探討國內抗釀酒酵母抗體（ASCA）鑒別診斷克羅恩病的截斷點（cutoff值）的相關研究

姚芳 桑怡 范一宏

[摘要] 目的 檢測抗釀酒酵母抗體IgG、IgA在克羅恩病患者中的表達水平，探討其鑒別診斷克羅恩病的cutoff值。方法 納入2018年10月～2019年4月期間診斷為克羅恩病的患者109例，潰瘍性結腸炎30例，內鏡檢查無異常者25例。間接酶聯免疫檢測法測定患者血清中抗釀酒酵母抗體IgG、IgA表達水平，計算其cutoff值、靈敏度、特異度等指標。 結果 抗釀酒酵母抗體的陽性率為47.71%，抗釀酒酵母抗體IgG的cutoff值為10.5，靈敏度為71.56%，特異度為61.82%;抗釀酒酵母抗體IgA的cutoff值為0.415，靈敏度為66.06%，特異度為78.18%;兩者任一陽性的靈敏度為85.32%，兩者均陽性的特異度為80.00%。 結論 抗釀酒酵母抗體IgG、IgA在中國人群克羅恩病患者中的表達水平不高，需制定相應的cutoff值，兩者聯合檢測可提高克羅恩病患者檢出率。

[關鍵詞] 克羅恩病;抗釀酒酵母抗體;ROC曲線;靈敏度;特異度

[中圖分類號] R574.62 ? ? ? ? ?[文獻標識碼] A ? ? ? ? ?[文章編號] 1673-9701（2019）30-0010-04

Study on the investigation on the cutoff value of domestic anti-Saccharomyces cerevisiae antibody（ASCA） for differential diagnosis of Crohn's disease

YAO Fang1 ? SANG Yi1 ? FAN Yihong2

1.Department of Gastroenterology， Hangzhou Hospital of TCM， Hangzhou 310007， China;2.Department of Gastroenterology， the First Affiliated Hospital of Zhejiang Chinese Medicine University， Hangzhou ? 310006， China

[Abstract] Objective To detect the expression level of anti-Saccharomyces cerevisiae antibody IgG and IgA in the patients with Crohn's disease， and to explore the cutoff value of differential diagnosis of Crohn's disease. Methods A total of 109 patients with Crohn's disease， 30 patients with ulcerative colitis and 25 patients with no abnormalities by endoscopy were enrolled from October 2018 to April 2019. Indirect enzyme-linked immunosorbent assay was used for the determination of ASCA IgG and IgA expression levels in patients' serum， and the indicators such as cutoff value， sensitivity， and specificity were calculated. Results The positive rate of ASCA was 47.71%， the cutoff value of ASCA IgG was 10.5， the sensitivity was 71.56% and the specificity was 61.82%; the cutoff value of ASCA IgA was 0.415， the sensitivity was 66.06%， and the specificity was 78.18%; the sensitivity of either positive was 85.32%， and the specificity of both positive was 80.00%. Conclusion The expression levels of ASCA IgG and IgA are not high in the patients with Crohn's disease in China. A corresponding cutoff value needs to be established， and the combined detection of the two can improve the detection rate of patients with Crohn's disease.

[Key words] Crohn's disease; Anti-Saccharomyces cerevisiae antibody （ASCA）; ROC curve; Sensitivity; Specificity

克羅恩病（Crohn's disease，CD）是一種多種因素導致的可累及全消化道的慢性炎性肉芽腫性疾病，不同因素所導致的不同疾病亞型的混雜，導致了CD臨床譜的異質性，臨床表型紛繁多樣[1]，僅靠內鏡、影像等檢查常不能確診，且病理往往不典型，長期隨訪過程中常導致疾病的進展，因此，臨床特別是基層臨床非常需要一些明確的客觀性檢測指標，而抗釀酒酵母抗體（Anti-Saccharomyces cerevisiae antibody，ASCA）是國內外研究較深入的用來輔助診斷CD的特異性血清學標記物，但國內外研究數據差距較大，其具體應用價值在國內存在較大爭議。本研究旨在根據我國CD患者ASCA表達水平制定相應的cutoff值，使其更好地應用于臨床。

