不同粒度表虛感冒顆粒中肉桂酸的鑒別及含量測定

曲艷國，韓曉妮，林麗峰，邵 平，李題寶，王云秀

(本溪國家中成藥工程技術研究中心有限公司，遼寧 本溪 117004)

表虛感冒顆粒為遼寧華潤本溪三藥有限公司的獨家產品。表虛感冒顆粒處方為《傷寒論》桂枝湯加葛根、苦杏仁組成。主治風寒表虛類感冒，具有散風解肌、和營退熱之功效。表虛感冒顆粒標準已收載于《中國藥典》2015年版一部，標準中含有肉桂酸的鑒別方法，方法規定了顆粒的重量、溶劑、提取方式等內容，但在顆粒的處理上只提到了研細，但研細的粒度沒有規定，研細的程度只能憑個人的主觀理解去操作。因藥品檢驗過程的研細(或粉碎)程度對某些藥品的檢驗存在影響[1，2]，為此本研究擬探討不同研細粒度對表虛感冒顆粒肉桂酸鑒別項測定的影響，為完善表虛感冒顆粒肉桂酸的鑒別操作方法提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1260高效液相色譜儀(Agilent安捷倫)；2號篩、3號篩、4號篩、5號篩、6號篩、7號篩、8號篩(南京東邁科技儀有限公司)；QUINTIX224-1CN萬分之一電子天平(塞多利斯)，XP56十萬分之一電子天平(梅特勒-托利多)；Visualizer薄層成像系統(瑞士卡瑪公司)。

1.2 試藥

表虛感冒顆粒(本溪國家中成藥工程技術研究中心有限公司，自制，批號2018110101)；肉桂酸對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號為110786-201604)；乙醚(上海沃凱生物技術有限公司，批號20180621)；無水硫酸鈉(天津市大茂化學試劑廠，批號20150914)；無水乙醇(天津市大茂化學試劑廠，批號20180601)；正己烷(天津市恒興化學試劑制造有限公司，批號20171114)；冰醋酸(天津市大茂化學試劑廠，批號20170606)；GF254薄層板(煙臺市芝罘黃務硅膠開發試驗廠，批號20161007)；純凈水(杭州娃哈哈集團有限公司，批號201801124114sf)。

2 方法與結果

2.1 薄層鑒別方法與結果

2.1.1 鑒別方法 按照《中國藥典》2015年版一部第1 026頁“表虛感冒顆粒標準”中的肉桂酸鑒別方法[3]，取表虛感冒顆粒研磨后的不同粒度粉末15 g，加乙醚50 mL，冷浸12 h，濾過，濾液用無水硫酸鈉1 g脫水，濾過，濾液揮去乙醚，殘渣加無水乙醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。另取肉桂酸對照品，加無水乙醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。按照薄層色譜法(通則0502)試驗，吸取供試品溶液15 μL、對照品溶液10 μL，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以正己烷-乙醚-冰醋酸(5∶5∶0.1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254 nm)下檢視。

2.1.2 對照品溶液的制備 取肉桂酸對照品，加無水乙醇制成每1mL含1mg的溶液，作為對照品溶液。

2.1.3 薄層鑒別用供試品溶液的制備 將7種規格的篩子(2號篩至8號篩)按目數順序疊在一起，取表虛感冒顆粒用研缽研碎，邊研邊過篩，直到每一篩子有相當量的細粉。24目粉指通過2號篩而不能過3號篩的細粉，50目粉指通過3號篩而不能過4號篩的細粉，其他目數的粉按此類推。分別取每個篩子的藥材粉末約15 g，加乙醚50 mL，冷浸12 h，濾過，濾液用無水硫酸鈉1g脫水，濾過，濾液揮去乙醚，殘渣加無水乙醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。

2.1.4 供試品的薄層鑒別 分別取“2.1.2”項對照品溶液、“2.1.3”項供試品溶液，按“2.1.1”項下方法，進行薄層鑒別。肉桂酸鑒別情況，見圖1。

2.2 含量測定方法與結果

2.2.1 色譜條件與系統適用性試驗 按照《中國藥典》2015年版一部“桂枝茯苓丸”項下的肉桂酸含量色譜條件[4]，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.1%磷酸溶液(30∶70)為流動相；檢測波長為285 nm。理論板數按肉桂酸峰計算應不低于2 000。

注：①24目粉末；②50目粉末；③65目粉末；④80目粉末；⑤肉桂酸對照品；⑥100目粉末；⑦120目粉末；⑧150目粉末

圖1 不同研細粒度的肉桂酸薄層圖譜

2.2.2 對照品溶液的制備 稱取肉桂酸對照品20 mg，精密稱定，置200 mL 容量瓶中，加乙醇充分溶解后，定容至刻度，精密量取5 mL，置100 mL 容量瓶中，用乙醇溶解并定量稀釋制成每1 mL 中含5 μg 的溶液，即得。

2.2.3 供試品溶液的制備 將“2.1.3”項下的薄層鑒別用供試品溶液作為含量測定用供試品溶液。

2.2.4 陰性樣品供試品溶液的制備 按處方制備缺桂枝的陰性樣品，陰性樣品研細至100目粉末后，按“2.1.1”項下方法制備供試品溶液，作為含量測定用陰性樣品供試品溶液。

2.2.5 肉桂酸含量測定 分別取“2.2.2”項下對照品溶液、“2.2.3”項下供試品溶液、“2.2.4”項下陰性供試品溶液，按“2.2.1”項下方法，進行肉桂酸含量測定。肉桂酸對照品、不同目數粉末供試品溶液和100目粉末陰性供試品溶液的HPLC，見圖2。肉桂酸含量數據，見表1。

注：A.肉桂酸對照品；B.24目粉末供試品溶液；C.50目粉末供試品溶液；D.65目粉末供試品溶液；E.80目粉末供試品溶液；F.100目粉末供試品溶液；G.120目粉末供試品溶液；K.150目粉末供試品溶液；L.100目粉末陰性供試品溶液

圖2 肉桂酸對照品、不同目數粉末供試品溶液和陰性樣品供試品溶液的HPLC

表1 不同研細粒度的肉桂酸薄層供試品溶液肉桂酸含量

3 討論

實驗數據表明，7種不同研細程度的表虛感冒顆粒粉末的肉桂酸鑒別結果差異較大，其中24目粉末、50目粉末和65目粉末的肉桂酸鑒別的斑點特別淺，極易被判斷為鑒別項不合格，而80目、100目、120目和150目粉末的肉桂酸鑒別，在對照品相應位置上可見到相同顏色的斑點；7種不同研細程度的表虛感冒顆粒粉末的肉桂酸供試品溶液的肉桂酸含量差異較大，其100目粉末的肉桂酸供試品溶液的肉桂酸含量是24目粉末肉桂酸供試品溶液的肉桂酸含量的5倍，不同粉末的供試品溶液的肉桂酸含量差異明顯。在藥典“凡例”中細粉指能全部通過五號篩，并含能通過六號篩不少于95%的粉末。因此，根據本研究結果，建議在表虛感冒顆粒肉桂酸鑒別時，設定表虛感冒顆粒肉桂酸鑒別過程的顆粒研細的粒度至“細粉”以上，確保在不同的實驗室及不同的分析人員等影響因素下，始終能準確地進行表虛感冒顆粒肉桂酸薄層項的檢測。