免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)的研究進(jìn)展

潘晨燕

靈山縣人民醫(yī)院 廣西欽州 535400

免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)主要是源于在免疫學(xué)中標(biāo)記技術(shù)的應(yīng)用。伴隨近幾年醫(yī)療水平提升與研究的深入，使得免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)的發(fā)展更向前進(jìn)了一步，已從以往單純的免疫診斷技術(shù)逐漸向微量化、多基因和單細(xì)胞等方面發(fā)展[1]。而對(duì)于一些惡性腫瘤、原發(fā)性與繼發(fā)性免疫缺陷的臨床診斷，都會(huì)客觀要求提高免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)的精確度，便于對(duì)臨床治療有效性的定量評(píng)價(jià)。故筆者做免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)研究進(jìn)展綜述。

1 免疫學(xué)檢驗(yàn)的含義

免疫學(xué)檢驗(yàn)指的是依照抗體、抗原反應(yīng)原理，通過(guò)對(duì)已知抗體的利用對(duì)未知抗原、抗體實(shí)施檢測(cè)。經(jīng)不同抗原遞呈途徑，內(nèi)源性與外源性抗原可對(duì)生物機(jī)體的免疫應(yīng)答進(jìn)行誘導(dǎo)，使得非特異性、特異性細(xì)胞的克隆情況在生物體內(nèi)形成且不斷擴(kuò)增，同時(shí)還能分泌特異性的免疫球蛋白[2-3]。因抗體-抗原的結(jié)合特點(diǎn)具有專一性與特異性，使得此檢測(cè)方法能對(duì)某一特異的蛋白進(jìn)行定量、定位及定性檢測(cè)。隨著近幾年免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)在臨床中的應(yīng)用愈發(fā)普遍，現(xiàn)已適用于對(duì)多種病癥的療效評(píng)價(jià)、診斷，以及對(duì)發(fā)病機(jī)制的研究。

2 免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)的研究進(jìn)展

2.1 酶標(biāo)記免疫檢驗(yàn)技術(shù)

（1）酶聯(lián)免疫變電技術(shù)

該技術(shù)屬于一種分析技術(shù)，多用于對(duì)T細(xì)胞分泌細(xì)胞因子功能和B細(xì)胞分泌免疫球蛋白的測(cè)定，為定量酶免疫吸附試驗(yàn)技術(shù)的延伸與發(fā)展。

把抗Ig或CK的特異性單克隆抗體植入微孔培養(yǎng)板底部為酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)技術(shù)的主要原理。把檢測(cè)樣本置于微孔板內(nèi)培養(yǎng)時(shí)，在特異性抗原或有絲分裂原的作用下，能對(duì)記憶型B細(xì)胞或T細(xì)胞進(jìn)行活化，從而形成Ig或CK。細(xì)胞下方的固相單克隆抗體會(huì)將Ig或CK物質(zhì)捕獲。對(duì)清洗后的細(xì)胞加入生物素化的第二抗體，抗體經(jīng)結(jié)合Ig或CK物質(zhì)后，再加以酶做標(biāo)記的親和素或生物素反應(yīng)，以酶底物顯色，陽(yáng)性細(xì)胞便能形成大小不等的圓形著色斑點(diǎn)，而斑點(diǎn)直徑則在50至200μm范圍內(nèi)，每個(gè)斑點(diǎn)均與Ig或CK的一個(gè)細(xì)胞對(duì)應(yīng)分泌，而特定陽(yáng)性B、T細(xì)胞族群的形成可經(jīng)斑點(diǎn)直徑的大小直接反映[4]。酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)技術(shù)不但能對(duì)抗體的B細(xì)胞進(jìn)行分泌，而且還能對(duì)各類CK的T細(xì)胞實(shí)施分泌。另外，此技術(shù)也是檢測(cè)T細(xì)胞功能的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)，其檢測(cè)靈敏度較高。

（2）酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)技術(shù)

從理論方面來(lái)看，只要是相應(yīng)的抗體或某一抗原純品均可通過(guò)酶聯(lián)免疫技術(shù)實(shí)施檢測(cè)，所以，此檢測(cè)技術(shù)能均能對(duì)抗體系統(tǒng)、可溶性抗原予以檢測(cè)，可在抗體、抗原等血源病原體，以及腫瘤標(biāo)志物、小分子激素和細(xì)胞分子等各種微量蛋白中廣泛應(yīng)用[5]。ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)技術(shù)）是把免疫過(guò)氧化物技術(shù)作為基礎(chǔ)，其有較強(qiáng)的特異性，較高的敏感性，操作便捷，而且方便臨床實(shí)施觀察，可在大規(guī)模檢查中適用。

2.2 熒光素標(biāo)記抗體技術(shù)

（1）流式細(xì)胞免疫熒光分析技術(shù)

一種實(shí)驗(yàn)技術(shù)以流式細(xì)胞分析、免疫微球與免疫熒光等基礎(chǔ)所建立的血清學(xué)新式實(shí)驗(yàn)方法便是流式細(xì)胞免疫熒光分析技術(shù)。流式細(xì)胞儀的研制是基于熒光對(duì)抗體染色后將所需信息所換取的原理，技術(shù)特點(diǎn)具備單體克隆抗體、電子計(jì)算機(jī)技術(shù)與激光技術(shù)，所用領(lǐng)域分析范圍包括DNA含量、核膜成分、細(xì)胞內(nèi)與細(xì)胞表型等。因其具備將多種靶物質(zhì)的潛在特征同步檢測(cè)于同一試管的特性而備受業(yè)界臨床檢驗(yàn)許多學(xué)者的關(guān)注。

