阿魏酸對大鼠體內氯沙坦鉀的藥代動力學影響

吳煜 林益淵 王瓊 楊金招 熊建華

4-羥基-3-甲氧基苯丙烯酸是植物中普遍存在的一種功能性酚酸類物質，也被稱為阿魏酸，是川芎、升麻、當歸等常用藥物中的主要功能成分之一［1-3］。有研究發現，中草藥長期或短期應用均會影響機體較多內源性和外源性物質的功能［3］，如銀杏內酯A會影響PXR的表達、貫葉金絲桃會影響CYP3A4的活性。PXR在調節藥物代謝Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ相酶的活性及表達水平有著重要的作用。氯沙坦是心血管系統疾病治療常用藥物［4-5］。阿魏酸被現代藥理證實具有免疫調節、抗癌、抗菌消炎、抗血栓、抗氧化等作用［6］。有學者發現阿魏酸長期使用會對氯沙坦鉀的藥代動力學產生影響［7］。本文探討阿魏酸對大鼠體內氯沙坦鉀的藥代動力學影響。

1 材料與方法

1.1 實驗藥品及儀器（1）實驗藥品：阿魏酸由北京百靈威科技有限公司提供，藥品編號為408508，純度為99%。氯沙坦鉀片由杭州默沙東制藥有限公司提供，國藥準字號為H20000371，規格50mg/片*7片。羧甲基纖維素鈉（CMC-Na）由中國藥品生物制品檢定所提供，批次為315824。（2）實驗儀器：①超高效液相色譜儀：美國Waters公司生產，型號為ACQUITYI-Class；②三重四級桿質譜儀：美國Waters公司生產，型號為XevoTQD。

1.2 實驗大鼠采用SD大鼠，共24只，8周齡，均為雄性，體質量為284~328g，平均（301.28±15.85）g。

1.3 實驗方法按照隨機數字法將24只雄性SD大鼠分為實驗組和對照組，每組12只。對照組：每天上午8點灌胃0.5%CMC-Na，灌服劑量為10ml/kg，30min后灌服氯沙坦鉀混懸液，灌服劑量為5mg/（kg·d），連續灌服7d。實驗組：每天上午8點灌胃阿魏酸混懸液，灌服劑量為50mg/（kg·d），30min后灌服氯沙坦鉀混懸液，灌服劑量為5mg/（kg·d），連續灌服7d。分別于灌服前及灌服后20min、30min、45min、60min、90min、120min、180min、240min、360min、480min、600min、720min、24h采集SD大鼠的尾靜脈血0.3ml，并置于EP管中（含有肝素抗凝），進行離心處理，離心條件為（13000r/min，離心10min），采集上清液，并在-80℃中保存，后進行統一測定。

1.4 測定方法采用超高效液相色譜-四極桿超高分辨質譜聯用儀檢測各樣本中的氯沙坦濃度水平，具體操作方法：（1）開機，啟動設備，進入儀器控制面板，設置所需的各項相關參數，其中質譜儀部分參數設置如下：ES+、源溫度設置為150℃、毛細管電壓設置為3.5kV、去溶劑化溫度設置為400℃、去溶劑化氣體（氮氣）流速為1000L/h、錐孔氣體（氮氣）流速為50L/h；色譜儀部分參數設置如下：每分鐘流量控制為0.4ml/min，色譜柱溫度設置為35℃，進樣量設為2μl。（2）設置分析用流動相清洗流路，等待色譜柱、系統的平衡，基線穩定，開始進樣分析。其中色譜柱為BEHC18的色譜柱（規格為2.1mm×50mm，1.7μm），流動相為美國Merk公司提供的乙腈（A）-0.1%的甲酸（B）。檢測時長為2min，分別為0~0.3min，55%A；0.3~0.5min，55%~90%A；0.5~1.2min，90%A；1.2~1.7min，90%~55%A；1.7~2.0min，55%A。將替米沙坦（上海玉博生物科技有限公司，產品編號：S201587，純度>98%）作為內標。分析結束，數據處理。

1.5 分析方法驗證將替米沙坦（Telmisartan）作為內標，氯沙坦（Losartan）在超高效液相色譜-四極桿超高分辨質譜聯用儀的相關檢測條件下，其出峰時間分別為0.62min，0.84min。見圖1。

