分光光度法測(cè)定黃果柑中維生素C的含量

(雅安職業(yè)技術(shù)學(xué)院，四川雅安，625000)

黃果柑，柑橘品種，俗稱青果、黃金果，四川省雅安市石棉縣特產(chǎn)，在當(dāng)?shù)赜?00多年種植歷史，是我國具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的天然雜交柑橘。黃果柑果面橙黃，有光澤，油胞大而凸起，果皮薄，易剝離，基本無核，果肉橙紅色，肉質(zhì)脆嫩化渣，多汁，酸甜爽口，微具香氣，營(yíng)養(yǎng)豐富，深受大眾喜愛。其最大特點(diǎn)：花果同樹的奇觀、極其豐產(chǎn)效益高、極其晚熟(翌年3～4月成熟)。近年石棉縣黃果柑種植面積達(dá)4.5萬畝，年產(chǎn)量達(dá)6萬噸，成為我國最大規(guī)模的黃果柑生產(chǎn)基地。

維生素C (Vitamin C) 又稱抗壞血酸(C6H8O6)，是一種水溶性維生素，在弱酸性環(huán)境中較穩(wěn)定，是人體必需的維生素之一。人體內(nèi)不能自身合成維生素C，維生素C主要存在于新鮮的蔬菜水果中，缺乏維生素C可導(dǎo)致多種疾病[1,2]。維生素C能防治壞血病，預(yù)防缺鐵性貧血，促進(jìn)膠原蛋白的合成，利用維生素C較強(qiáng)的抗氧化作用，抑制自由基對(duì)人體氧化的損害，協(xié)同相關(guān)藥物從而預(yù)防腫瘤和癌癥的侵襲等[3-7]。

本試驗(yàn)采用固藍(lán)鹽B分光光度法檢測(cè)了石棉縣特產(chǎn)黃果柑中維生素C的含量[8,9]，將為人們選擇黃果柑補(bǔ)充維生素C和評(píng)估攝入維生素C量提供科學(xué)的依據(jù)，對(duì)指導(dǎo)人們的日常飲食和水果選擇有一定的參考價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料、主要試劑及儀器

1.1.1 試驗(yàn)材料

石棉黃果柑鮮果，樣品采購于雅安市姚橋農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)。

1.1.2 主要試劑

冰乙酸、乙二胺四乙酸二鈉(EDTA)和抗壞血酸(以上三種試劑均采購于成都市科龍化工試劑廠)；固藍(lán)鹽B(采購于上海瑞永生物科技有限公司)，所有試劑均為分析純。

1.1.3 主要儀器

ME204型電子分析天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司)；UV-1800型紫外可見分光光度計(jì)(上海翱藝儀器有限公司)。

1.2 實(shí)驗(yàn)原理

在弱酸性乙酸溶液中，維生素C與固藍(lán)鹽B反應(yīng)生成黃色的草酰肼-2-羥基丁酰內(nèi)酯衍生物。在420nm最大吸收波長(zhǎng)處測(cè)定溶液的吸光度，與標(biāo)準(zhǔn)系列比較定量[7]。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 維生素C標(biāo)準(zhǔn)使用液的配制

精密稱取0.2000g抗壞血酸，加20mL 2mol·L-1乙酸溶液，溶解后移入100mL棕色容量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻，即得維生素C標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液2.0g·L-1。精密吸取5.0mL維生素C標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于100 mL棕色容量瓶中，加5.0mL 2mol·L-1乙酸溶液，用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻，即得0.10g·L-1維生素C標(biāo)準(zhǔn)使用液。

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

用移液管分別精密移取0.10g·L-1的維生素C標(biāo)準(zhǔn)使用溶液0.00、0.10、0.20、0.40、0.60、0.80、1.0、1.5、2.0mL于9支10mL的比色管中，依次加入0.3mL EDTA溶液，搖勻。加入0.5mL 0.5 mol·L-1乙酸溶液，1.25mL 2g·L-1固藍(lán)鹽B溶液，搖勻。加蒸餾水至10mL，混勻。靜置20min后，用1cm比色皿，以標(biāo)準(zhǔn)0管調(diào)節(jié)零點(diǎn)，在420nm的波長(zhǎng)下測(cè)定各標(biāo)準(zhǔn)管的吸光度。通過測(cè)出的吸光度對(duì)維生素C的濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，濃度C為橫坐標(biāo)，吸光度值A(chǔ)為縱坐標(biāo)。

