結直腸癌肝轉移的K-ras基因表達特點和臨床病理特征分析

陳鵑 王正兵（通訊作者） 高振山 高長春 孟敏 孫樹松

（南京市六合區人民醫院普外科 江蘇 南京 211500）

結直腸癌肝轉移是晚期結腸結直腸癌最常見的遠處轉移之一，相關調查研究[1]發現結直腸癌患者就診時肝轉移發生率就可達15%-25%。K-ras基因作為RAS家族成員之一，被認為是腫瘤啟動基因之一，與惡性腫瘤轉移有密切關聯。本研究通過分析結直腸癌肝轉移K-ras基因突變特點及其與臨床病理特征的相關性，旨在進一步說明結直腸癌肝轉移基因表達特點，因為預后評估提供可靠參考依據。

1.資料和方法

1.1 臨床資料

收集2017年12月－2019年11月在我院治療的103例結直腸癌肝轉移患者，入選和排除標準：①經病理學檢查證實為結直腸癌肝轉移；②既往無抗腫瘤治療史；③臨床資料完整；④知情同意書，自愿參與實驗；⑤排除合并其他轉移、心腦血管、血液疾病等其他疾病者；本研究過程經醫院倫理委員會審查批準。入選患者均接受結直腸癌肝轉移外科手術治療。

1.2 研究方法

1.2.1 獲取病理組織 在結直腸癌肝轉移外科手術過程中，留取原發腫瘤、轉移灶處組織，經甲醛固定、石蠟包埋后切5μm片。

1.2.2 提取樣本組織DNA 選擇癌組織超過60%的蠟塊，常規脫蠟，用蛋白酶K、SDS溶液孵育24h，離心留取石蠟下液體，依據QIAamp DNA FFPF Kit試劑盒說明書提取組織DNA，洗脫DNA后，用紫外分光光度計測定DNA產物中DNA濃度，調至100μg/ml后置于-20℃保存。

1.2.3 PCR反應及SSCP分析 參照文獻[2]制備PCR反應體系，提取PCR反應產物放于瓊脂糖凝膠電泳45min(70V)后，用EB溶液浸泡洗脫，將凝膠板放到紫外投射儀的玻璃板上，加入變性劑上樣緩沖液95℃下反應10min,，置冰盒中10min后，加聚丙烯酰胺凝膠，電泳5min(250V)后,4℃冰箱電泳3h(3W)后，銀染凝膠，DNA清晰顯示后,終止反應。

1.3 統計學分析

數據采用SPSS22.0統計軟件進行統計分析，計數資料采用率（%）表示，進行χ2檢驗，計量資料采用（±s）表示，進行t檢驗，P＜0.05為差異具有統計學意義。

2.結果

2.1 結直腸癌肝轉移K-ras基因表達特點

本研究中K-ras基因突變患者共53例，突變率為51.46%，K-ras基因突變均是單堿基點突變，突變位置為12號密碼子(28例)和13密碼(25例)，突變類型為GGT→GAT突變(18例)、GGT→GTT突變(15例)、GGC→GAC突變(20例)。

2.2 K-ras基因突變與臨床病理特征的關系

統計學分析顯示，直腸癌肝轉移K-ras基因突變與K-ras基因未突變比，年齡、腫瘤分化程度、CA19-9表達，差異存在統計學意義，P＜0.05；而性別、原發腫瘤部位、轉移灶大小、腫瘤分期、組織分型，P＞0.05，差異不存在統計學意義。見表。

表 K-ras基因突變與臨床病理特征差異性分析

3.討論

肝臟作為結直腸癌最主要的血行轉移靶器官之一，結腸癌肝轉移能夠增加結直腸癌死亡風險。隨著基因技術不斷的發展。臨床對于惡性腫瘤基因表達譜研究不斷深入。目前臨床已經證實多種癌基因參與了結直腸癌的轉移過程。K-ras基因是臨床公認的癌變啟動因子之一，能夠參與惡性腫瘤轉移過程。K-ras基因突變時，p21蛋白結構變異，與結合GTP能力下降，GTP酶活性受到抑制，信息轉導作用喪失，細胞進入無節制分裂、增殖狀態，進而出現細胞癌變和轉移。本研究結果顯示，結直腸癌肝轉移患者K-ras基因突變率超過50%，且K-ras基因突變狀態與年齡、腫瘤分化程度、CA19-9表達密切相關。鑒于目前K-ras基因突變和臨床病理特征關系仍存在爭議[3]，本研究樣本較小，仍需進行大樣本研究加以證實。綜上所述，結直腸癌肝轉移患者多存在K-ras基因突變，K-ras基因突變可能與年齡、腫瘤分化程度、CA19-9表達有關，建議臨床進一步深入研究。