圖1 Telmisartan與Losartan高效液相色譜圖

1.6 統計學方法血藥濃度按照非房室模型依賴性參數的方法，采用DAS3.0軟件進行計算。采用SPSS21.0版對藥代動力學參數進行統計學描述，計量資料以（±s）表示，用t檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組SD大鼠不同時間的平均血藥濃度分布情況 實驗組灌服后20min、30min、45min、60min的氯沙坦血藥濃度與對照組較為接近；灌服后90min、120min、180min、240min、360min、480min、600min、720min氯沙坦血藥濃度高于對照組（P<0.05）。灌服后24h時間段內，兩組氯沙坦血藥濃度差距逐漸縮小。見圖2。

圖2 兩組SD大鼠不同時間的平均血藥濃度分布情況

2.2兩組SD大鼠藥代動力學參數比較實驗組T1/2、AUC（0-t）、AUC（0-∞）低于對照組，差異均有統計學意義（P<0.05），實驗組CL/F、Cmax高于對照組，差異有統計學意義（P<0.05）。兩組Tmax比較，差異無統計學意義（P>0.05）。見表1。

表1 兩組SD大鼠藥代動力學參數比較（±s）

表1 兩組SD大鼠藥代動力學參數比較（±s）

組別 n T1/2（h） CL/F［L/（h·kg）］ AUC（0-t）［ng/（ml·h）］ AUC（0-∞）［ng/（ml·h）］ Cmax（ng/ml） Tmax（h）實驗組 12 1.48±0.21 2186.89±131.54 2174.05±135.62 2021.62±132.65 832.63±92.36 0.57±0.22對照組 12 1.80±0.52 2024.58±254.36 2398.08±248.62 2342.25±256.38 702.65±65.82 0.64±0.18 t值 2.685 2.028 3.125 3.524 2.952 1.852 P值 0.038 0.049 0.018 0.012 0.031 0.053

3 討論

本資料對SD大鼠進行阿魏酸聯合氯沙坦灌服，其中阿魏酸普通人群常規用量為100~400mg/d（注射液），100~200mg/d（片劑）。氯沙坦普通人群常規使用劑量為50mg/d，根據等效劑量換算原則，計算SD大鼠使用的阿魏酸的灌服劑量為50mg/（kg·d），氯沙坦的灌服劑量為5mg/（kg·d），但由于阿魏酸在水中的溶解度不高，且對光敏感，為此本研究通過以羧甲基纖維素鈉（CMC-Na）為溶媒，制成阿魏酸混懸液進行灌注。實驗組灌服后的20min、30min、45min、60min的氯沙坦血藥濃度與對照組較為接近；灌服后90min、120min、180min、240min、360min、480min、600min、720min的氯沙坦血藥濃度高于對照組。灌服后24h時內，兩組氯沙坦血藥濃度差距逐漸縮小。實驗組T1/2、AUC（0-t）、AUC（0-∞）低于對照組，差異均有統計學意義（P<0.05），實驗組CL/F、Cmax高于對照組，差異有統計學意義（P<0.05）。兩組Tmax對比，差異無統計學意義（P>0.05）。表明阿魏酸會改變氯沙坦的藥代動力學特征。推測其原因：（1）CYP3A4和（或）CYP2C9是氯沙坦主要代謝酶。有研究發現機體代謝氯沙坦的主要酶類為CYP450酶系，口服氯沙坦后會經CYP450酶系中的CYP3A4和（或）CYP2C9進行生物轉化，并有接近14%的氯沙坦被代謝為氯沙坦羧酸（E-3174），后者是發揮相應生理作用的活性物質［8］。有研究［9］發現阿魏酸灌服后會引起增加CYP2C9、CYP3A4的啟動子的活性，氯沙坦代謝加快。提示臨床上在聯合使用阿魏酸及氯沙坦時，需考慮兩者間的相互作用，從而盡可能避免藥物間的相互作用所帶來的安全性問題，提高治療效果。（2）口服氯沙坦吸收。有研究［10］證實阿魏酸對機體有機陰離子轉運體的活性有明顯抑制作用，會影響部分藥物的吸收，但具體機制仍不明確。而氯沙坦口服后，其吸收效果是否受阿魏酸的影響，目前仍未有相關的研究證實。本資料中實驗組和對照組在灌服后60min內氯沙坦平均血藥濃度較為相似，提示阿魏酸對氯沙坦口服吸收影響不明顯。

綜上所述，阿魏酸聯合氯沙坦使用，氯沙坦的藥代動力學改變更多是有由于阿魏酸增加了CYP2C9、CYP3A4等酶類的活性，而不是通過影響氯沙坦的口服吸收導致。