雷公藤紅素自微乳處方篩選研究

張 龍，馬 卓，張玉良

(1.武漢市中醫醫院，湖北 武漢 430014；2.湖北工業大學 生物工程學院，湖北 武漢 430068；3.華中科技大學同濟醫學院附屬協和醫院 藥劑科，湖北 武漢 430040)

雷公藤紅素(Celastrol)又名南蛇藤素，是存在于衛矛科和翅子藤科中的一種三萜類化學成分。其作為新型天然蛋白酶體抑制劑，在癌癥的預防和治療方面具有巨大的開發潛力[1]，具有抗氧化、抗類風濕、抗老年癡呆癥等功效。但雷公藤紅素存在較大毒性以及水難溶性等不足。自微乳化給藥體系(self microemul- sifying drug delivery system SMEDDS)是由藥物、油相、乳化劑和助乳化劑組成的均一、透明的溶液。在特定溫度和溫和攪拌的條件下，遇水自發乳化形成粒子在100nm以下的乳劑為微乳[2]。微乳與普通乳劑相比具有能包裹難溶藥物、提高藥物穩定性、降低毒性的優點。本實驗擬研制雷公藤紅素自微乳，為該藥的臨床應用奠定基礎。

1 儀器與材料

AR3130型電子分析天平(梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司)；HH-2型恒溫水浴鍋(金壇市杰瑞爾電器有限公司)；QL-901旋渦混合器(江蘇海門市麒麟醫用儀器廠)；KQ-300TDB高頻數控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；TGL-16C離心機(上海安亭科學儀器廠)；99-2強磁力攪拌器(鞏義市予華儀器有限公司)；DELTA320pH計(上海精密儀器儀表有限公司)；雷公藤紅素(Ce)原料藥由武漢植物園提供；甲醇(色譜純)(美國 Tedia)；肉豆蔻酸異丙酯(IPM)(武漢市合中化工制造有限公司)；棕櫚酸異丙酯(IPP)(武漢市合中化工制造有限公司)；食用大豆油(湖北中昌植物油有限公司)；聚氧乙烯氫化蓖麻油(Cremophor-RH40)(德國 BASF)；聚乙二醇辛基苯基醚(OP-10)、吐溫-80、吐溫-20、乙醇、正丁醇、丙二醇、甘油、PEG400、油酸乙酯、油酸、甲醇(分析純)、冰醋酸(分析純)均購自國藥集團化學試劑有限公司。

2 方法與結果

2.1 處方選擇

2.1.1 油相選擇

2.1.1.1 油相對自微乳化形成區域的影響 將乳化劑Cremophor RH40、助乳化劑正丁醇以Km值為3∶2的比例混合均勻，在不斷攪拌下分別滴加到20%油水分散液中，其中油相分別為IPM、IPP、油酸乙酯、油酸、注射用大豆油、玉米油和花生油，觀察是否澄清透明和微有乳光，并繪制成偽三元相圖，見圖1。

圖1 油相對自微乳化形成區域的影響

2.1.1.2 油相對雷公藤紅素的溶解度比較 取一定量IPM、IPP、油酸乙酯、油酸置于西林瓶中，分別加入過量的雷公藤紅素，渦旋，密封瓶口。在60 ℃水浴中放置lh，然后在37 ℃水浴中磁力攪拌24 h，室溫靜置24 h，4 000 rmp離心10 min，取上清液用甲醇溶液稀釋至適宜倍數后在參考文獻色譜條件[3-4]下測定其峰面積。

根據偽三元相圖和CE在油相中的溶解度(見圖2)，擬選用IPM、油酸、油酸乙酯作為制備自微乳的油相。

圖2 Ce在不同油相中的溶解度比較

2.1.2 乳化劑選擇 以IPM為油相，正丁醇為助乳化劑，將乳化劑Cremophor RH40、Tween80、Tween20、OP-10分別與正丁醇按Km值為3∶2的比例混勻，再與油相按不同比例混勻(1∶9、2∶8、3∶7、4∶6、5∶5、6∶4、7∶3、8∶2、9∶1)，逐漸滴加水并渦旋，觀察是否澄清透明和微有乳光，并繪制成偽三元相圖，見圖3。

