化學原料藥的分析方法驗證、轉移與確認

吳耿鋒，金泉泉，龔 珊

（上虞京新藥業有限公司，浙江杭州 312369）

中國是化學原料藥的出口大國。對于我國的化學原料藥來說，歐美國家是重要出口對象，在申請化學原料藥出口、對出口注冊文件進行呈報過程中，企業應結合自身實際情況進行化學原料藥的分析方法驗證，同時對有關文件進行證明并提供相應資料；化學原料藥分析方法構建與重現及驗證、轉移、確認是重要構成部分。通過化學原料藥分析方法的驗證、轉移與確認，可以對質量控制分析方法滿足檢驗要求與否進行有效證明，可以對檢驗工作人員的操作能力進行有效證明。

1 化學原料藥分析方法的定義與種類

根據有關指導性文件，化學原料藥分析方法就是指進行分析的方式，需要對所有分析檢測需要的步驟進行詳細描述，如試劑的配制、樣品、儀器的運用等。

化學原料藥分析方法具體如下：

第一類，即為測試化學原料藥主成分含量的分析方法；第二類，即為測試化學原料藥雜質的分析方法；第三類，即為測試化學原料藥化學性能的分析方法；第四類，即為化學原料藥的鑒別實驗。

2 化學原料藥分析方法的驗證

2.1 系統適用性

系統適用性，就是指綜合多種不同的分析方法，系統性評估被分析的樣品組成、實驗操作規程、分析設備、儀器等，以對整個分析系統的可靠性、可適用性進行確定。一般情況下，系統適用性實驗，主要包括分離度、拖尾因子、重復性等參數。

2.2 專屬性

專屬性，就是指當輔料、降解產物、雜質等成分可能存在時，精準、可靠測定被分析物的能力。在完成其他驗證項目以后，方可進行專屬性驗證項目。針對專屬性研究，還涉及分析典型樣品，應選用較為靈敏的分析方法，同時能夠準確定位雜質。假如無法獲取雜質，可以選擇其他替代品取代雜質進行相關研究。在色譜條件下，可以對相應的混合溶液進行合理配制，以對可識別程度進行檢驗。其中，在編制研究報告時，應將不同方法的綜合鑒別、獲得的結論、鑒別等記錄在內。針對在色譜條件下所進行的含量測定、純度檢查，需要將色譜圖相關信息進行詳細說明，包括已知雜質的分離度、雜質的出峰順序、雜質的定位等。

2.3 回收精密度、范圍、線性、準確性

（1）線性

線性，就是指樣品內的被測物與檢測結果在規定范圍中呈正比。在線性測量指定雜質、藥品主要成分含量時，應選用對照品或者標準品。在進行線性測試時，不得低于5個不同的濃度水平，且每個濃度水平均應配制3份。在配制不同濃度水平的溶液時，可以選用儲備溶液再稀釋的配制方法。一般情況下，在進行配制時，會選用一個批號的可靠樣品，為避免出現誤差，需要根據溶液來選用相同批號的樣品，然后對所有測試結果與回收率進行計算。

（2）回收精密度

回收精密度，就是指在評估回收率、線性的過程，可以選用每個濃度水平回收率的相對標準偏差，以進行計算。

（3）準確性

準確性，就是指利用本方法所得到的測定結果，其與實際情況比較近似的程度，大多數情況下主要通過回收率與線性而取得準確性。

（4）范圍

范圍，就是指可以達到一定的線性、準確性、精密度。大多數情況下，通過回收精密度、回收率、線性來獲取范圍。

2.4 精密度

第一，精密度，就是指在指定測試條件下，針對同一個樣品，在對其進行多次取樣后而獲取的不同測定結果之間的接近程度。大多數情況下，精密度的表示方法包括相對標準偏差、標準偏差、一般偏差。

