膽管癌患者血清熱休克蛋白90α水平變化及意義*

王 金，趙一潔，尚培中△,孫永杰，賈國洪，李曉武

(1.中國人民解放軍第二五一醫(yī)院普通外科，河北張家口 075000；2.河北北方學(xué)院圖書館，河北張家口 075000；3.中國人民解放軍第二五一醫(yī)院心胸外科，河北張家口 075000)

膽管癌是起源于肝內(nèi)或肝外膽管黏膜上皮細(xì)胞的惡性腫瘤，是嚴(yán)重危害人類健康的主要惡性腫瘤之一[1]。在全球范圍內(nèi),膽管癌的發(fā)病率及病死率均呈上升趨勢。膽管癌起病隱匿，早期檢測困難，以手術(shù)切除為首選治療方法[2]，但手術(shù)切除率低、復(fù)發(fā)率高，根治性手術(shù)切除后患者的5年生存率也僅為20%～40%[3]，預(yù)后差。在膽管癌的診斷中，血清糖類抗原19- 9(CA19- 9)有一些價值(>129 U/mL),但仍缺乏明確的血清腫瘤標(biāo)志物[4]。已有研究表明，膜聯(lián)蛋白A1(annexin A1)[5]、肝細(xì)胞生長因子(HGF)及其受體(C- Met)蛋白[6]、有絲分裂調(diào)控酶polo樣激酶1(PLK1)和aurora A[7]、X連鎖凋亡抑制蛋白(XIAP)[8]在膽管癌患者血清中高表達(dá)。隨著血清腫瘤標(biāo)志物研究的深入，相關(guān)種類逐漸被發(fā)現(xiàn)，靈敏度、特異度不斷提升,血清腫瘤標(biāo)志物將會成為膽管癌診治過程中起決定性作用的成分之一[9]。近年來，熱休克蛋白90α(HSP90α)在胃癌、乳腺癌、肺癌及結(jié)直腸癌等惡性腫瘤中的研究越來越多,已有研究發(fā)現(xiàn)HSP90α在膽管癌組織及細(xì)胞中高表達(dá)[10- 11]。本研究旨在探討血清HSP90α在膽管癌診斷中的價值,現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2012年9月至2017年10月中國人民解放軍第二五一醫(yī)院普通外科收治的54例膽管癌住院患者作為膽管癌組,男31例,女23例；年齡38～82歲,中位年齡62歲，>60歲者29例，≤60歲者25例；經(jīng)病理醫(yī)師證實(shí)均為膽管腺癌，其中腫瘤小于或等于2 cm者25例，>2 cm者29例；上段膽管癌24例，中下段膽管癌30例；有神經(jīng)侵犯者22例，無神經(jīng)侵犯者32例；低分化腺癌34例，高中分化腺癌20例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者25例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者29例；Ⅰ～Ⅱ期38例，Ⅲ～Ⅳ期16例。54例患者均行手術(shù)治療，術(shù)前均未行放療、化療或免疫治療等輔助治療，其中切除組43例(肝門部膽管癌根治19例、根治性胰十二指腸切除術(shù)24例),未切除組11例(膽腸吻合6例、膽管T管引流術(shù)5例),術(shù)后10～15 d拆線后出院。另選取同期住院膽管結(jié)石患者32例作為膽管結(jié)石組，男18例，女14例，年齡38～72歲；同期行健康體檢者25例作為對照組，男15例，女10例，年齡36～75歲；均無腫瘤家族史。3組性別及年齡比例比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。收集標(biāo)本前均取得標(biāo)本提供者知情同意并簽署知情同意書，本研究經(jīng)中國人民解放軍第二五一醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2方法

1.2.1標(biāo)本采集 膽管癌組分別于術(shù)前及術(shù)后10 d清晨空腹靜脈抽血約5 mL，膽管結(jié)石組分別于術(shù)前及術(shù)后3 d清晨空腹靜脈抽血約5 mL,對照組抽取清晨空腹靜脈血約5 mL,將靜脈血置于抗凝管內(nèi),搖勻后經(jīng)離心機(jī)3 500 r/min離心15 min后分離出血清,標(biāo)記后存儲于-80 ℃冰箱備用。

