口腔扁平苔蘚基因遺傳學的研究進展*

孫銀銀 王孟博 盧恕來

口腔扁平苔蘚(Oral lichen planus，OLP)是一種常見的口腔黏膜慢性炎性疾病，分為糜爛型和非糜爛型，好發于中年女性，患病率0.1%～4%。OLP 黏膜病損還有一定的惡變潛能，惡變率為0.4%～2%為癌前狀態，給病人造成很大的心理壓力，嚴重影響病人的身心健康[1]。其病因尚不明確，目前認為其與免疫因素、心理因素、遺傳因素、系統性疾病等有關。

有許多臨床報告描述了家族性OLP 和遺傳易感性。Kofoed 等[2]在對140 名OLP 患者的隨訪研究中發現15 名有臨床或/和組織學證實的家族史。Mahood 等[3]發現在4 個家庭中有9 例OLP 病例。Sodaify 等[4]報導了伊朗一個猶太家族中1 個母親及其1 個女兒和4 個兒子患有扁平苔蘚。Copeman等[5]報導了10 例家族性扁平苔蘚。這證明了OLP具有一定的遺傳性。近年來，對于遺傳因素在OLP發生發展中的研究有了很大進展，本文從基因、基因多態性、核糖核酸三方面對OLP 基因遺傳學的研究作一綜述。

1.基因

基因是帶有遺傳信息的DNA 片段。基因的檢測在一定程度上對OLP 的發生及惡化有早期診斷和預測的價值。

1.1 抑癌基因 抑癌基因，也稱腫瘤抑制基因，能夠抑制細胞癌基因活性，在控制細胞生長、增殖及分化過程中起著十分重要的負調節作用。

1.1.1 hMSH2 基因 人類DNA 錯配修復系統(MMR)的存在能避免遺傳物質產生突變，保證DNA 復制的高保真度[6]，糾正由于DNA 復制錯誤和同源重組而產生的堿基錯配和短插入/短刪除[7]。hMSH2 是人類DNA 錯配修復系統基因之一，其在減少突變和維持基因組穩定性方面發揮著重要作用[8]。hMSH2 是第一個被分離MMR 基因，首先在人類遺傳性非息肉性結直腸癌中被分離出來[9]。由hMSH2 失活所產生的遺傳不穩定性以腫瘤DNA 重復序列中的體細胞突變為特征[7]。Pimenta等[8]通過對26 例OLP 患者的hMSH2 蛋白進行免疫組化發現hMSH2 陽性細胞在網狀OLP 中比例明顯降低，hMSH2 蛋白表達在網狀OLP 中為46.54%，在萎縮/侵蝕OLP 中為48.79%，而在正常人中為61.29%，明顯高于OLP 患者的表達。李浩渤等[9]發現hMSH2 蛋白在OLP 組中表達率為52.9%，在健康對照組中陽性表達率為80%，二者的陽性表達率之間差異有統計學意義。

1.1.2 P53 基因 P53 是生物體內一種抑制細胞轉變癌細胞的抑癌基因，其野生型使癌細胞凋亡，從而防癌變，還可以幫助細胞基因修復缺陷，其失活對腫瘤形成起重要作用。

有學者通過免疫組化方法發現P53 表達在糜爛型OLP 組顯著高于非糜爛型OLP 組與對照組[10]，并且在一例發生在OLP 上的原位癌中發現P53 均在OLP 和鱗狀細胞癌中有表達[11]。在通過對泰國人群中OLP P53 的codon72 的多態性分析，P53codon72編碼精氨酸和脯氨酸，在攜帶pro 等位基因的病變中存在凋亡，腫瘤的pro/pro 狀態與Fas/Fasl 的高表達顯著相關。推測P53codon72 pro 可能通過Fas/Fasl 通路在OLP 中誘導凋亡[12]。Danielsson等[13]通過采用qRT/PCR 對上皮細胞進行激光切割的方法發現在OLP 患者中miR-21 和miR-203表達增加，miR-125 表達減少，P53 和P63 RNA在OLP 中下調，而且P63 和miR-203 顯著負相關，P53 和miR-21 顯著負相關。