第二，測試精密度，就是指在較短時間間隔與同一操作條件下的精密度。例如，在各種實驗條件不變的條件下與較短時間下，重復分析測定來自于樣品中抽取的若干個供試品。

第三，方法精密度，就是指同一個分析工作者利用相同樣品來對6份樣品溶液進行分別配制與測試。

第四，中間精密度，就是指利用相同樣品，兩位分析工作者對6份樣品溶液進行分別配制，為對平時檢測中可能會產生的區別進行有效模擬，對各種不同的試劑、儀器進行使用，同時在不同時間條件下進行有關測試。假如并不存在我們所關心的樣品成分，在這種情況下，可以在樣品中加入相應不存在的成本，以獲取相應值。

2.5 定量限與檢測限

定量限，就是指可以被常規定量的、具有一定精準度、精密度的樣品的最低濃度。信噪比、各種色譜柱之間與各種儀器之間等各種方法條件均會影響定量限。

檢測限的檢測，能夠稀釋分析物，直至無法檢測本濃度下的分析物。

2.6 耐用性

耐用性，就是指故意稍微改動實驗參數時，不會對檢測結果造成影響的可靠性。假如各種分析條件會影響檢測結果，在這種情況下需要驗證分析條件。一般情況下，在實驗過程中，需要研究敏感度比較高的參數。其中，Ⅰ類耐用性的可接受標準為≤士1%，Ⅱ類耐用性的可接受標準為≤士0.2%，Ⅲ類耐用性的可接受標準為≤士3%。

3 化學原料藥分析方法的確認

針對化學原料藥分析方法的確認，美國藥典并未對其進行詳細說明，僅提出了一些指導性建議。第一，通過進行系統適用性實驗，以對檢驗系統滿足方法要求、實驗室的實際操作水平進行有效證明；第二，對分析方法的復雜程度進行判斷；第三，對檢驗結果具有一定影響的重要方法參數、分析方法的重要操作步驟進行合理確定；第四，將分析方法的復雜程度作為主要依據，選取非常重要的一些分析方法學參數來進行相關觀察。綜上所述，不難發現，對于化學原料藥分析方法的確認來說，系統適用性實驗是重要內容，通過進行系統適用性實驗，能夠對檢驗系統滿足方法要求、實驗室的實際操作水平進行有效證明，不過只是開展系統適用性實驗，并不能完全達到分析方法確認的要求，還需要選用其他一些比較重要的方法學參數，各種檢測方法對應不同的確認內容。

4 化學原料藥分析方法的轉移

化學原料藥分析方法轉移，就是指對符合標準的實驗室選用的操作過程或者分析測試方法進行轉移。通過進行化學原料藥分析方法的轉移，能夠對檢驗結果的質量進行有效保證，確保各種實驗室之間能夠獲取可靠、精準、一致的檢測結果。

迄今為止，針對化學原料藥分析方法的轉移，美國藥典中記錄的有關化學藥品分析方法轉移是當前僅有的指導性文件。由生產企業的研發實驗室轉移至質控實驗室，這是一種常見的分析方法轉移現象。作為質控實驗室，應對本實驗室能夠對研發實驗室制定的分析方法的成功操作進行有效證明。其中，比對性實驗是最為簡單的一種證明方法，即通過利用研發實驗室制定的分析方法，質控實驗室比對研發實驗室測定的結果與相同樣品測定的結果，根據比對結果，達到轉移之前所確定的接收標準，則表明化學原料藥分析方法的轉移獲取成功。此外，針對方法建立實驗室的分析方法，實驗室能夠對其成功使用，需要制定相應有效的文件系統，以對其進行有效證明。

5 結束語

首先對化學原料藥分析方法的定義與種類進行詳細論述，然后分別闡述了化學原料藥分析方法的驗證、轉移與確認，有助于藥品生產企業實驗室質控工作質量的提高，能夠有效指導藥品的注冊工作。作為化學藥品生產企業，應全面驗證化學原料藥分析方法，同時根據GMP 要求，將具體規范化管理工作做好。