血清外泌體miR-92a在彌漫大B細胞淋巴瘤康艾注射液聯合化療治療監測中的臨床意義

王妃菲 張宇 吳筱蓮

[摘要] 目的 探討血清外泌體miR-92a在彌漫大B細胞淋巴瘤康艾注射液聯合化療治療監測中的臨床意義。 方法 選取42例彌漫大B細胞淋巴瘤患者為觀察對象，按照治療方法不同平均分為對照組和研究組。對照組患者采用CHOP方案化療，研究組患者在對照組基礎上聯合康艾注射液治療。采用realtime PCR法檢測所有患者在治療前后血清中外泌體miR-92a的表達水平;收集不同時間點血清評估miR-92a與治療效果的關系。 結果 與對照組相比，研究組患者總有效率明顯升高，組間比較差異具有統計學意義（P<0.05）;研究組患者降低血清外泌體miR-92a的程度更為明顯，組間比較差異具有顯著性（P<0.05）。與化療前相比，對照組和研究組均能明顯降低患者血清外泌體miR-92a的表達水平，差異具有統計學意義（P<0.05）。彌漫大B細胞淋巴瘤患者miR-92a與c-MYC呈負相關關系（r=-0.451，P<0.001）。血清外泌體miR-92a區分緩解與非緩解患者的效能較強。 結論 血清外泌體miR-92a在彌漫大B細胞淋巴瘤患者中表達升高，其檢測可用于監測康艾注射液聯合化療治療的臨床療效。

[關鍵詞] miR-92a;彌漫大B細胞淋巴瘤;臨床意義;康艾注射液

[中圖分類號] R733.1 ? ? ? ? ?[文獻標識碼] A ? ? ? ? ?[文章編號] 1673-9701（2019）30-0042-04

Clinical significance of serum exosome miR-92a in the monitoring of Kangai injection combined with chemotherapy for diffuse large B-cell lymphoma

WANG Feifei ? ZHANG Yu ? WU Xiaolian

Department of Hematology， the First Affiliated Hospital of Zhejiang University of Traditional Chinese Medicine， Hangzhou ? 310000， China

[Abstract] Objective To investigate the clinical significance of serum exosome miR-92a in the monitoring of Kangai injection combined with chemotherapy for diffuse large B-cell lymphoma. Methods 42 patients with diffuse large B-cell lymphoma were enrolled in the study. They were divided into control group and study group according to different treatment methods. The control group was treated with CHOP chemotherapy， and the patients in the study group were treated with Kangai injection on the basis of treatment in the control group. The expression levels of exosome miR-92a in serum of all patients before and after treatment were detected by realtime PCR. The relationship between serum miR-92a and therapeutic effect was evaluated at different time points. Results Compared with that of the control group， the total effective rate of the study group was significantly higher， and the difference between the groups was statistically significant（P<0.05）. Patients in the study group were more likely to reduce serum exosome miR-92a， and the difference between the two groups was significant（P<0.05）. Compared with that before chemotherapy， both the control group and the study group significantly reduced the expression level of serum exosome miR-92a in patients after chemotherapy， and the difference was statistically significant（P<0.05）. There was a negative correlation between miR-92a and c-MYC in patients with diffuse large B-cell lymphoma（r=-0.451， P<0.001）. Serum exosome miR-92a had strong performance in distinguishing between patients with remission and non-remission. Conclusion The expression of serum exosome miR-92a is high in patients with diffuse large B-cell lymphoma. The detection can be used to monitor the clinical efficacy of Kangai injection combined with chemotherapy.