（2）間接免疫熒光技術(shù)

簡(jiǎn)介免疫熒光技術(shù)作用于檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)因相應(yīng)抗體或抗原定位的對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)，所用范圍包括檢測(cè)其他呼吸道病原體抗體與抗平滑肌抗體、抗核抗體和抗病原體等。可將自動(dòng)化程度與標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)提升，可將手工操作誤差降低[6]。此技術(shù)現(xiàn)已相對(duì)成熟，可實(shí)施商品開(kāi)發(fā)。

（3）四聚體分析技術(shù)

通過(guò)對(duì)T細(xì)胞表面TCR的利用，經(jīng)四聚體的構(gòu)建能和其表位肽相互作用，進(jìn)而能保證識(shí)別的精準(zhǔn)度，使得有助于親和力結(jié)合的提升，起到對(duì)抗原特異性T細(xì)胞進(jìn)行有效檢驗(yàn)的目的。MHC-肽四聚體分子微陣列技術(shù)和MHC-肽四聚體磁分離技術(shù)、MHC-肽四聚體流式細(xì)胞技術(shù)和MHC-肽四聚體ELISA技術(shù)等均是從四聚體分析技術(shù)中衍生出來(lái)的常見(jiàn)檢驗(yàn)方法，在臨床中多用于檢驗(yàn)病毒、腫瘤抗原特異性T細(xì)胞。

2.3 新型標(biāo)記免疫檢驗(yàn)技術(shù)

（1）核酸標(biāo)記免疫檢驗(yàn)技術(shù)

核酸標(biāo)記免疫檢驗(yàn)技術(shù)以轉(zhuǎn)錄翻譯或核酸擴(kuò)增為原理設(shè)計(jì)，轉(zhuǎn)錄翻譯即測(cè)定相應(yīng)轉(zhuǎn)錄翻譯后的酶建立于抗原反應(yīng)和標(biāo)記抗體DNA的基礎(chǔ)上所進(jìn)行的；而擴(kuò)增即較短時(shí)間內(nèi)通過(guò)酶鏈反應(yīng)可達(dá)數(shù)百萬(wàn)倍的幾何級(jí)數(shù)擴(kuò)增[7]。兩種檢測(cè)方法的靈敏性都較大，因此現(xiàn)今仍處于研究階段。

（2）元素標(biāo)記免疫檢驗(yàn)技術(shù)

檢驗(yàn)技術(shù)有電化學(xué)發(fā)光與分辨熒光兩種免疫分析技術(shù)，另有Ru（釕元素）與Sm3+，Tb3+，Eu3+等鑭系元素的兩種標(biāo)記元素。電化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)和分辨熒光免疫分析技術(shù)均屬于元素標(biāo)記免疫檢驗(yàn)技術(shù)之一，其中電化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)可用于反復(fù)激發(fā)于電場(chǎng)作用下而放大信號(hào)，分辨熒光免疫分析技術(shù)可用于測(cè)定兩種指標(biāo)時(shí)同時(shí)進(jìn)行。

2.4 其他免疫檢驗(yàn)技術(shù)

（1）液態(tài)芯片技術(shù)

液態(tài)芯片技術(shù)研制于20世紀(jì)70年代時(shí)一家名為L(zhǎng)umi-nex的美國(guó)公司，該技術(shù)出現(xiàn)后被定性為新一代的生物芯片技術(shù)，采用流式細(xì)胞技術(shù)為檢測(cè)平臺(tái)，使用帶有編碼的微球體為載體，可大規(guī)模的用于進(jìn)行核酸與蛋白質(zhì)的鑒定。與此同時(shí)，還可對(duì)神經(jīng)、內(nèi)分泌與傳染病等多重指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)，且可用于微量分析的任何使用系統(tǒng)的測(cè)試[8]。

（2）微陳列免疫芯片技術(shù)

微陳列免疫芯片技術(shù)是一種小分子抗原分析平臺(tái)，其所具備著高效率的特征。該技術(shù)可在定量檢測(cè)目標(biāo)含量極低的物質(zhì)于復(fù)雜樣品中時(shí)快速的進(jìn)行。此外可檢測(cè)全部蛋白質(zhì)含量在生物樣品中的變化情況。該技術(shù)具備在平行分析及檢驗(yàn)時(shí)能夠高通量進(jìn)行，可降低藥品或樣品的用量。

3 總結(jié)

綜上所述，通過(guò)簡(jiǎn)要闡述免疫學(xué)檢驗(yàn)概念，對(duì)不同免疫檢驗(yàn)技術(shù)的檢測(cè)情況進(jìn)行分析。為使免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)能更好地適應(yīng)當(dāng)前醫(yī)療發(fā)展，都會(huì)要求能取得特定部位的微量樣本并對(duì)其予以精準(zhǔn)分析，隨著在科研方面取得的進(jìn)展，如維納電子學(xué)、生物學(xué)等，一些更敏感、更新型分析方法已不斷適用于臨床中，也使得免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)朝著更新、更高的方向發(fā)展。