張曉紅，趙宇晨，郭擁軍

(1.首都醫科大學附屬北京同仁醫院檢驗科，北京100730；2.首都醫科大學臨床檢驗診斷學系，北京100070)

參考區間是詮釋患者的實驗室檢測成果，實驗室成立參考區間可以為臨床提供參考依據[1]。目前我國肺癌按組織病理學特征可分為小細胞肺癌 (SCLC)和非小細胞肺癌 (NSCLC)。SCLC具有惡性化程度高、生長速度迅猛 、容易發生遠處轉移和對放化療高度敏感等特點，因此早期快速特異性地診斷SCLC顯得十分重要[2-3]。胃泌素釋放肽(GRP)是一種胃腸道激素的調節肽，也廣泛存在于神經內分泌細胞、肺成纖維細胞和支氣管上皮細胞中[4]，在疾病狀態下通常由SCLC細胞產生。以往曾將血液中GRP水平作為SCLC的腫瘤標志物，但由于GRP半衰期很短，僅有2 min很難對其進行檢測。胃泌素釋放肽前體(ProGRP)是GRP較為穩定的前體，目前已成為一種SCLC腫瘤標志物，在SCLC的早期診斷、療效判斷及復發預測中特異性較高。因此，建立成人血清ProGRP的參考區間可以為臨床對SCLC的早期診斷和預后提供參考依據。

1 資料與方法

1.1一般資料 嚴格篩選首都醫科大學附屬北京同仁醫院2016年6月至2019年4月體檢健康人群2 051例作為研究對象，其中男性1 110例，女性941例，年齡18～86歲，平均年齡為(45.5±13.3)歲。入選標準：(1)無各類腎臟疾病導致的腎功能侵害；(2)近期無服用會出現腎損傷的腎毒性藥物；(3)無肺部疾病病史；(4)排除甲胎蛋白、癌胚抗原、神經元烯醇化酶[5]、鱗狀上皮細胞癌相關抗原、細胞角蛋白19片斷抗原異常；(5)無其他遺傳病史；(6)排除各種腫瘤疾病患者包括良惡性腫瘤。所有數據來自于本院檢驗科實驗室信息系統。

1.2儀器與試劑 采用美國雅培公司生產的化學發光微粒子免疫檢測法ProGRP 測定試劑盒在全自動免疫分析儀(i2000SR)上進行檢測。使用配套的校準品和質控品，檢測期間保證每天的室內質控均在控。

1.3方法 所有研究對象均在空腹條件下取靜脈血3～5 mL，靜置20 min，3 000 r/min離心10 min。排除標本量不足、嚴重溶血、黃疸、乳糜等標本，立即進行檢測。所有試驗嚴格按照儀器和ProGRP項目檢測的標準操作規程(SOP)進行操作。

1.4統計學處理 采用SPSS22.0軟件對血清ProGRP檢測結果進行數據處理及統計學分析。對所得的數據使用Dixon法剔除離群值后，采用K-S檢驗判斷數據是否處于正態分布。經統計分析后，血清ProGRP檢測結果為非正態分布。采用Mann-WhitneyU檢驗比較各年齡段不同性別之間的差異。通過Spearman非參數相關分析檢驗血清ProGRP檢測結果和年齡之間的相關性。利用非參數Kruskal-Wallis檢驗比較不同年齡段成人血清ProGRP水平，并采用非參數方法計算實際標本分組血清ProGRP檢測結果的2.5百分位數、5百分位數、50百分位數、95百分位數和97.5百分位數，將95百分位數作為參考區間的上限。P<0.05表示差異有統計學意義。

2 結 果

2.1不同年齡段成人血清ProGRP檢測結果比較 通過Spearman非參數相關分析檢驗血清ProGRP檢測結果和年齡之間的相關性。結果顯示血清ProGRP檢測結果與年齡之間存在明顯的正相關(r=0.238，P<0.05)。不同年齡段成人血清ProGRP檢測結果比較見表1。

2.2各年齡段成人不同性別間ProGRP檢測結果比較 采用Mann-WhitneyU檢驗比較各年齡段成人不同性別之間ProGRP檢測結果，各年齡段成人不同性別之間血清ProGRP檢測結果比較，差異無統計學意義(P值分別為0.233、0.683、0.271、0.557、0.588和0.499)。將各年齡段不同性別的數據進行合并，經統計分析后，6個年齡段血清ProGRP檢測結果的中位數分別為34.6、34.1、37.2、37.7、39.4和46.7 pg/mL，見圖1。

表1 不同年齡段成人血清ProGRP檢測結果比較(pg/mL)

續表1 不同年齡段成人血清ProGRP檢測結果比較(pg/mL)