1.3.3 待測(cè)樣品液配制

隨機(jī)挑選5個(gè)新鮮黃果柑，洗凈、擦干、去皮、去囊衣后，準(zhǔn)確稱取5份可食用部分20 g，分別放入已加入20mL 2 mol·L-1乙酸溶液的5個(gè)研缽中，將果肉中的果汁全部研出，再分別將勻漿全部轉(zhuǎn)移入已加入5mL 2 mol·L-1乙酸溶液的5個(gè)100 mL棕色容量瓶中，蒸餾水定容，搖勻備用。

1.3.4 待測(cè)樣品中維生素C含量測(cè)定

用移液管精密移取5份待測(cè)樣液1.0mL及1份同量的空白溶液，分別置于6支10mL的比色管中，其余同方法1.3.2標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制步驟。分別在420nm波長(zhǎng)下依次測(cè)定5份樣品溶液的吸光度，每份待測(cè)樣液分別做3次平行測(cè)定，測(cè)定平均值為吸光度值。通過標(biāo)準(zhǔn)曲線構(gòu)建的線性回歸方程，計(jì)算出待測(cè)樣液中維生素C的含量(μg)，再通過下式計(jì)算出待測(cè)黃果柑樣品中維生素C的質(zhì)量分?jǐn)?shù)ω(mg·100g-1)。

式中：m1為由標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程算得的待測(cè)樣液中維生素C含量；V1為待測(cè)樣品處理液定容后的總體積；V2為測(cè)定時(shí)取用樣品處理液體積；m為測(cè)定時(shí)稱取待測(cè)黃果柑果肉樣品的質(zhì)量。

1.3.5 加標(biāo)回收率測(cè)定

用移液管分別精密移取1.0mL的樣品溶液于5支10mL比色管中，分別加入抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)溶液0.20、0.30、0.40、0.50、0.60mL，其余同方法1.3.2標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制步驟操作，在420nm波長(zhǎng)處分別測(cè)定溶液的吸光度并記錄。計(jì)算加標(biāo)回收率P，計(jì)算公式：

式中：P為加標(biāo)回收率，%；x1為加標(biāo)樣品測(cè)定值，μg；x0為待測(cè)樣品測(cè)定值，μg；m為加入標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的量，μg。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

將維生素C標(biāo)準(zhǔn)系列溶液與所測(cè)定的吸光值A(chǔ)進(jìn)行線性回歸，結(jié)果如圖1所示，標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：y=0.0557x-0.0083，相關(guān)系數(shù)R2=0.9996。結(jié)果表明，在濃度范圍為0.0～20.0μg·mL-1的維生素C溶液中，其濃度與吸光度具有很好的線性關(guān)系，保證了后續(xù)測(cè)定維生素C含量的準(zhǔn)確性。

圖1 維生素C標(biāo)準(zhǔn)工作曲線

2.2 黃果柑維生素C含量計(jì)算

待測(cè)黃果柑樣液維生素C的吸光度和濃度如表1所示，結(jié)果以均值和標(biāo)準(zhǔn)差表示 (n=5)。

2.3 加標(biāo)回收率試驗(yàn)

依據(jù)1.3.5中的試驗(yàn)方法，進(jìn)行加標(biāo)回收率試驗(yàn)，測(cè)定結(jié)果見表2。由表2可知，黃果柑樣品中的維生素C回收率在98.0%～103.7%之間，平均回收率為100.2%。

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)采用固藍(lán)鹽B分光光度法檢測(cè)了黃果柑的維生素C含量，其測(cè)定結(jié)果為27.6mg·100g-1，平均回收率為100.2%，RSD(n=5)為1.87%。雖然測(cè)定過程中果汁溶液有顏色，但通過對(duì)照實(shí)驗(yàn)測(cè)定溶液吸光度發(fā)現(xiàn)溶液的顏色并不影響待測(cè)樣液吸光度，所以無需進(jìn)行脫色處理。該測(cè)定方法操作簡(jiǎn)單，可靠易行，回收率高，可用于黃果柑維生素C的含量測(cè)定。

表1 黃果柑維生素C含量

表2 加標(biāo)回收率試驗(yàn)結(jié)果