犀角地黃湯合銀翹散影響PKC-SSeCKS介導的F-actin變構抑制流感病毒誘導的PMVEC通透性增加①

劉歡葦 張 舒 鄧 迪 毛 欽 郭 銳 吳 珺 郝 鈺

(北京中醫藥大學生命科學學院免疫與微生物學系,北京 102488)

犀角地黃湯合銀翹散(Xijiao Dihuang decoction combined with Yinqiao powder,XDY)源自吳鞠通《溫病條辨·上焦篇》，銀翹散清解衛分之毒，犀角地黃湯解營血毒，兩方相合可達清熱解毒、涼血止血、化瘀通絡之效，先證用藥，截斷病勢。前期動物實驗證明：XDY可明顯降低病毒性肺炎模型小鼠體內炎性因子和肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid，BALF)中白細胞總數，改善肺指數、肺病理改變，降低肺血管通透性，下調肺組織中細胞間黏附分子(Intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-l)和血管細胞黏附分子(Vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-l)的表達[1-3]。但XDY對病毒誘導肺血管通透性增加的影響和機制還未闡明。

PMVEC與肺泡上皮細胞共同構成肺泡-毛細血管屏障，F-actin變化會直接影響其骨架完整性并造成通透性改變[4]，在病毒性肺炎發生過程中，PKC通路被激活，其下游底物SSeCKS由在正常細胞內散在分布轉移至細胞核周和細胞皺褶處并誘導F-actin變構形成絲狀應力纖維[4，5]，導致PMVEC通透性增加，屏障功能下降，細胞和含蛋白的液體滲出增多，形成肺水腫[6]。

因此，本研究將觀察XDY對流感病毒誘導的PMVEC通透性改變和對PKC-SSeCKS介導的F-actin變構的影響，以探討XDY治療病毒性肺炎的機制。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1細胞 根據陳瑞華等[7]的方法進行大鼠PMVEC原代培養和鑒定。

1.1.2病毒 流感病毒甲型鼠肺適應株A/FM/1/34(H1N1)(FM1)，中國預防醫學科學院病毒學研究所提供，-70℃保存。雞胚尿囊腔中傳代兩次后，收集尿囊液。用微量血凝試驗(HA)檢測病毒血凝效價為1∶512，病毒感染MDCK細胞24、48、72 h后，采用Reed-Muench法計算TCID50。流感病毒FM1的TCID50為10～4.6/0.1 L。

1.1.3藥物 犀角……