HPLC法快速測(cè)定木香分氣丸中α-香附酮的含量

王麗瓊，吳 麗

(樂(lè)山市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，四川 樂(lè)山 614000)

木香分氣丸主治寬胸消脹、理氣止嘔，用于肝郁氣滯、脾胃不和所致胸膈痞悶、兩肋脹滿、胃脘疼痛、倒飽嘈雜、惡心嘔吐、暖氣吞酸，由木香、醋香附、陳皮、姜厚樸、枳實(shí)、醋莪術(shù)、炒山楂等十六味藥材制成。木香分氣丸中醋香附的使用量較大，香附為莎草科莎草屬植物莎草的干燥根莖，主要成分為揮發(fā)油，其中α-香附酮是其主要有效成分之一[1-7]。《中國(guó)藥典》2015年版一部中“木香分氣丸”沒(méi)有香附相關(guān)的鑒別和含量測(cè)定項(xiàng)目。參閱相關(guān)文獻(xiàn)，梁艷[8]、陳曉明等[9]采用HPLC法同時(shí)測(cè)定木香分氣丸中柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷的含量。孫全明等[10]采用HPLC法測(cè)定木香分氣丸中丁香酚、木香烴內(nèi)酯、去氫木香烴內(nèi)酯、厚樸酚與和厚樸酚的含量。汪武贊等[11]采用氣相色譜法同時(shí)測(cè)定木香分氣丸中厚樸酚、和厚樸酚、α-香附酮、乙酸龍腦酯、丁香酚5種揮發(fā)性成分含量。相關(guān)研究中未見(jiàn)HPLC法測(cè)定木香分氣丸中α-香附酮含量的報(bào)道。為了有效控制木香分氣丸質(zhì)量，本研究采用超聲直接提取，HPLC法快速測(cè)定木香分氣丸中α-香附酮的含量，現(xiàn)報(bào)道如下。

1儀器與材料

1.1儀器

1260高效液相色譜儀，DAD檢測(cè)器，OpenLAB CDS色譜工作站(美國(guó)Agilent公司)；XS205電子分析天平(瑞士梅特勒-托利多，十萬(wàn)分之一)；CQ-100B超聲波清洗機(jī)(上海躍進(jìn)醫(yī)用光學(xué)器械廠)；ULPZY-250DROMB優(yōu)普系列純水設(shè)備(成都超純科技有限公司)。

1.2試藥

α-香附酮對(duì)照品(批號(hào)：110748-201513，含量：99.7%，中國(guó)食品藥品檢定研究院)；木香分氣丸(市售，甘肅佛仁制藥科技有限公司，批號(hào)分別為：181101、180304；甘肅河西制藥有限責(zé)任公司，批號(hào)為：181001)；甲醇(色譜純，分析純)；磷酸(分析純)；水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Welch UltimateLP-C18(5 μm，250 mm×4.6 mm)；流動(dòng)相∶甲醇-0.05%磷酸溶液 (73∶27)；檢測(cè)波長(zhǎng)：249 nm；進(jìn)樣量：10 μL；流速：1.0 mL·min-1；柱溫：30 ℃。

2.2對(duì)照品溶液的制備

精密稱取對(duì)照品α-香附酮23.29 mg，置100 mL容量瓶中，用甲醇使溶解并稀釋至刻度，即得對(duì)照品貯備溶液；精密吸取對(duì)照品貯備溶液1 mL，置25 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液。

2.3供試品溶液的制備

取本品，粉碎，混合均勻，取約6 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，稱定重量，超聲處理60 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.4 空白試驗(yàn)

按處方比例制得不含醋香附的陰性樣品，并按“2.3”項(xiàng)下方法制備陰性樣品溶液。取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性樣品溶液進(jìn)樣分析，根據(jù)保留時(shí)間和紫外光譜圖定性，α-香附酮與相鄰峰分離度大于1.5，陰性樣品溶液在對(duì)照品溶液α-香附酮峰位置無(wú)色譜峰，其他共存成分無(wú)干擾。色譜見(jiàn)圖1。

注1.α-香附酮

2.5 線性與范圍

精密吸取對(duì)照品溶液1 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為線性第一點(diǎn)溶液；分別精密吸取對(duì)照品貯備溶液0.5、1、2、4、8 mL，分別置25 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，得線性系列濃度溶液；照“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定峰面積。以濃度C(μg·mL-1)為橫坐標(biāo)，相應(yīng)峰面積A為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：A=33.880C+0.619，r=1.000 0。表明α-香附酮在0.93～74.30 μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.6精密度試驗(yàn)

取“2.2”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，連續(xù)6次，記錄峰面積。結(jié)果，RSD為0.7% (n=6)，表明精密度符合要求。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取批號(hào)為181001的木香分氣丸，照“2.3”項(xiàng)下方法平行制備6份供試品溶液，分別進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果木香分氣丸中α-香附酮的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.181 mg·g-1，RSD(n=6)為1.2%，表明重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率

取已知含量的批號(hào)為181101 (0.062 0 mg·g-1)的木香分氣丸粉末約3 g，共6份，精密稱定，分別置具塞錐形瓶中，分別精密加入對(duì)照品貯備液1 mL，按“2.3”項(xiàng)下方法提取，照“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定6份供試品溶液中α-香附酮含量，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果平均加樣回收率為99.1%，RSD1.7 %。見(jiàn)表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.9溶液的穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密量取“2.3”項(xiàng)下批號(hào)為181001的木香分氣丸溶液，室溫放置，分別于0、2、4、6、8、12、24 h進(jìn)樣10 μL，記錄峰面積。結(jié)果木香分氣丸中RSD(n=7)為0.6%，表明樣品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.10 含量測(cè)定

取3批木香分氣丸樣品，每批平行測(cè)定3份，照“2.3”項(xiàng)下方法制備樣品溶液，照“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，采用外標(biāo)法計(jì)算含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2樣品含量測(cè)定結(jié)果

3討論

根據(jù)高效液相色譜儀二極管陣列檢測(cè)器掃描的紫外光譜圖，α-香附酮在249 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，選擇249 nm波長(zhǎng)為測(cè)定波長(zhǎng)。

醋香附是木香分氣丸的主要成分之一，其原有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)沒(méi)有香附質(zhì)量控制內(nèi)容。本實(shí)驗(yàn)采用HPLC法測(cè)定木香分氣丸中α-香附酮的含量，通過(guò)對(duì)3個(gè)批次樣品進(jìn)行檢驗(yàn)，結(jié)果表明該方法專屬性強(qiáng)，重復(fù)性好，準(zhǔn)確度高，簡(jiǎn)單快速，可作為木香分氣丸的含量測(cè)定方法。本研究涉及的3個(gè)批次木香分氣丸中，α-香附酮的含量為0.037 1～0.184 9 mg·g-1，同一廠家不同批次樣品中α-香附酮含量差異大，不同廠家樣品間α-香附酮含量差異也較大，可考慮收集更多的樣本，制定木香分氣丸中α-香附酮的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制方法。