小檗堿對非酒精性脂肪性肝病患者血清骨鈣素的影響

楊心瑜，常薪霞，卞 華，夏明鋒，蔡青青，顏紅梅*

1.復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院內(nèi)分泌科，上海 200032 2.復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院藥劑科，上海 200032

非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是慢性肝病的常見原因，是指除過量飲酒、病毒感染及其他特定損肝因素外所致的肝臟脂肪堆積超過5%～10%的疾病[1]。隨著膳食和生活方式的改變，NAFLD患病率在全球范圍內(nèi)不斷增加。其中，15%～30%的中國人群患有NAFLD[2]。此外，NAFLD與代謝綜合征、2型糖尿病、血脂異常、心血管疾病患者死亡率的升高及其他肝外并發(fā)癥(包括骨質(zhì)疏松癥)的發(fā)生密切相關(guān)[3-4]。

骨鈣素是一種成骨細(xì)胞來源的多肽激素，是骨細(xì)胞外基質(zhì)的組成成分。羧化的骨鈣素(cOC)與羥基磷灰石具有較強(qiáng)吸附力，沉積在骨基質(zhì)中，未羧化骨鈣素(ucOC)通過骨吸收進(jìn)入血液循環(huán)。近年來，基于動物及細(xì)胞水平的研究[5]指出，ucOC可作為調(diào)節(jié)能量代謝的重要介質(zhì)。然而，既往研究[6]發(fā)現(xiàn)，ucOC也可作為骨形成/骨轉(zhuǎn)化的標(biāo)志物，在一定程度上反映骨代謝的情況。

小檗堿(BBR)是一種異喹啉生物堿，具有多種藥理作用。BBR可顯著改善糖代謝紊亂NAFLD患者的肝脂肪變性和相關(guān)糖脂質(zhì)代謝紊亂[7]。另有研究[8]表明，小檗堿可能具有治療糖尿病性骨質(zhì)疏松癥的潛力。BBR可有效改善各細(xì)胞系中的骨鈣素水平[9-10]，并改善骨質(zhì)疏松大鼠模型中的癥狀[11]。然而，其對人體骨鈣素的作用尚不清楚。因此，本研究探討了BBR對糖代謝紊亂的NAFLD患者ucOC水平的影響，并探討其相關(guān)影響因素。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本研究為一項前瞻性隊列研究(臨床試驗注冊號：NCT00633282)。受試者來自之前的平行對照開放臨床試驗[7]，納入2008年3月至2011年8月主動來院就診的伴有糖耐量受損或1年內(nèi)新診斷2型糖尿病的114例NAFLD患者，年齡18～65歲。排除飲酒量女性≥10 g/d、男性大于或等于20 g/d，乙肝/丙肝病毒陽性或有其他肝臟疾病的患者。將其隨機(jī)分配到對照組與BBR組，各57例，進(jìn)行為期16周的干預(yù)。對照組為單純生活方式干預(yù)(LSI)，即限熱卡飲食(減少500 kcal/d，1 kcal=4.184 kJ)配合運(yùn)動(每日慢跑或快走30 min)；BBR組為LSI加每日餐前30 min口服BBR(0.5 g/次，每日3 次)治療。本研究通過復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院倫理委員會審核批準(zhǔn)(2010-172)，并取得患者知情同意。

1.2 血糖、血脂及肝臟脂肪含量(HFC)測定 禁食至少10 h后獲得患者血液樣品。采用口服葡萄糖耐量試驗(OGTT)測量定血糖水平，采用放射免疫測定法測定胰島素水平。使用現(xiàn)代7600自動生物分析儀(日立)測量總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-c)。使用Friedewald方程計算低密度脂蛋白膽固醇(LDL-c)水平。通過電化學(xué)發(fā)光免疫測定法(羅氏)測量血清ucOC N-MID片段。采用1.5T磁共振掃描儀(西門子)通過1H-MRS成像技術(shù)測量HFC。評價干預(yù)前后的血清ucOC、血糖、血脂、及HFC等指標(biāo)，分析影響ucOC變化的因素。

2 結(jié) 果

2.1 兩組試驗對象的基本特征比較 結(jié)果(表1)表明：兩組體質(zhì)量、血清ucOC基線水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義。入組時，兩組患者平均年齡約50歲，平均體質(zhì)指數(shù)(BMI)>27 kg/m2，平均腰圍>93 cm。BBR組糖化血紅蛋白(HbA1c)、TC和LDL-c略高于對照組(P<0.05)。

2.2 兩組治療后血清ucOC水平比較 ucOC N-MID片段測定內(nèi)和測定間變異系數(shù)分別為1.2%～4.0%和1.7%～6.5%。對照組50例患者和BBR組48例患者完成隨訪，生活方式與藥物干預(yù)依從性超過86%。結(jié)果(表2)表明：干預(yù)后，BBR組血清ucOC水平改善較對照組更明顯(P<0.001)。校正相關(guān)變量(年齡、性別、BMI)后，BBR組血清ucOC改善情況仍明顯優(yōu)于對照組(P<0.001)，平均差異為3.64(95%CI 1.74～ 5.55)。結(jié)果(圖1)顯示：對于年齡≥50歲、男性、BMI<28 kg/m2、TC<5.11 mmol/L、TG≥2.06 mmol/L的患者，BBR升高ucOC的作用更加明顯。