根據偽三元相圖我們選用CremophorRH40與Tween80制備自微乳。

圖3 乳化劑對自微乳化形成區域的影響

2.1.3 助乳化劑選擇 以IPM為油相，Cremophor RH40為乳化劑，將助乳化劑正丁醇、無水乙醇、1，2-丙二醇、甘油、PEG400與乳化劑按Km值為3∶2的比例混勻，然后與油相按不同比例混勻，逐漸滴加水并渦旋，觀察是否澄清透明和微有乳光，并繪制偽三元相圖，見圖4。根據偽三元相圖選用正丁醇作為助乳化劑。

圖4 助乳化劑對自微乳化形成區域的影響

2.1.4 Km值(乳化劑/助乳化劑)選擇 以IPM為油相，CremophorRH40為乳化劑，正丁醇為助乳化劑。將不同比例乳化劑與助乳化劑混合均勻后，分別與油相按不同比例混勻，逐漸滴加水并渦旋，觀察是否澄清透明和微有乳光，并繪制偽三元相圖。見圖5。結果以3∶2時為最佳。

圖5 Km值對自微乳化相圖的影響

2.2 最優處方確定

根據上述初步篩選結果，我們選擇IPM、油酸乙酯、油酸為油相，Cremophor 40和Tween-80為乳化劑，正丁醇為助乳化劑，Km值為3∶2，得到空白自微乳處方如下。

處方1：IPM∶Cremophor RH40∶正丁醇∶=3∶4.2∶2.8;

處方2：IPM∶Tween 80∶正丁醇∶=3∶4.2∶2.8；

處方3：油酸乙酯∶Cremophor RH40∶正丁醇∶=3∶4.2∶2.8；

處方4：油酸乙酯∶Tween 80∶正丁醇∶=3∶4.2∶2.8；

處方5：油酸∶Cremophor RH40∶正丁醇∶=3∶4.2∶2.8；

處方6：油酸∶Tween 80∶正丁醇∶=3∶4.2∶2.8。

將上述6種處方按比例稱取各組分于透明西林瓶中，加入適量的雷公藤紅素，給以適當攪拌。以藥物在自微乳中的穩定性、形成微乳的粒徑為衡量指標綜合考慮，選擇最佳處方配比，作為最優處方。

2.2.1 藥物在自微乳中的穩定性 將雷公藤紅素自微乳放置于透明西林瓶中，分別置于40 ℃、60 ℃及4500lx光照條件下進行加速試驗，于第5、10天分別取樣，測定自微乳中雷公藤紅素的含量。結果見表1、表2、表3。結果表明：處方1、處方2優于其他處方。

表1 40 ℃情況下各處方的試驗結果

表2 60 ℃情況下各處方的試驗結果

表3 4500 lx光照情況下各處方的試驗結果

2.2.2 粒徑的測定 從“2.2.4”中穩定的自微乳處方取出1 mL，用水稀釋100倍，在50 r/min條件下溫和攪拌均勻，作為供試液，用Zetasizer Nano光子相關光度儀在25 ℃測定微乳的粒徑。從圖6、圖7中可以看出，處方1的有效粒徑為75.8 nm，符合微乳的特征。

圖6 處方1的粒徑及分布

圖7 處方2的粒徑及分布

2.2.3 微乳制備 將雷公藤紅素溶解于處方量的IPM中，然后依次將Cremophor RH40、正丁醇加入含雷公藤紅素的IPM溶液中，緩慢攪拌或渦旋至混合均勻，混勻后即得雷公藤紅素自微乳。

2.2.4 自微乳中藥物含量測定 取一定量空白自微乳于西林瓶中，向其中分別加入過量的雷公藤紅素，渦旋，密封瓶口。在60 ℃水浴中放置1 h，然后在37 ℃水浴中磁力攪拌24 h，室溫靜置24 h，4 000 rmp離心10 min，取上清液用甲醇溶液稀釋至適宜倍數后以色譜條件進行測定，測得雷公藤紅素在自微乳中的溶解度為63.2 mg/mL。

3 討論

本實驗最終選用的Cremophor RH40為非離子型乳化劑，其比離子型乳化劑的毒性小。所選用的正丁醇是中等長度的直鏈醇，其助乳化效果優于有支鏈或較短的醇類。