體內轉染黃芪來源miR-396可抑制哮喘小鼠Th2細胞的GATA-3表達①

沈朝斌 郁 蘭 顧燕妮 王 嵩 陸 磊

(上海中醫藥大學附屬上海市中西醫結合醫院，上海 200082)

本課題組前期研究發現，黃芪飲片煎煮后經高通量二代測序得到完整的miRNA譜系，包括黃芪所屬的保守的豆科類植物miRNA譜系和非保守的黃芪特有的miRNA譜系，而非保守的黃芪miRNA譜系中最重要以及含量最多的為高表達miR-396家族[1]。因此，本研究選用miR-396合成擬似物轉染了解在哮喘模型中對輔助性T細胞的調節作用。黃芪為豆科多年生草本植物的根莖(Astragalus membranaceus.Fisch.)，中醫認為黃芪具有補氣升陽和益衛固表等功效，用于肺氣虛、表虛自汗和氣虛外感等證，是最常用的中藥材之一，常配白術、防風(玉屏風散，黃芪作為君藥)用于兒童支氣管哮喘緩解期和反復呼吸道感染。先前研究表明，玉屏風散對哮喘小鼠模型具有抑制Th2和Th17細胞炎癥因子的作用[2,3]。目前尚無植物miR-396轉染哺乳動物的報道。為進一步明確中藥治療哮喘的免疫調節作用機制，本研究通過經鼻滴注miR-396合成擬似物(mimic)(agomir)，觀察小鼠哮喘模型轉染后miR-396表達及哮喘相關免疫指標，試圖詮釋黃芪中的miR-396基本藥理作用。

1 材料與方法

1.1材料 健康雄性BALB/c小鼠40只，8周齡，體質量(22.38±0.79)g，由上海斯萊克實驗動物有限公司提供。動物飼養于長海醫院動物實驗中心SPF級實驗室(許可證：SYXK[滬]2015-2017)，自由攝取高溫滅菌后的飼料及飲用水，飼養1周后開始實驗。按隨機數字表法將小鼠分為對照組、哮喘模型組、miR-396轉染組、地塞米松治療組，每組10只。小鼠IL-5、IL-13、IL-17A、TGF-β和IFN-γ定量酶聯免疫吸附試驗(ELISA)檢測試劑盒……