1 資料與方法

1.1一般資料

納入2018年10月～2019年4月期間就診于浙江省中醫院、浙江大學附屬邵逸夫醫院、浙江大學附屬第一醫院、浙江大學附屬第二醫院、蘇州大學附屬第三醫院、杭州市中醫院等6家醫院并根據《炎癥性腸病診斷與治療的共識意見（2018年·北京）》被確診[2]為CD的患者109例，并選取同期潰瘍性結腸炎（ulcerative colitis，UC）患者30例，健康者25例作為正常組，各組在年齡、性別構成比、病程方面比較均無統計學差異（P>0.05），見表1。

1.2 方法

1.2.1 標本采集 ?清晨空腹抽取靜脈血5 mL，離心抽取上方血清1 mL置于2 mL EP管中，放入-80℃冰箱保存，集中檢測各項指標。血清學檢測采用單盲法進行。

1.2.2 抗體測定 ?各指標采用ELISA法檢測，試劑盒購自蘇州和銳醫藥科技有限公司。檢測步驟嚴格按照說明書進行。將所有檢驗試劑在18℃～25℃條件下平衡0.5 h，然后按1：20去蒸餾水進行稀釋。樣本1：101進行稀釋，取100 μL稀釋后樣本和陰性質控（蒸餾水）加入酶標板微孔中，覆上板貼33℃搖床200 r溫育120 min。棄去液體，洗滌液洗板3次，250 μL/孔，每次浸泡3 min，甩干。每孔加酶標二抗100 μL，覆上板貼，33℃～35℃搖床200 r溫育120 min。棄去孔內液體，甩干，洗板5次，250 μL/孔，每次浸泡3 min，甩干。將底物溶液A和B 1：1混合，依序每孔加底物溶液100 μL，37℃避光顯色15 min。依次每孔加終止液50 μL，終止反應。反應終止后5 min內用酶標儀在450 nm波長測量各孔的光密度（OD）值。

1.3 觀察指標

ASCA IgG、ASCA IgA在各組中的陽性率，診斷CD的靈敏度、特異度、陽性預測值及陰性預測值。

1.4統計學分析

采用SPSS19.0統計學軟件，受試者一般臨床資料采用獨立樣本t檢驗，指標陽性率采用χ2檢驗，并采用ROC曲線尋找ASCA IgG、ASCA IgA的cutoff值，根據cutoff值計算其靈敏度、特異度、陽性預測值及陰性預測值。

2 結果

2.1 ASCA IgG、IgA在各組患者中的陽性率

ASCA IgG、IgA在CD患者中的陽性率分別為16.51%、40.37%，均高于UC組、正常組，兩者聯合檢測陽性率達47.71%，與其他兩組比較差異均有統計學意義（P=0.001），見表2。

2.2 ASCA IgG、IgA鑒別診斷CD的價值

ASCAIgG、ASCAIgA在CD患者中高表達，因此，我們以CD組為實驗組，以UC及正常組為對照組，計算兩指標的靈敏度、特異度、陽性預測值、陰性預測值及ROC曲線下面積，以此分析其鑒別診斷CD的價值。

ASCA IgG診斷CD的特異度較高，達96.36%，但靈敏度嚴重不足;ASCA IgG、ASCA IgA兩者聯合檢測可提高靈敏度至46.79%，但在篩查疾病方面仍存在不足;兩者特異度均較高，聯合檢測時更高達100%，鑒別診斷CD價值高，見表3、4;ROC曲線分析得出ASCA IgG、ASCA IgA曲線下面積分別為0.671、0.760，從而得出最佳靈敏度和特異度及曲線下面積的截斷點（cutoff值）分別為10.5、0.415（圖1、2）。根據新的截斷點重新計算，ASCA IgG、IgA靈敏度均有不同程度提高，但特異度有所下降;但兩者聯合檢測時任一陽性的靈敏度高達85.32%，均陽性的特異度高達80.00%，見表5、6。

