癌是常見(jiàn)的甲狀腺惡性腫瘤，占全身惡性腫瘤的1%[1]。目前，臨床對(duì)于甲狀腺癌發(fā)病機(jī)制尚未闡明，普遍認(rèn)為與地區(qū)、種族、性別等有關(guān)[2-3]。手術(shù)組織檢查是甲狀腺癌患者常用診斷方法，并將其視為“金標(biāo)準(zhǔn)”，但是檢查具有一定的風(fēng)險(xiǎn)性、創(chuàng)傷性，且該方法可重復(fù)性較差[4]。P53、P63、P120均為臨床常見(jiàn)的抑制基因，在甲狀腺癌患者中的表達(dá)已有相關(guān)報(bào)道，但是在甲狀腺癌患者中的研究較少[5-6]。本研究選取2018 年4 月～2020 年1 月甲狀腺癌患者78 例作為研究對(duì)象，探討P53、P63、P120 聯(lián)合檢測(cè)在甲狀腺癌患者中的表達(dá)及診斷效能ROC 曲線分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018 年4 月～2020 年1 月福建醫(yī)科大學(xué)附屬福州市第一醫(yī)院治療的甲狀腺癌患者78 例作為研究對(duì)象，男45 例，女33 例，年齡37 ～71 歲，平均（53.3±4.2）歲；體重指數(shù)（BMI）20 ～25kg/m2，平均（22.69±2.13）kg/m2；病理類型：乳頭狀癌42 例，濾泡狀癌36 例；手術(shù)類型：甲狀腺全/次切術(shù)聯(lián)合中央?yún)^(qū)淋巴結(jié)清掃術(shù)56 例，改良頸闊術(shù)22 例。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）均符合甲狀腺癌診斷標(biāo)準(zhǔn)，均經(jīng)手術(shù)組織檢查確診；（2）均完成P53、P63、P120 檢查，且患者均可耐受。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并器質(zhì)性疾病、其他部位惡性腫瘤或認(rèn)知功能異常者；（2）手術(shù)前行放化療、生物免疫治療者；（3）合并凝血功能異常、自身免疫系統(tǒng)疾病者。本研究均獲得醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者/家屬均簽署知情同意書(shū)。

1.2 方法

（1）儀器與設(shè)備。切片機(jī)，購(gòu)自德國(guó)Leitz 公司；顯微鏡，購(gòu)自日本Olympus CH20B；微波爐，購(gòu)自于廣州格蘭仕電器有限公司；隔水式電熱恒溫箱，購(gòu)自于上海市躍進(jìn)醫(yī)療器械一廠。（2）標(biāo)本采集。所有患者均擬行手術(shù)治療，手術(shù)過(guò)程中取病灶組織及癌旁組織（距離病灶≥3cm）。（3）免疫組化。采用免疫組織化學(xué)法測(cè)定不同組織中P53、P63、P120蛋白陽(yáng)性率。取上述獲取的標(biāo)本組織，進(jìn)行常規(guī)脫蠟、水洗后，采用濃度為0.3%H2O2進(jìn)行封閉，采用微波法對(duì)抗原進(jìn)行修復(fù)，并給予血清封閉液進(jìn)行封閉；向獲得的組織中加入羊抗人P53、P63、P120 蛋白抗體單抗，生物化二抗P53、P63、P120 蛋白，經(jīng)DBA 顯色后給予蘇木素染色，上述操作完畢后進(jìn)行封片。（4）判斷標(biāo)準(zhǔn)。在倒置顯微鏡下對(duì)免疫組化結(jié)果進(jìn)行判讀。判讀時(shí)分別從細(xì)胞膜上染色細(xì)胞的陽(yáng)性與總細(xì)胞比例進(jìn)行。0 分：無(wú)陽(yáng)性染色細(xì)胞；1 分：具有陽(yáng)性染色細(xì)胞，但是染色部位呈淺黃色；2 分：具有陽(yáng)性染色細(xì)胞，但是染色部位呈棕黃色；3 分：具有陽(yáng)性染色細(xì)胞，但是染色部位呈棕褐色[7-8]。（5）診斷效能。繪制ROC 曲線，分析P53、P63、P120 聯(lián)合檢測(cè)在甲狀腺癌患者中的診斷效能[靈敏度=真陽(yáng)性例數(shù)/（真陽(yáng)性例數(shù)+假陰性例數(shù)）×100%；特異度=真陰性例數(shù)/（真陰性例數(shù)+假陽(yáng)性例數(shù)）×100%]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS18.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料行χ2檢驗(yàn)，采用[n（%）]表示，計(jì)量資料行t 檢驗(yàn)，采用（）表示，P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同組織中P53、P63、P120蛋白陽(yáng)性率比較

