小承氣湯、厚樸三物湯、厚樸大黃湯對陽明腑實證模型大鼠胃腸動力的影響

王璐穎，張萌，焦圣軍，張巖，張詔

（山東中醫藥大學中醫學院，山東濟南 250355）

小承氣湯、厚樸三物湯、厚樸大黃湯均為東漢張仲景所創經方，由大黃、枳實和厚樸組成，藥味相同但劑量各異，其主治病證各有不同。小承氣湯出自《傷寒論》，重用大黃為君，輕下熱結，除滿消痞，意在蕩滌實熱積滯，主治輕證熱結便秘。厚樸三物湯與厚樸大黃湯均出自《金匱要略》，厚樸三物湯重用厚樸行氣消積為君藥，意在除滿，主治實熱內積，氣滯不行，腹滿脹痛，大便不通；厚樸大黃湯則以大黃、厚樸共為君藥，用量相近，主治水飲停胸、支飲胸滿者。有研究表明，小承氣湯瀉下作用較強，厚樸三物湯理氣效果較好，厚樸大黃湯止咳化痰作用明顯[1]。配伍后的厚樸三物湯提高了大黃、枳實、厚樸各藥的推進作用，3方中以厚樸三物湯對小腸平滑肌影響最大[2]。既往文獻研究中，對小承氣湯類方中3味藥物的配比用量并未有統一標準，而本課題組嚴格遵照仲景原方原量及煎服方法，探討小承氣湯類方對陽明腑實證胃腸動力學方面的影響，以期為經方的臨床診療提供科學依據。現將研究結果報道如下。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 SPF級Wistar大鼠110只，雄性，體質量180～220 g，由濟南朋悅實驗動物繁育有限公司提供，動物質量合格證號：SCXK（魯）20140007。實驗動物飼養及觀察在山東中醫藥大學實驗中心（SPF級）進行。

1.2 藥物及制備 ①附子、干姜、肉桂（購自山東中醫藥大學中魯醫院），以1∶1∶1的比例制成水煎劑，將藥液濃縮至2 g/mL，4℃保存。②參照《傷寒論》及《金匱要略》所述，依照仲景原方原量，大黃、厚樸、枳實3味中藥比例分別為小承氣湯（4兩∶2兩∶3枚）、厚樸三物湯（4兩∶8兩∶5枚）及厚樸大黃湯（6兩∶1尺∶4枚），枳實1枚=14.570 9 g，1兩=15 g，1尺=45.75 g，故小承氣湯名藥現代用量為：大黃60 g，炙厚樸30 g，炙枳實43.71 g；厚樸三物湯各藥現代用量為：大黃60 g，厚樸120 g，枳實72.85 g；厚樸大黃湯各藥現代用量為：大黃90 g，厚樸45.75 g，枳實58.28 g。制備為質量濃度1 g/mL水煎劑60 mL，4℃保存。

1.3 試劑與儀器 P物質（SP）酶聯免疫吸附分析（ELISA）試劑盒（山東摩貝生物科技有限公司）；大腸桿菌內毒素（美國Sigma公司）；葡聚糖藍-2000（上海源葉公司）；間苯三酚試劑（南京建成生物工程研究所）。CT15RT離心機（北京Techcomp公司）；iMARK酶標儀（美國Bio-Rad公司）；Forma 900 series超低溫冰箱（美國Thermo公司）；華德利PWT-P42恒溫箱（合肥華德利公司）。

1.4 動物分組 取Wistar大鼠110只隨機分為空白組，模型組，厚樸三物湯高、中、低劑量組，小承氣湯組高、中、低劑量組，厚樸大黃湯高、中、低劑量組，共11組，每組10只。

1.5 動物造模及給藥 參照文獻[3]造模法復制大鼠陽明腑實證模型。除空白組外，用附子、干姜、肉桂水煎劑，按20 g·kg-1·d-1大鼠體質量給予模型組及治療組灌胃，空白組灌胃等量蒸餾水，連續12 d；然后，禁食不禁水12 h，將大鼠自身糞便制成100 g/L的混懸液，給予模型組和各治療組大鼠2 mL灌胃，每天2次，連續2 d，空白組灌胃等量蒸餾水；按40 EU每100 g體質量于實驗的第15天對模型組和治療組進行大腸桿菌內毒素腹腔注射，空白組注射等量生理鹽水。治療組于注射大腸桿菌內毒素后，分別進行給藥治療：厚樸三物湯、小承氣湯、厚樸大黃湯高、中、低劑量組分別給予大鼠2、1、0.5 g/mL的生藥量灌胃，每日1次，連續給藥2周，模型組及空白組給予灌胃等量生理鹽水。