1.1.3 P53 基因與家族蛋白 Bcl-2 家族分為抗細胞凋亡的Bcl-2 亞族與促細胞凋亡的Bax 亞族。Shailaga 等[14]通過免疫組化法、橫斷面描述性分析發現OLP 患者與健康人相比p53 蛋白顯著高表達。Bcl-2 原癌基因阻斷了細胞凋亡進化保守通路的遠端步驟，在OLP 中表達為陰性，但與Shima 等[15]和Leyva 等[16]以及Arreaza 等[17]的研究結果不一致，他們在研究中指出Bcl-2 表達為陽性，Bcl-2 抗凋亡，其抗凋亡功能是調節細胞色素c 的線粒體釋放，P53 通過誘導參與線粒體和死亡受體誘導凋亡通路的蛋白表達的方式誘導Bcl-2家族的幾種線粒體蛋白的表達，誘導細胞色素c 的線粒體釋放。

除了眾所周知的促凋亡和抗凋亡的Bcl-2 家族蛋白外，survivin 蛋白也是一種抑制凋亡的蛋白，通過抑制caspase-3 和caspase-7 來抑制細胞凋亡，并通過與有絲分裂紡錘體微管結合來調節細胞周期的G2/M 期，很少在正常成人組織中出現。Basheer 等[19]通過免疫組化法發現survivin 在OLP中的表達率為10%，P53 與survivin 表達呈正相關，survivin 是P53 通路的下游基因，在survivin 表達的所有病例中，P53 也都表達。Hadzimihailovic等[20]通過阿維菌素-生物素過氧化酶復合物法進行免疫組化的方法發現OLP 中P53 陽性且標記良好的角質形成細胞比例低，并且P53 陽性細胞百分比低，強度弱，多見于高表達civatte 的OLP 標本。

1.2 自噬相關基因 自噬是一種調控的溶酶體降解途徑，對維持細胞內穩態和正常發育至關重要，其參與各種先天和適應性免疫過程，包括病原體識別和破壞，MHC 抗原處理，淋巴細胞發育和功能，炎癥調節。Ya 等[21]通過自噬陣列技術分析了受試者外周血T 細胞，檢測到84 個自噬相關基因表達，發現在OLP 患者和對照組中有五個差異表達基因，包括IGF1、ATG9B、HGS、ESR1 和SNCA，在糜爛型和非糜爛型OLP 患者中ATG9B表達差異。總的來說，ATG9BmRNA 表達減少，IGF1、HGS、ESR1、SNCA 表達水平無顯著差異。男性和女性OLP 患者T 細胞中ATG9B、IGF1、HGS、ESR1、SNCA 表達差異。IGF1mRNA 表達女性OLP 患者高于男性，在男性OLP 患者與男性對照組或男性與女性對照組表達無顯著差異。IGF1mRNA 在30-50 歲的OLP 中表達升高。于是推測IGF1 在T 細胞中的表達可能以一種性別依賴和年齡相關的方式促進OLP。Wang 等[22]研究發現在OLP 患者中miR-155 的表達顯著降低，而miR-19a 的表達顯著增加。miR-155 和miR-19a分別直接靶向eNOS 和TLR2 基因，eNOS 在OLP中表達顯著下調，而TLR2 在OLP 中表達高度上調。此外，通過協調誘導TH1 和TH2 之間的失衡，miR-155/eNOS 和miR-19a/TLR 同時解除調節。

1.3 線粒體DNA 線粒體DNA(mtDNA)的母體遺傳在人類族群分類和疾病易感性中具有重要意義，Wu 等[23]通過對242 例OLP 患者和237 例健康對照組的mtDNA 的三個高變區進行測序，發現對照組中單倍體B4 頻率明顯高于OLP 組，在女性樣本中，B4 的差異更大。

2.細胞因子的基因多態性

OLP 的典型病理表現之一是上皮固有層內有大量淋巴細胞呈密集帶狀浸潤，細胞因子的基因多態性影響了細胞因子的整個轉錄、翻譯和分泌過程，導致不同人群中細胞因子水平的多樣性。