1.2.2HSP90α與CA19- 9的檢測 (1)HSP90α采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測，人HSP90α ELISA試劑盒購自武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司，儀器為DNM- 9602酶標(biāo)分析儀(北京朗普新技術(shù)有限公司)，嚴(yán)格按試劑說明書進(jìn)行操作，HSP90α的正常參考值范圍為 0～82.06 ng/mL，以HSP90α>82.06 ng/mL判為陽性結(jié)果[12]。CA19- 9采用化學(xué)發(fā)光法檢測,儀器為美國貝克曼公司的XDI800，以CA19- 9>37 U/mL判為陽性結(jié)果。

2 結(jié) 果

2.1不同患者血清HSP90α水平比較 膽管癌組、膽管結(jié)石組、對照組血清HSP90α水平分別為(104.53±23.21)、(42.53±8.86)、(38.22±9.85)ng/mL；膽管癌組血清HSP90α高于膽管結(jié)石組與對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；膽管結(jié)石組與對照組HSP90α水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.2不同臨床參數(shù)與膽管癌患者血清HSP90α陽性率的關(guān)系 膽管癌患者血清HSP90α陽性率與腫瘤的分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期相關(guān)(P<0.05)，而與性別、年齡、腫瘤大小、腫瘤位置及神經(jīng)侵犯無關(guān)(P>0.05)，見表1。

2.3血清HSP90α與CA19- 9單獨(dú)及聯(lián)合檢測診斷膽管癌的效能 膽管癌患者血清HSP90α與CA19- 9表達(dá)水平的真實(shí)值與預(yù)測值，見表2。血清HSP90α診斷膽管癌的靈敏度為68.52%(37/54)、特異度為80.00%(20/25)、陽性預(yù)測值為88.10%(37/42)；血清CA19- 9診斷膽管癌的靈敏度為79.63%(43/54)、特異度為84.00%(21/25)、陽性預(yù)測值為91.49%(43/47)；血清HSP90α與CA19- 9聯(lián)合檢測(二者任有一項(xiàng)為陽性計(jì)為陽性，同時為陰性計(jì)為陰性)靈敏度為96.30%、特異度為72.00%。與CA19- 9相比，血清HSP90α診斷膽管癌的靈敏度、特異度均較低，但HSP90α與CA19- 9的聯(lián)合檢測的靈敏度明顯增高,但特異度相對降低。

2.4膽管癌組與膽管結(jié)石組手術(shù)前后血清HSP90α水平比較 膽管癌組術(shù)后血清HSP90α水平較術(shù)前降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表3。

表3 膽管癌組與膽管結(jié)石組手術(shù)前后血清HSP90α 水平比較

a：P<0.05，與同組術(shù)前比較

2.5膽管癌切除組與未切除組手術(shù)前后血清HSP90α水平比較 膽管癌患者中，腫瘤切除組患者術(shù)后血清HSP90α水平低于術(shù)前，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；腫瘤未切除組患者手術(shù)前后血清HSP90α水平無明顯差異(P>0.05)，見表4。

表4 膽管癌切除組與未切除組手術(shù)前后血清 HSP90α水平比較

a：P<0.05，與同組術(shù)前比較

3 討 論

HSP90α是熱休克蛋白家族中最重要的成員之一，生理狀態(tài)下作為分子伴侶僅在細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮作用，在應(yīng)激狀態(tài)下以組織特異的方式在不同的水平表達(dá)，在一些腫瘤中濃度顯著增高并可主動分泌至細(xì)胞外[13]。HSP90α在致癌信號的傳導(dǎo)、血管的新生、抗細(xì)胞凋亡及腫瘤轉(zhuǎn)移等方面發(fā)揮重要作用[14]，已成為腫瘤治療的一個新靶點(diǎn)。研究發(fā)現(xiàn) HSP90α在多種惡性腫瘤中呈現(xiàn)異常高表達(dá)，如食管癌[15]、胃癌[16]、肝癌[17]、乳腺癌[18]及肺癌[19]等。張晶銳等[20]發(fā)現(xiàn)HSP90α在膽管癌組織中高表達(dá)，提示HSP90α可能參與膽管癌發(fā)生、發(fā)展的調(diào)控。