表1 兩組試驗對象的基線特征比較

BMI:體質(zhì)指數(shù);HFC:肝臟脂肪含量;ucOC:未羧化骨鈣素;HbA1c:糖化血紅蛋白;TC:總膽固醇;TG:三酰甘油;HDL-c:高密度脂蛋白膽固醇;LDL-c:低密度脂蛋白膽固醇

表2 血清ucOC水平的治療前后差值

圖1 未羧化骨鈣素水平的影響因素分析截斷值選取兩組均數(shù)的中間值

2.3 血清ucOC與其他代謝指標(biāo)的相關(guān)性分析 Spearman相關(guān)分析(表3)顯示：ucOC與BMI、體質(zhì)量、腰圍、HFC、HbA1c、TG和TC負(fù)相關(guān)(P<0.05)。偏相關(guān)分析(表3)顯示：校正年齡、性別后，干預(yù)前后血清ucOC水平的差值與BMI、體質(zhì)量、腰圍、HFC、HbA1c和TC的差值負(fù)相關(guān)(P<0.05)。

表3 BBR組治療前后血清ucOC差值與其他指標(biāo)差值的Spearman相關(guān)分析

a校正年齡和性別.BMI:體質(zhì)指數(shù);HFC:肝臟脂肪含量;ucOC:未羧化骨鈣素;HbA1c:糖化血紅蛋白;TC:總膽固醇;TG:三酰甘油;HDL-c:高密度脂蛋白膽固醇;LDL-c:低密度脂蛋白膽固醇

3 討 論

NAFLD是一個系統(tǒng)性疾病，可引起包括糖尿病、心血管疾病及骨質(zhì)疏松等一系列肝外并發(fā)癥。既往研究[12]表明，BBR在降低肝臟脂肪含量的同時，可以改善血糖、血脂、血壓、體質(zhì)量等。一些動物研究[7,13-14]也顯示，BBR可有效改善NAFLD，但其作用機(jī)制及其對人體骨代謝的益處尚不清楚。

近年來，骨鈣素被發(fā)現(xiàn)是一種強(qiáng)標(biāo)志物，與代謝指標(biāo)負(fù)相關(guān)。流行病學(xué)研究[15]表明，血清ucOC水平升高與糖耐量受損、胰島素抵抗、肥胖和代謝綜合征的發(fā)生有關(guān)。在中國，NAFLD患者ucOC的水平較健康人更低。韓國一項研究[16]也表明，校正BMI和HOMA-IR后，男性NAFLD患者的右髖骨礦物質(zhì)密度與血清ucOC水平低于無NAFLD人群，而BBR可增加各細(xì)胞系中骨鈣素的水平[9-10]，提示骨鈣素可能參與BBR改善脂肪肝的作用。

本研究發(fā)現(xiàn)，BBR能使糖代謝紊亂的NAFLD患者的血清ucOC水平升高。且其升高與BMI、體質(zhì)量、腰圍、HFC、HbA1c和TC的降低相關(guān)，表明BBR改善代謝的作用與其升高ucOC水平有關(guān)。本研究首次從臨床角度對此加以證明。

本研究亞組分析顯示，BBR升高血清ucOC的作用在非肥胖的老年男性NAFLD患者中更明顯。此外，由于ucOC是反映成骨細(xì)胞活性及骨形成/骨轉(zhuǎn)化的生物標(biāo)志物，提示BBR除了改善糖脂代謝以外，還可能改善骨代謝。改善ucOC水平的療法可能對NAFLD治療具有獨特優(yōu)勢，值得開展相關(guān)臨床試驗進(jìn)一步探討B(tài)BR對NAFLD患者骨質(zhì)疏松的作用。因此，BBR可能是一個具有多治療靶點的藥物。尤其適用于治療由代謝性疾病(如NAFLD和糖尿病)引起的骨代謝異常。

本研究的局限性：(1)不是安慰劑隨機(jī)對照試驗；(2)未涉及BBR改善血清ucOC的機(jī)制；(3)cOC在電化學(xué)發(fā)光體系中不穩(wěn)定而未測定，僅ucOC不能準(zhǔn)確反映骨形成，因此本研究僅分析了骨代謝，未分析骨形成。下一步研究將著眼于探討B(tài)BR改善血清ucOC水平的潛在機(jī)制，并對其影響骨代謝的作用進(jìn)行研究。

綜上所述，本研究表明，BBR可改善伴有糖代謝紊亂的非酒精性脂肪性肝病患者的ucOC及代謝指標(biāo)的水平，且BBR改善代謝異常的作用與其升高血清ucOC水平有關(guān)。本研究有助于臨床對BBR改善ucOC的作用進(jìn)行更深入的了解，同時提示BBR可能成為治療NAFLD和骨質(zhì)疏松癥的潛在藥物。