2.1 白細胞介素 白細胞介素作為一類細胞因子，包括IL-1～IL-38，其分子結構及生物學性能比較明確，具有多種生物學效應，可參與機體免疫反應、誘導炎癥及促進腫瘤發展(IL-1、IL-4、IL-6、IL-10、IL-18 等)。多位學者對其與OLP發病的相關性進行了研究。

IL-1 家族包括IL-1α、IL-1β 和IL-1 受體拮抗劑，具有促炎作用，能作用于幾乎所有類型的細胞，具有廣泛的生物學活性[24]。但Xavier 等[25]的研究結果清楚的表明了IL-1 的基因多態性與OLP 的發生無關。

Bai 等[26]發現非糜爛型OLP 與IL-4-590 位點基因多態性有很大的關系，T 等位基因可能是其保護因子。Carrozzo 等[27/28]發現OLP 患者的L-4-33C/C 基因型頻率是對照組的4 倍。Humberto等[29]指出在OLP 患者的唾液中，IL-4 濃度高于健康對照組。

Mozaffari 等[30]在OLP 患者血清和唾液中IL-6水平與健康對照組比較的綜合分析中指出IL-6 能使p53 腫瘤抑制基因失活。在多項研究中發現OLP患者的IL-6 水平高于健康對照組，無論是血清還是唾液水平，但唾液約為血清的三倍，唾液中濃度隨血清濃度升高而升高，且大型糜爛患者平均血清IL-6 水平高于小型糜爛患者，在OLP 晚期時，IL-6 水平在唾液和血清中比早期高，可推測IL-6水平隨類型和嚴重程度而改變[18,31,32]。Xavier 等[25]在患有OLP 的巴西人中發現IL-6 純合子基因型更常見，其研究成果清楚的表明了IL-6 基因多態性的遺傳與OLP 發生的關系。Humberto 等[29]指出OLP 患者的唾液中IL-6 的濃度高于健康對照組。

Bai 等[33]指出IL-10-1082、-819、-592 位點的TAT 單倍型在OLP 病例組出現的頻率顯著增高，提示IL-10 在OLP 發病中的負調節作用有一定的遺傳背景。與Ali 等[34]對患OLP 的沙特人的IL-10 基因多態性的研究一致。但Shi 等[35]在對白細胞介素基因中的單核苷酸多態性與OLP 的關系的meta 分析發現對于IL-10(-1082G/A，-819C/T)，在任何遺傳模型中都沒有證據支持基因多態性與OLP 易感性之間的關系。IL-10-592C/A 在所有的比較模型中都發現了它們之間的顯著關系。其多態性中的A 等位基因和AA 基因型可能增加OLP的發病風險，且Xavier 等[25]對患有OLP 的巴西人發現IL-10 基因多態性與OLP 的發生無關。

Shi 等[35]通過meta 分析發現對于IL-16-174G/C，無證據支持基因多態性與OLP 易感性之間的關系。

Bai 等[36]采用聚合酶鏈反應-序列特異性引物法發現患者組與對照組的IL-18-607 基因型分布有顯著差異，指出IL-18-137G/C 位點基因多態性與eOLP 有一定的相關性。G 等位基因可能是OLP 炎癥反應加重的危險因子；-137G/-607C單倍型在OLP 組中出現的頻率顯著增高，提示-137/-607 兩個多態性位點作為一個連鎖性遺傳單位與OLP 的發生發展有更強的相關關系。多態性-137G/C 與eOLP 有統計學意義，并且采用ELISA 監測其多態性可能對OLP 中IL-18 蛋白的產生有積極影響。