本研究發(fā)現(xiàn)，膽管癌患者血清HSP90α水平明顯高于膽管結(jié)石患者與健康對照者(P<0.05),膽管結(jié)石患者血清HSP90α水平與健康對照者無明顯差異(P>0.05)，這說明確定HSP90α的醫(yī)學(xué)決定水平可用于區(qū)別膽管的惡性病變、良性病變及健康組織。膽管癌患者HSP90α水平的表達(dá)與癌細(xì)胞的分化程度、腫瘤是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床病理TNM分期明顯相關(guān)，而與患者性別、年齡、腫瘤大小、腫瘤位置及有無神經(jīng)侵犯無關(guān)。癌細(xì)胞分化程度越低，血清中HSP90α陽性率越高，有淋巴轉(zhuǎn)移的患者比未發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移的患者血清HSP90α陽性率高。在臨床病理TNM分期中，Ⅲ～Ⅳ期患者血清HSP90α陽性率明顯高于Ⅰ～Ⅱ期患者。這些結(jié)果都明確表明，膽管癌患者血清HSP90α水平隨著癌細(xì)胞生物狀態(tài)的改變而改變，一定程度上反映了腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。目前腫瘤標(biāo)志物的聯(lián)合檢測是研究的一大熱點(diǎn)，在腫瘤預(yù)防、診斷和預(yù)后中，腫瘤標(biāo)志物將會占有很重要的地位[21]。有研究表明，對于肺癌[22- 23]、乳腺癌[24]、結(jié)直腸癌[25]患者，通過HSP90α與其他腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測，能夠進(jìn)一步提高診斷的靈敏度與特異度。本研究亦發(fā)現(xiàn)，雖然血清HSP90α診斷膽管癌的靈敏度和特異度均低于CA19- 9，通過血清HSP90α與CA19- 9聯(lián)合檢測，靈敏度為96.30%，特異度為72.00%，靈敏度均明顯高于單獨(dú)HSP90α或CA19- 9檢查。本研究中的54例膽管癌患者術(shù)后血清HSP90α水平明顯低于術(shù)前，其中腫瘤切除組患者術(shù)后血清HSP90α水平明顯降低，但腫瘤未切除組患者手術(shù)前后血清HSP90α水平無明顯差異，考慮由于腫瘤仍存在，導(dǎo)致血清HSP90α水平無明顯改變。由此作者推測血清HSP90α可作為膽管癌術(shù)前診斷、術(shù)后效果及腫瘤轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的評價指標(biāo)。

目前，手術(shù)切除仍是治療膽管癌的首要方法，化療藥物敏感性差，且臨床藥物治療過程中易出現(xiàn)抗藥性[26]，如何從分子水平上對膽管癌的發(fā)生、發(fā)展情況進(jìn)行分析，并采取有效的基因靶向治療則是腫瘤化療的新方向[27]。繼2013年在世界上首次證明HSP90α是一個全新腫瘤標(biāo)志物并可用作肺癌檢測后，清華大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院羅永章[28]在世界上首次證明，HSP90α可用于肝癌患者的檢測，靈敏度比現(xiàn)行檢測方法甲胎蛋白(AFP)大幅提高。近幾年來，HSP90抑制劑備受關(guān)注。由于17- 烯丙基氨基- 17- 去甲氧基- 格爾德霉素(17- AAG)在前期臨床試驗(yàn)中表現(xiàn)出有效的抗癌活性，已進(jìn)入用于治療各種人類癌癥的Ⅱ/Ⅲ期臨床試驗(yàn)[29]。17- 二甲基胺乙基- 17- 去甲氧基格爾德霉素(17- DMAG)與5- 氟尿嘧啶(5- FU)相互協(xié)同發(fā)揮抗腫瘤作用，二者聯(lián)合使用時，顯著抑制胃癌細(xì)胞的生長[30]。作者認(rèn)為，HSP90α作為腫瘤治療的新靶點(diǎn),為腫瘤治療提供了新的途徑。

綜上所述，膽管癌患者血清HSP90α水平可在一定程度上代表癌細(xì)胞的生物學(xué)狀態(tài)，反映了膽管癌的發(fā)生、發(fā)展。為血清HSP90α能夠成為膽管癌早期診斷及治療預(yù)后的重要指標(biāo)提供了有價值的試驗(yàn)資料，且HSP90α與CA19- 9聯(lián)合檢測能夠進(jìn)一步提高膽管癌的臨床檢出率。如能加大樣本量進(jìn)一步分析與評估，將有助于進(jìn)一步檢驗(yàn)HSP90α的臨床應(yīng)用價值。