紅果樫木葉化學成分研究

閆慧嬌，陳雨潔，李兵，崔莉，劉偉，耿巖玲，王曉*

(1.齊魯工業大學(山東省科學院)山東省分析測試中心 山東省中藥質量控制技術重點實驗室，山東 濟南 250014；2.山東省食品藥品審評認證中心，山東 濟南 250014；3.魯南制藥集團股份有限公司，山東 臨沂 276006)

樫木屬 (Dysoxylum)是楝科 (Meliaceae)楝亞科的一個屬，包括約75種植物，分布于中南半島、印度、印度尼西亞、馬來半島、澳大利亞和新西蘭。我國分布有15種和1個變種，主要發現于云南省、廣東省、海南省、廣西省和臺灣省等地區[1]。樫木屬許多種植物是斐濟、巴布亞新幾內亞及新西蘭等地的傳統藥物，用于治療發燒、出血、驚厥、四肢僵硬、痙攣面部變形等[2]。樫木屬植物次級代謝產物豐富，國內外學者從該屬植物中陸續發現了包括三萜類化合物[3-4]、Limonoids 類化合物[5]、倍半萜類化合物[6]、二萜類化合物[7]、甾體類化合物[8]和生物堿類[9]等在內的化學成分，其中一些具有較好的殺蟲、生長抑制[10-11]、抑菌[12]及針對腫瘤細胞的細胞毒活性[13]。前期從紅果樫木(Dysoxylumbinectariferum)中發現了新穎的活性三萜和甾體類化合物[14-15]。為了進一步系統研究紅果樫木的化學成分，本文應用多種色譜方法從中分離得到3個化合物，并通過波譜學方法和化學方法，鑒定為5, 7-二羥基-2-甲基色原酮(Ⅰ)、濱蒿內酯(Ⅱ)和對羥基苯甲酸甲酯(Ⅲ)。化合物Ⅰ～Ⅲ 均首次從樫木屬植物中分離得到，其結構式見圖1。。

圖1 化合物Ⅰ～Ⅲ 結構式

1 儀器與材料

1.1 實驗儀器

Bruker AVANCE III 400 NMR型核磁共振波譜儀(德國Bruker公司，以TMS為內標)；Agilent 6520型質譜儀(美國Agilent公司)；Agilent 1160 型高效液相色譜儀(配有自動進樣器和DAD檢測器，美國Agilent 公司)；Shimadzu LC-6AD型高效液相色譜儀(日本島津公司)；R201 型旋轉蒸發儀(上海申生科技有限公司)；FA1104 型電子天平(上海精天電子儀器廠)。

硅膠(青島海洋化工)；D101大孔樹脂(滄州寶恩樹脂)；ODS(UniSil 30-120 C18 EC，納微)；Sephadex LH-20 (美國GE Healthcare)；乙醇(分析純，德州恒業化工有限公司)；甲醇、二氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯(分析純，天津市化學試劑廠)；甲酸、乙腈(色譜純，山東禹王試劑有限公司)。

1.2 實驗材料

紅果樫木葉，2018年8月采集于云南西雙版納，并由西雙版納熱帶植物園張順成老師鑒定為楝科樫木屬植物紅果樫木(Dysoxylumbinecteriferum)，葉標本憑證(HG201808L)存放于山東省中藥質量控制技術重點實驗室。

2 方法與結果

2.1 提取與分離

圖2 D1～D6組分TLC圖

2.2 化合物純度檢測

純度檢測條件，采用Agilent 1120 型高效液相色譜儀，色譜柱為納微 Nano-Micro C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，體積流量1.0 mL/min，進樣量10 μL，檢測波長210 nm，以乙腈-0.1%甲酸水溶液為流動相，梯度洗脫參數為0～30 min、10%～100%乙腈。化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ高效液相色譜(high performance liquid chromatography，HPLC)及紫外吸收圖見圖3，檢測結果表明化合物純度均大于95%。

圖3 單體化合物HPLC色譜圖

2.3 結構鑒定

化合物1：白色固體(甲醇)。ESI-MSm/z:192 [M]+，推測其分子式為C10H8O4。1H NMR (DMSO,400 MHz):dH6.32 (1H, d,J= 1.9 Hz, H-8), 6.17 (1H, d,J= 1.9 Hz, H-6), 6.16 (1H, s, H-3), 2.34(3H, s, 2-CH3);13C NMR (DMSO, 100 MHz):dC158.27 (C-2), 108.39 (C-3), 182.18 (C-4), 103.81 (C-4a), 164.77 (C-5), 99.26 (C-6), 168.06 (C-7), 94.20 (C-8), 161.97 (C-8a),20.37 (2-CH3)。1H NMR及13C NMR數據與文獻[16]報道對照基本一致。綜合以上信息，鑒定化合物為5, 7-二羥基-2-甲基色原酮。

化合物2：白色粉末(甲醇)。ESI-MSm/z: 206 [M]+，推測其分子式為C11H10O4。1H NMR (DMSO, 400 MHz):dH6.30 (1H, d,J= 9.4 Hz, H-3), 7.96 (1H, d,J= 9.4 Hz, H-4), 7.26 (1H, s, H-5), 7.07(1H, s, H-8), 3.86 (OCH3), 3.81 (OCH3);13C NMR (DMSO, 100 MHz):dC161.06 (C-2), 109.42 (C-3),144.84 (C-4), 113.12 (C-5), 146.34 (C-6), 149.89 (C-7), 100.51(C-8), 153.02 (C-9), 111.66 (C-10), 56.64 (OCH3), 56.37 (OCH3)。1H NMR及13C NMR與文獻[17]報道對照基本一致。綜合以上信息，鑒定化合物為濱蒿內酯。

化合物3：無色結晶(甲醇)。ESI-MSm/z: 153 [M+H]+，推測其分子式為C8H8O3。1H NMR (DMSO, 400 MHz):dH7.81 (2H, d,J= 8.8 Hz, H-2, 6), 6.85 (2H, d,J= 8.8 Hz, H-3, 5);13C NMR (DMSO, 100 MHz):dC120.68 (C-1), 131.87 (C-2, 6), 115.81 (C-3, 5), 162.44 (C-4), 166.54 (C-7), 52.09(-OCH3)。1H NMR及13C NMR數據與文獻[18]報道對照基本一致。綜合以上信息，鑒定化合物為對羥基苯甲酸甲酯。

3 結論

樫木屬植物以富含各種類型的三萜化合物為特征[3-4]，本文通過對其分離，發現了色原酮類化合物5,7-二羥基-2-甲基色原酮、香豆素類化合物濱蒿內酯和苯甲酸類化合物對羥基苯甲酸甲酯，豐富了樫木屬植物次級代謝產物類型。色原酮類化合物具有抗氧化、抗炎等活性[19]，對羥基苯甲酸甲酯具有一定抗菌活性，濱蒿內酯具有保肝利膽、抗腫瘤等[20-21]活性，也為解釋樫木屬植物藥用物質基礎提供了一定參考。