2.2 腫瘤壞死因子 腫瘤壞死因子是能使多種腫瘤發生血性壞死的物質，主要由活化道德巨噬細胞、NK 細胞及淋巴細胞產生。Carrozzo 等[27,28]通過對TNF-α-308G/A 基因頻率的統計分析，推測丙型肝炎病毒感染的患者細胞因子遺傳背景可能不同。Zhou 等[37]發現TNF-α-308A 等位基因在OLP 發病中有一定的遺傳誘導作用。Ali 等[35]通過對患有OLP 的沙特人的TNF-α 基因多態性的研究中發現TNF-α-308G/A 多態性與OLP 易感性相關聯，從而支持了OLP 的遺傳基礎。Xavier 等[25]在患有OLP 的巴西人中發現TNF-α 基因多態性的遺傳與OLP 發生的關系。Humberto 等[29]指出在OLP 患者的唾液中，TNF-α 濃度高于健康對照組，其為強有力的免疫調制劑和促炎細胞因子。Yuqiao 等[38]通過在TNFα-308G/A 多態性與OLP的綜合分析中評估了450 名OLP 患者和897 名健康人，指出TNF-α 基因的遺傳變異在-308 位置，該基因變異增加TNF-α 轉錄并產生更高水平的細胞因子，與GG 純合子基因型個體相比，雜合子AG 和AA 純合子具有更高的OLP 風險，且基于種族的亞群分析，等位基因與攜帶者(AA+AG)在混血兒人群中具有明顯的更高的OLP 發病率。柏景坪等[39]的研究結果與其一致。Ali 等[34]也發現TNF-β+252/G 多態性與OLP 易感性相關聯。

2.3 干擾素-γ 干擾素具有調節免疫及抗腫瘤作用。Bai 等[26]發現干擾素-γ 基因的啟動子基因內含子-1 的遺傳多態性可能在OLP 的發病中有一定的遺傳背景。Humberto 等[29]也發現干擾素-γ的濃度在OLP 患者的唾液中比在健康對照組中高。

3.RNA

OLP 的產生過程中必有其基因的調控異常。RNA 是以DNA 的一條鏈為模板轉錄而來，因實現遺傳信息在蛋白質上的表達而備受關注。

Chen 等[40]通過下一代DESeq 和edgeR 軟件算法測序對OLPmRNA 和miRNA 表達譜進行初步的整合分析，通過分析miRNA-messenger RNA網絡,獲得了潛在的調控miRNA 和基因，其中，miRNA-Hsa-miR-135a-5p、Hsa-miR-128-3p、Hsa-miR-218-5p、Hsp-miR-125-5p 和Hsalet-7e-5p 下調，是OLP 患者中最有前途的生物標志物，其在“炎癥”事件和免疫相關術語中顯著富集。外泌體miRNA 是炎癥和免疫反應的有效刺激劑。其影響受體細胞的增殖、凋亡、分化和遷移，因此，在許多自身免疫性疾病的調控，發病機制，診斷和治療中起著關鍵作用。Peng 等[41]通過生物學分析外泌體miRNA，在OLP 中，循環外泌體miR-34a-5p 和miR-130 上調，miR-301b-3p 下調，其中miR-34a-5p 的靶基因主要參與調控基因表達、細胞通訊、信號傳導和代謝過程，并通過p131c/Akt 信號通路調控OLP 進程，而且外泌體miR-34a-5p 與OLP 的嚴重程度呈正相關，然而miR-130b-3p，miR-301b-3p 與OLP 的嚴重程度無顯著相關。Zhang 等[42]通過實時定量PCR 技術和原位雜交技術發現在OLP 中miR-27 表達顯著下調，且在萎縮型糜爛型OLP 中表達比在網狀OLP 中受抑制。張文怡等[43]的研究結果與其一致，并且通過生物信息學分析預測了miR-27b OLP相關靶基因，分別為CD28、NF-AT5、IL-10、CSF1、MMP13、MAPK14、MAP2K4、MAP3K4、MAP4K4、TGFBR1。

目前為止，對于OLP 遺傳相關性的研究仍需進一步研究，尤其是OLP 相關聯區域的精確定位，隨著分子生物學技術的發展，可以通過擴大樣本量及檢測指標等方法找出關鍵基因，為疾病的預防、早期診斷、早期治療以及遺傳咨詢提供重要依據，同時促進靶向藥物的研發，從而更有效的解除患者的病痛。