[Key words] miR-92a; Diffuse large B-cell lymphoma; Clinical significance; Kangai injection

細胞淋巴瘤是非霍奇金淋巴瘤最常見的一種病理類型，病理形態學主要表現為B淋巴細胞呈彌漫性生長，細胞的大小為正常淋巴細胞的2倍，被稱為彌漫性大B細胞淋巴瘤[1-2]。目前，臨床主要通過制定合適的化療方案來治療此疾病，加以康艾注射液對化療患者進行輔助治療，具有清熱解毒、消瘀散結之功效，臨床上常用于肺癌、惡性淋巴瘤及惡性腫瘤等疾病[3-4]。彌漫大B淋巴瘤的治療藥物價格較為昂貴，也存在一定的潛在風險，給患者帶來了極大的經濟壓力和心理負擔，大部分患者難以接受，進一步探尋有檢測意義的分子標記物對于化療過程而言十分重要[5-6]。有文獻調查顯示：血清外泌體miR-92a與癌癥的發展及檢測存在一定的意義[7]。國內對于血清外泌體miR-92a在彌漫大B細胞淋巴瘤治療檢測中的作用的相關研究較少，本研究對血清外泌體miR-92a在彌漫大B細胞淋巴瘤康艾注射液聯合化療治療監測中的臨床意義進行探討，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年1月～2019年2月我院就診并經臨床檢查確診為彌漫大B細胞淋巴瘤[9]患者42例作為研究對象，按照治療方案不同平均分為兩組，即研究組和對照組。兩組一般資料比較無明顯差異（P>0.05），具有可比性。見表1。男23例，女19例，平均年齡（55.09±10.21）歲;AnnArbor分期Ⅰ～Ⅱ期19例，Ⅲ～Ⅳ期23例;有B癥狀者18例，伴隨大包塊者9例，乳酸脫氫酶（LDH）升高16例，正常26例;無肝腎功能障礙、無身體其他臟器疾病、既往無化療治療史。

表1 ? 兩組患者基本情況比較

1.2方法

對照組患者接受標準CHOP方案[環磷酰胺600 mg/m2（第1天），長春新堿1.4 mg/m2（第1天），阿霉素25 mg/m2（第1天），和強的松60 mg/d持續5 d（第1～5天）]。化療每3周重復1次，6個療程。研究組患者在對照組治療基礎上聯合康艾注射液（長白山制藥股份有限公司生產，國藥準字Z20026868，50 mL溶于250 mL 10%葡萄糖溶液，靜脈滴注，1次/d，3周為1個療程，共6個療程治療。

1.3 觀察指標

對于納入研究的患者分別在化療前、化療中及化療后收集患者靜脈血5.5 mL，健康體檢人群與體檢時收集靜脈血5.5 mL，置于4℃左右保存，離心15 min，吸出上層血清，然后再離心15 min，吸取上層無細胞血清，分裝至無酶EP管中，放置在-80℃下備用。按試劑盒（購自美國SBI公司）說明書操作步驟提取外泌體miR-92a。使用納米粒徑分析鑒定miR-92a大小，實時熒光定量檢測血清中miR-92a mRNA（引物均購自美國Qiagen公司），采用2-ΔΔCt表示miR-92a相對表達量，重復3次。采用免疫組化法檢測c-MYC蛋白。

1.4 療效評價

根據臨床醫師及《惡性淋巴瘤療效評價標準》[8]對其療效進行評估，分為完全緩解（CR），病灶徹底消失，且持續時間至少1個月;部分緩解（PR），腫瘤最大直徑×最大垂直直徑減少超過50%，其余病變并無明顯擴大，且持續1個月以上;疾病穩定（SD），腫瘤最大直徑×最大垂直直徑減少或提高在50%及以下，且持續1個月時間;疾病進展（PD），腫瘤最大直徑×最大垂直直徑擴大25%及以上，或發現新病灶。總有效率=[（CR+PR）/總例數]×100%。

1.5 統計學方法

應用SPSS24.0軟件進行分析，計數資料用[n（%）]表示，采用χ2檢驗;計量資料用（x±s）表示，采用t檢驗;相關性分析采用Pearson相關。以各組患者近期療效的狀態作為治療后療效分類指標，以血清外泌體miR-92a表達水平作為療效評估敏感度指標進行ROC曲線繪制。P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1 兩組患者近期療效評價

