鳶尾黃素對(duì)MG63骨肉瘤細(xì)胞凋亡和自噬作用的研究①

王金蓮 陳 路 余孟英 何江濤

(川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院骨外科,南充 637000)

骨肉瘤是最常見的原發(fā)性骨癌之一，在患者中表現(xiàn)為成骨細(xì)胞分化癌和惡性骨樣癌，常見于兒童和青少年[1]。骨肉瘤屬于遺傳不穩(wěn)定且高度惡性的骨間充質(zhì)腫瘤，其特征在于染色體結(jié)構(gòu)改變。目前，治療骨肉瘤通常采用化療和放射療法進(jìn)行治療和預(yù)防腫瘤擴(kuò)散，由于骨肉瘤患者對(duì)化療的抵抗力、預(yù)后不良、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等原因，患者5年生存率約為20%[2]。由于經(jīng)傳統(tǒng)外科手術(shù)、新輔助化療后患者生活質(zhì)量降低、腫瘤易復(fù)發(fā)等情況，骨肉瘤的治療進(jìn)展緩慢[3]，因此，探尋用于骨肉瘤的新型有效療法十分迫切。鳶尾黃素(Tectorigenin，TEC)是從射干[Belamcanda chinensis(L.)Redouté]中提取的一種有效成分,是一種天然的異黃酮。鳶尾黃素具有抗炎、抗增殖、抗氧化活性等多種藥理作用[4]，結(jié)構(gòu)圖如圖1所示。鳶尾黃素已被發(fā)現(xiàn)對(duì)乳腺癌、肺癌、睪丸癌、肝細(xì)胞癌、前列腺癌和白血病具有治療作用。已有研究表明鳶尾黃素可以抑制骨肉瘤細(xì)胞增殖、遷移和侵襲[5]。本文旨在研究鳶尾黃素對(duì)MG63骨肉瘤細(xì)胞凋亡和自噬作用的影響。

圖1 鳶尾黃素化學(xué)結(jié)構(gòu)Fig.1 Chemical structure of Tectorigenin

1 材料與方法

1.1材料 鳶尾黃素(67359)購自美國(guó)Sigma-Aldrich,化學(xué)式：C16H12O6，分子量：300.26。Roswell Park Memorial Institute 1640(RPMI1640)培養(yǎng)基、胎牛血清、胰蛋白酶、青-鏈霉素溶液購自美國(guó)Gibco公司。MTT檢測(cè)試劑盒、Hoechst雙染試劑盒購自南京建成生物工程研究所。抗Beclin-1、p62、LC3Ⅰ/LC3Ⅱ、cleaved caspase-3、Pl3K、AKT、mTOR購自美國(guó)Abcam公司。Bax、Bcl-2、GAPDH購自Santa cruz。BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒、免疫熒光染色試劑盒購自上海碧云天生物技術(shù)研究所。

1.2方法

1.2.1細(xì)胞培養(yǎng) 人成骨肉瘤MG63細(xì)胞……