1.6 指標檢測與方法

1.6.1 間苯三酚法測定血清D-木糖含量 取大鼠血清樣本30 μL進行測定。空白管中放置0.03 mL蒸餾水，標準管中放置0.03 mL 1.33 mmol/L D-木糖標準應用液，測定管中放置0.03 mL待測樣本，3種管內均加入3 mL間苯三酚。混勻后，各管同時放入100℃沸水中煮沸準4 min，取出立即放冰水中冷卻；再混勻，554 nm波長，水調零比色，測各管吸光度[D（λ）]值，計算血清D-木糖含量。D-木糖計算公式：D-木糖含量[（ρ/mg·L-1）]=[測定管D（λ）值-測定空白管D（λ）值]/[（標準管D（λ）值-試劑空白管D（λ）值]× 標準管濃度（1.33 mmol·L-1）×樣本測定前稀釋倍數×150。

1.6.2 ELISA法檢測大鼠血清SP含量變化 具體步驟按照ELISA試劑盒說明書進行測定。樣品自-80℃取出，冰上解凍。取出盒子，平衡至室溫（＞30 min），提前配制好標準品、生物素標記抗體工作液、辣根過氧化氫酶標記親和素工作液和洗滌緩沖液。除空白孔外，每孔加100 μL樣品或標準品，覆上板貼，37℃溫育2h。棄去液體，甩干，不用洗滌。除空白孔外，每孔加入100 μL生物素標記抗體工作液，覆上板貼，37℃溫育1 h。洗板3次，每孔200 μL洗滌緩沖液，每次2 min。除空白孔外，每孔加入辣根過氧化氫酶標記親和素工作液100 μL。覆上板貼，37℃溫育1 h。洗板5次，每孔200 μL洗滌緩沖液，每次2 min。每孔加入顯色底物90 μL，37℃避光孵育15～30 min。每孔加入終止液50 μL，混勻后即刻測量D（450 nm）值，繪制標準曲線，換算出相應的質量濃度[ρ/（pg·mL-1）]。

1.6.3 大鼠腸道動力功能檢測 提前禁食24 h后，給予0.4 mL葡聚糖藍-2000灌胃大鼠。30 min后麻醉各組大鼠，取出幽門括約肌至回腸末端小腸，用生理鹽水潤濕后置于平板上，不加牽引力使其平鋪，分別測量幽門括約肌至色素最前端及幽門括約肌至盲腸距離，計算小腸推進率。小腸推進率（p/%）=小腸內色素推進距離（l/cm）/全小腸長度（l/cm）×100%。

1.6.4 空腸組織病理變化 實驗結束后，剖取空腸組織，經40 g/L多聚甲醛溶液固定，常規取材，脫水，石蠟包埋，制片，蘇木素—伊紅（HE）染色，在光學顯微鏡下觀察并描述空腸組織病理變化，對需描述部位進行拍照。

1.7 統計方法 采用SPSS 21.0統計軟件進行數據處理，計量資料以均數±標準差(-x±s)表示，多組間均數比較采用單因素方差分析。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組大鼠血清D-木糖、SP含量及小腸推進率比較 表1結果顯示：與空白組比較，模型組D-木糖含量降低（P＜0.05）；與模型組比較，用藥后各治療組D-木糖含量均升高（P＜0.05），其中以厚樸三物湯組效果最好。說明陽明腑實證大鼠腸道吸收能力減弱，經藥物治療后腸道吸收功能得到恢復，其中厚樸三物湯、厚樸大黃湯、小承氣湯3方比較，厚樸三物湯組的腸道吸收能力最好。

與空白組比較，模型組大鼠血清SP含量顯著降低（P＜0.05）；與模型組比較，用藥后治療組（除小承氣湯中、低劑量組）SP含量均高于模型組（P＜0.05），其中厚樸三物湯組SP含量接近或高于空白組。說明3方均可改善胃腸道激素水平，厚樸三物湯組效果最明顯。

與空白組比較，模型組小腸推進率顯著降低（P＜0.05）；與模型組比較，用藥后各治療組小腸推進率均升高（P＜0.05），其中以厚樸三物湯各劑量組效果較好。說明陽明腑實證大鼠腸道運動功能減弱，經3方藥物治療后大鼠腸道推進功能均得到改善，其中厚樸三物湯作用最強。

表1 各組血清D-木糖、SP含量及小腸推進率比較Table 1 Comparison of serum D-xylose and SP content and small intestine propulsion rate in various groups (-x±s)

圖1 各組大鼠空腸組織病理變化（HE，×200）Figure 1 Comparison of pathological changes of jejunum tissues in various groups（by HE staining，×200）

2.2 空腸組織中Cajal間質細胞（ICC）病理形態圖1結果顯示：模型組ICC數目較空白組增多，呈灶狀分布，穿插于平滑肌內及肌間；厚樸大黃湯組ICC數目較空白組和模型組增多，呈灶性或巢狀分布，可見間質血管增生；厚樸三物湯組ICC數目和分布與空白組相似；小承氣湯組ICC數目較厚樸三物湯組增多，呈巢狀廣泛分布，間質血管增生。提示厚樸三物湯組ICC數目與結構改變與空白組相似，胃腸動力功能最好。