與對照組相比，研究組患者總有效率明顯升高，組間比較差異具有統計學意義（P<0.05）。見表2。

2.2 血清外泌體miR-92a與c-MYC相關性分析

彌漫大B細胞淋巴瘤患者miR-92a與c-MYC呈負相關關系（r=-0.451，P<0.001）。

2.3 彌漫大B細胞淋巴瘤患者化療后血清外泌體miR-92a水平變化

與化療前相比，對照組和研究組均能明顯降低患者血清外泌體miR-92a的表達水平，組間比較差異具有統計學意義（P<0.05）。與對照組相比，研究組患者降低血清外泌體miR-92a的程度更為明顯，組間比較差異具有顯著性（P<0.05）。見表3。

2.4 血清外泌體miR-92a治療效果評估

以化療療效為狀態變量，血清外泌體miR-92a水平為測試變量繪制ROC曲線，結果顯示AUC為0.856（95%CI：0.726～0.948）（P<0.05），表明血清外泌體miR-92a區分緩解與非緩解患者的效能較強。見封三圖8。

3 討論

彌漫大B細胞淋巴瘤是成人常見的非霍奇金淋巴瘤亞型，具有高度異質性和侵襲性，臨床治療通常以聯合化療方案為主[9，10]，但仍有約35%患者會出現復發轉移，雖然目前有中西藥的聯合化療，如聯合康艾注射液輔助治療，康艾注射液主要由人參、黃芪等中藥材組成，具有增加機體免疫力及抑制實體瘤生長等作用，增強機體特異性和非特異性免疫功能，與化療聯合作用，可以降低毒副反應，提高治療效果[11-12];雖然近期療效對提高患者機體免疫能力有益，但遠期效果仍不容樂觀。彌漫大B細胞淋巴瘤具有極大的病程異質性，生存期短則1年，多則數十年，加強對疾病病程的監測，對于判斷患者的療效狀態、改進治療方案、延長患者生命而言是至關重要的[13-14]。目前，對于此疾病臨床療效的判斷，多見于影像學檢查，費用較高且不良影響較大[15]。近年來，外泌體等液體活檢成為臨床研究的熱門[16-17]，而對于血清外泌體miR-92a用于腫瘤診斷及療效檢測的臨床作用研究較少，近些年的研究證實miR-92a在多種腫瘤細胞株中表達異常，推測檢測miR-92a的表達量可能與腫瘤細胞的發生、發展有密切聯系，但目前對miR-92a的研究靶點、靶基因作用機制、其表達量在不同腫瘤發展階段的關聯等機制尚未闡明，本研究主要對血清外泌體miR-92a在彌漫大B細胞淋巴瘤康艾注射液聯合化療治療監測中的臨床意義進行探討。

本研究顯示：血清外泌體miR-92a在癌癥患者的體內水平表達升高，而治療后水平有降低的趨勢[18]，推斷血清外泌體miR-92a可能是潛在的彌漫大B細胞淋巴瘤診斷標志物。然后，本研究分析顯示miR-92a和c-MYC存在負相關關系，有研究報道，miR-92a的基因族簇與c-MYC相近，而c-MYC則與EF2家族二者具有一個負反饋調節系統，在正常生理狀態時各因子的含量保持平衡狀況，在病理狀態時，平衡狀態被破壞，所以當機體產生彌漫大B細胞淋巴瘤時，miR-92a水平上調，參與疾病的發展[19-20]。本研究對化療前、化療后的miR-92a水平變化進行檢測，以評估其治療效果，對于完全緩解組和部分緩解組，其化療后的miR-92a水平已明顯恢復，提示血清外泌體miR-92a水平可在一定水平反映化療效果，相較于傳統的影像學檢查而言，該監測手段簡便快捷且相對價廉，并可避免相關的放射損傷。

綜上所述，血清外泌體miR-92a水平變化在彌漫大B細胞淋巴瘤患者的臨床檢測中具有一定意義，其水平變化與治療效果相關。治療效果較好患者中血清外泌體miR-92a水平逐漸降低至正常水平，而治療效果較差患者血清外泌體miR-92a水平變化不明顯，可作為治療效果評估的檢查標志物。但本研究所納入的研究樣本量較少，且隨訪時間短，應當進一步擴大樣本量并延長隨訪時間加以驗證。

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（收稿日期：2019-06-21）