甲狀腺癌病灶組織中P53、P63、P120 蛋白陽(yáng)性率分別為71.79%、75.64%、73.08%，均高于癌旁組織中的3.85%、5.13%、3.85%（P ＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 不同組織中P53、P63、P120蛋白陽(yáng)性率比較[n（%）]

2.2 P53、P63、P120聯(lián)合檢測(cè)在甲狀腺癌患者中的診斷效能

ROC 曲線結(jié)果表明，P53、P63、P120 聯(lián)合檢測(cè)在甲狀腺癌患者中的診斷靈敏度高于單一P53、P63、P120 檢測(cè)（P ＜0.05）；特異度低于單一P53、P63、P120 檢測(cè)（P ＜0.05），見(jiàn)表2 和圖1。

表2 P53、P63、P120聯(lián)合檢測(cè)在甲狀腺癌患者中的診斷效能

圖1 P53、P63、P120 檢測(cè)在甲狀腺癌患者中的診斷ROC 曲線

3 討論

甲狀腺癌是臨床上發(fā)生率較高的惡性腫瘤，其發(fā)病機(jī)制尚未闡明，普遍認(rèn)為與碘、放射線、促甲狀腺激素（TSH）慢性刺激等有關(guān)，由于患者發(fā)病早期臨床癥狀缺乏典型性，導(dǎo)致臨床診療難度，影響患者預(yù)后[9]。近年來(lái)，P53、P63、P120 聯(lián)合檢測(cè)在甲狀腺癌患者中得到應(yīng)用，且效果理想[10-11]。本研究中，甲狀腺癌病灶組織中P53、P63、P120 蛋白陽(yáng)性率分別為71.79%、75.64%、73.08%，均高于癌旁組織中的3.85%、5.13%、3.85%（P ＜0.05），說(shuō)明P53、P63、P120 在甲狀腺癌患者中呈高表達(dá)，能反映患者疾病嚴(yán)重程度，可指導(dǎo)臨床診療。P53 是臨床研究較多的基因，作為人類腫瘤中發(fā)生變異頻率最高的腫瘤抑制基因，其表達(dá)異常與50.0%以上腫瘤發(fā)生有關(guān)[12]。臨床研究表明[13]，P53 基因位于17P13.1，編碼53Kd 蛋白，含有5 個(gè)不同的功能區(qū)。同時(shí)，P53 能通過(guò)靶基因P21 控制周期依賴性激酶誘導(dǎo)G1/S 阻滯，能抑制cdc25c 并參與G2/M 關(guān)卡的調(diào)控。國(guó)內(nèi)學(xué)者研究表明，P53 蛋白是P53 基因突變的產(chǎn)物，屬于是一種腫瘤促進(jìn)因子，其活性對(duì)腫瘤的形成具有重要的作用。P63 屬于P53 家族新成員，具有高度的同源性，其功能上具有相似性，能抑制細(xì)胞的增殖與誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。臨床研究表明[14]，P63是一種新的候選腫瘤抑制基因，其表達(dá)在甲狀腺癌患者中呈高表達(dá)，能反映患者疾病嚴(yán)重程度。P120是連環(huán)單白的一種，屬于糖蛋白家族成員之一，在不同細(xì)胞表達(dá)不同的同共蛋白。臨床研究表明[15]，P120 蛋白在正常組織中表達(dá)水平較低或不表達(dá)，但是在腫瘤尤其是甲狀腺腫瘤組織中，持續(xù)的應(yīng)激反應(yīng)將會(huì)引起P120 呈高表達(dá)，能直接參與疾病的發(fā)生、發(fā)展。為了進(jìn)一步分析P53、P63、P120 在甲狀腺中患者中的診斷效果，本研究中繪制ROC 曲線，結(jié)果表明，P53、P63、P120 聯(lián)合檢測(cè)在甲狀腺癌患者中的診斷靈敏度高于單一P53、P63、P120 檢測(cè)（P ＜0.05）；特異度低于單一P53、P63、P120 檢測(cè)（P ＜0.05），說(shuō)明P53、P63、P120聯(lián)合檢測(cè)用于甲狀腺癌患者中能獲得較高的診斷效能，能為臨床診療提供依據(jù)和參考。

綜上所述，P53、P63、P120 在甲狀腺癌患者中呈高表達(dá)，不同指標(biāo)聯(lián)合測(cè)定用于甲狀腺癌患者中能獲得較高的診斷效能，可指導(dǎo)臨床診療。