3 討論

克羅恩病的發病與腸道微生物及免疫反應失調存在顯著相關性，這些不平衡反應也包括體液免疫，如ASCA的產生。ASCA是針對釀酒酵母細胞壁上寡甘露糖苷抗原表位的血清標志物，ASCA陽性提示患者對酵母菌抗原耐受性缺失。1988年研究[3]發現CD患者血清ASCA IgA和IgG滴度高于對照組，隨著研究深入，ASCA以37%～72%的靈敏度及82%～100%的特異度[4]被廣泛應用于輔助診斷CD，鑒別腸結核、潰瘍性結腸炎、腸道白塞等疾病[4-11]。

來自歐洲的研究報道顯示CD患者ASCA的陽性率可達60%～70%，美國一項研究[12]亦顯示ASCA陽性率達62%，而本研究中ASCA陽性率僅為47.71%，與日本的調查結果（45.6%）[13]及既往國內研究結果[14]相一致，均遠低于歐洲人群。

ASCA有IgA和IgG兩個亞型[15]。有研究認為，ASCA IgA對CD更具有特異性，分泌型IgA參與了CD疾病發病過程中的腸道免疫機制，更有研究表明ASCA IgA 對CD有100%的特異性[16]，但大宗人群研究不能重復這一結果，本研究結果亦顯示ASCA IgA單獨檢測特異度及陽性預測值高達83.64%、82.69%，但靈敏度及陰性預測值則明顯不足，僅39.45%、41.07%，而ASCAIgG也顯示出相同結果，兩者聯合檢測時同樣顯示出靈敏度的嚴重不足，使之無法很好地用于臨床篩查。

導致這一研究結果的原因可能與疾病嚴重度、活動度、病變累及范圍不同等有關：國外炎癥性腸病患者均較嚴重，CDAI評分在中、重度者居多，腸瘺、梗阻等并發癥導致需要外科手術的幾率高，而我國該病患者則多以輕、中度為主，并發癥較少見，極少發展到需要外科手術[17]。同時，國外CD患者多累及小腸，以上消化道病變為主者多見，我國則以結腸型CD多見，一項回顧性研究顯示，ASCA鑒別結腸型CD靈敏度和特異度分別下降至25%～44%、86%～95%[18]。同時，ASCA的表達為一種家族性免疫學性狀[19-20]，其在有家族史克羅恩病患者中的檢出率明顯高于無家族史的所謂散發病例，而本研究入組的多為無家族史的散發CD患者;同時，CD患者中也有相當一部分病例為ASCA血清學陰性者，而人種的差異，亞洲人群中ASCA血清學陰性者占多數也可能導致這一研究結果。

因此，本研究以ASCA IgG、ASCA IgA在CD患者及對照組（UC患者及健康者）中的表達水平，采用ROC曲線重新尋找cutoff值，根據cutoff值重新計算兩者的靈敏度、特異度、陽性預測值及陰性預測值，結果顯示，矯正截斷點后ASCA IgG及ASCA IgA靈敏度及陰性預測值均有不同程度提高，分別為71.56%、78.79%及66.06%、85.71%，可作為篩查指標，即陽性可高度懷疑CD，但特異度及陽性預測值不足，不能用于鑒別診斷CD，將兩者聯合檢測，結果顯示：任意一個陽性時，靈敏度高達85.32%，兩者均陽性時，特異度高達80%，提示ASCA對協助診斷CD有其臨床意義，且不同亞型需同時檢測。

但此研究尚有不足之處，該指標與CD疾病位置、活動度、藥物治療前后等方面的關系均未納入研究，且病例集中在南方，僅有單一試劑盒，不排除不同試劑盒導致的不同研究結果，故需進一步在全國范圍內進行多中心研究，納入不同疾病分期患者，且需多種試劑盒同時檢測，以便尋找適合中國CD患者的檢測試劑盒及最佳截斷值，以期更好地應用于臨床。

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（收稿日期：2019-04-28）