3 討論

陽明腑證，是指陽明經邪熱不解，由經入腑，或熱自內發，與腸中糟粕互結，阻塞腸道所表現出的臨床證候，又稱陽明腑實證。臨床證候以“痞、滿、燥、實”為其特點。《傷寒論》論述陽明病提綱：“陽明之為病，胃家實是也。”所謂胃家實，是指邪熱，尤以陽明之熱入胃，與腸中糟粕相合化燥而言[4]。有學者認為，“胃家實”之本質即為胃腸功能失調而致全身炎癥反應綜合征[5]。腸道屏障功能損傷是陽明腑實證發生的病理基礎，陽明腑實證患者存在著腸道屏障功能的損傷[6]。厚樸三物湯、厚樸大黃湯、小承氣湯3方同用大黃、枳實、厚樸3味藥。從藥物組成的藥效學分析，大黃是中醫臨床中得到廣泛認同的瀉下藥，已知大黃有效成分結合型蔥醌類衍生物[7]為瀉下功效的主要作用物質。枳實具有調節胃腸運動、抗菌、鎮痛、升壓強心、抗氧化等作用[8]。有研究發現，單味藥厚樸有明顯促進小鼠胃排空作用[9]，厚樸提取物及厚樸酚可提高小鼠胃排空率及小腸推進率[10]。本研究復制大鼠陽明腑實證模型，觀察3方對大鼠空腸組織形態、血清SP水平、腸道功能以及血清D-木糖含量變化的影響，從而探討3方對陽明腑實證大鼠胃腸動力的影響。

D-木糖是一種戊糖，口服后經小腸吸收，在體內不被肝臟代謝，經腎臟排出。因此，D-木糖排泄率是反映小腸吸收功能的指標之一[11]，亦是診斷脾虛泄瀉的重要指標之一[12]。羅明等[12]運用麥粒灸治療脾虛泄瀉，D-木糖含量高的組別腸道功能明顯優于其他各組，且脾虛泄瀉癥狀改善最為明顯。本研究結果顯示，模型組D-木糖含量較空白組降低，用藥后各治療組均升高，以厚樸三物湯組效果最好，說明陽明腑實證大鼠腸道吸收能力減弱，3方均能改善大鼠腸道吸收功能，且厚樸三物湯作用最明顯。

SP是存在于中樞神經系統和胃腸系統的腦腸肽，也是連接中樞系統和免疫系統的信號傳導分子。在腸神經系統中，SP物質作為一種神經遞質，具有參與痛覺信息傳遞，增加胃腸動力，加快結腸推進，刺激小腸和結腸分泌水和電解質，增加血管滲透性，同時促進肥大細胞脫顆粒的作用[13]。本研究結果顯示，模型組血清SP含量顯著降低，用藥后治療組普遍高于模型組，其中厚樸三物湯組SP含量接近或高于空白組。說明陽明腑空證大鼠胃腸動力不足，內臟敏感性降低，厚樸三物湯可改善胃腸道激素水平，其促進胃腸動力效果最佳。

小腸推進率可直觀反映腸道動力功能。本研究結果顯示，模型組小腸推進率降低，各治療組小腸推進率均升高，其中以厚樸三物湯各劑量組最高。說明陽明腑實證大鼠腸道運動功能減弱，厚樸三物湯的腸道推進功能最強。

ICC作為胃腸道慢波的起搏者和傳導者，參與胃腸道神經遞質的信號傳導，是整個胃腸道電活動的結構基礎及平滑肌收縮的動力。其數量減少和結構的破壞是胃腸動力障礙的重要原因之一，近年來已成為胃腸動力學領域一個新的研究方向。現研究發現許多胃腸運動紊亂性疾病的胃腸組織內都存在ICC的改變。本研究結果顯示：模型組ICC數目較空白組增多，呈灶狀分布，穿插于平滑肌內及肌間；厚樸大黃湯組與小承氣湯組ICC數目增多，呈灶性或巢狀分布，可見間質血管增生；厚樸三物湯組ICC數目和分布與空白組相似，均可見肌間ICC分布在肌間神經叢周圍，細胞不規則，核圓形，核周空泡；肌內ICC細長，核扁橢圓形，長軸與平滑肌平行。提示厚樸三物湯組ICC數目與結構改變與空白組相似，胃腸功能破壞程度最小，胃腸道電活動及平滑肌收縮的動力趨于正常。

厚樸三物湯、厚樸大黃湯、小承氣湯3方均由大黃、枳實、厚樸3味藥物組成，劑量配比及煎服方法不同，臨床應用亦有所不同。3方在促進胃腸動力，行氣通便、泄下除滿等方面均有一定的臨床療效。本研究依照仲景原方原量及煎服方法，觀察小承氣湯、厚樸三物湯、厚樸大黃湯對陽明腑實證模型大鼠胃腸動力的影響，通過對腸道動力、激素水平等方面的測定，認為厚樸三物湯在改善陽明腑實證大鼠胃腸動力功能紊亂方面療效最佳。