圖1 6個年齡段成人血清ProGRP檢測結果的中位數水平

2.3Kruskal-Wallis檢驗比較不同年齡段成人血清ProGRP檢測結果 利用非參數Kruskal-Wallis檢驗比較不同年齡段成人ProGRP水平，結果顯示，18～<30歲、30～<40歲、40～<50歲、50～<60歲和60～<70歲與70～≤86歲成人ProGRP水平比較，差異有統計學意義(P<0.05)；前5個年齡段成人ProGRP水平比較差異無統計學意義(P>0.05)。因此，將18～<70歲年齡段血清ProGRP檢測結果合并，不同年齡段成人血清ProGRP檢測結果比較見表2。18～<70歲成人血清ProGRP參考區間的上限為57.4 pg/mL，而70～≤86歲人群血清ProGRP參考區間的上限是76.2 pg/mL。

表2 合并后不同年齡段成人血清ProGRP檢測結果比較(pg/mL)

3 討 論

ProGRP 對SCLC的診斷具有高靈敏度、特異度，因此建立ProGRP的參考區間有助于臨床對SCLC的診斷和規范化治療。血清ProGRP檢測中，腎功能不全可引起ProGRP水平升高，某些腫瘤如結直腸癌、前列腺癌、髓樣甲狀腺癌等也可引起血清ProGRP水平升高。因此，從實驗室信息系統中嚴格篩選健康體檢人群時排除腎功能不全、呼吸系統疾病和各種良惡性腫瘤病史患者。

近年來，越來越多的研究探討成人血清或血漿中ProGRP的參考區間[6-7]，但標本類型不同，檢測方法不同，檢測結果略有差異。首先，對于標本類型的選擇，研究結果表明ProGRP檢測結果不受血清或血漿標本類型的干擾[8]，但血清中ProGRP存在一定程度的降解，受保存條件(溫度和時間)的影響較大[9]，而血漿中ProGRP檢測結果更穩定，因此臨床實驗室中推薦采用血漿標本。但患者聯合檢測肺癌標志物時，常規采集血清標本，如果ProGRP檢測采用血漿標本，必定增加患者標本采集量，因此研究者仍采用血清標本進行ProGRP檢測，但要求血清標本分離后盡快檢測。

另外，檢測方法不同，血清或血漿中ProGRP參考區間不同[10]。YANG等[7]通過羅氏電化學方法發現成人21～<70歲血清ProGRP參考區間為≤53.92 ng/L，而70歲以上人群ProGRP參考區間為ProGRP≤75.69 ng/L。ZHANG等[11]通過雅培化學發光法發現18～<50歲人群血漿ProGRP參考區間為ProGRP≤57.26 ng/L或50歲及以上人群ProGRP≤81.42 ng/L。那么，羅氏電化學發光法與雅培化學發光法ProGRP檢測結果有沒有區別呢？KORSE等[12]通過歐洲和中國多中心研究表明血漿ProGRP檢測結果羅氏與雅培之間具有很好的相關性(相關系數為0.96)，羅氏血清ProGRP參考區間為ProGRP≤66 ng/L，血漿(乙二胺四乙酸抗凝)ProGRP參考區間為ProGRP≤60 ng/L，而雅培血清ProGRP參考區間為ProGRP≤63 ng/L，血漿(乙二胺四乙酸抗凝)ProGRP參考區間為ProGRP≤65 ng/L。本研究采用雅培化學發光法檢測的研究結果與ZHANG等[11]和 YANG等[7]研究結果基本一致。

盡管KORSE等[12]研究發現種族、年齡、性別和吸煙對ProGRP檢測結果無影響，但其研究總人數僅1 010例；而其他多項研究表明血清ProGRP檢測結果與年齡相關[13]，血清或血漿ProGRP檢測結果隨著年齡增加而升高。通過非參數相關分析發現血清ProGRP檢測結果與年齡之間呈正相關(r=0.238，P<0.05)。通過Kruskal-Wallis檢驗發現不同年齡段成人血清ProGRP比較，差異有統計學意義(P<0.05)，其中70歲以下5個年齡段成人ProGRP水平比較，差異無統計學意義(P>0.05)，與YANG等[7]的研究結果一致；ZHANG等[11]研究中以50歲為截點，50歲以上人群共計231例，這可能與不同年齡段人群例數有關，而本研究中50歲以上共計729例。

目前關于血清ProGRP用于診斷SCLC的臨界參考值建立及診斷價值評估的研究很多[14-15]。沈迪等[14]研究發現，當截斷值為57.8 ng/L時，血清ProGRP在診斷SCLC和健康對照者的曲線下面積為0.959(0.944～0.975)，靈敏度為86.4%，特異度為99.3%，本研究ProGRP參考區間上限與其相符。

4 結 論

本研究結果表明，成人18～<70歲血清ProGRP的參考區間為0～57.4 pg/mL、70～≤86歲人群血清ProGRP的參考區間為0～76.2 pg/mL。本研究中也存在一定的局限性，由于健康體檢人群中老年人較少，且各年齡段男女比例不一致，這可能對結果產生影響，因此應加大70歲以上年齡段標本量，另外要注意各年齡段的性別比，這些局限性應在以后的研究中進一步闡明。