熊果酸抑制動脈粥樣硬化巨噬細胞吞噬脂質作用

王波 余珊 俞華 王磊 謝力 劉亞彬 陶劍 寧海濤 賈靜

(1昆明學院醫學院，云南 昆明 650031；2昆明市第一人民醫院)

動脈粥樣硬化(AS)是心血管疾病的主要病理基礎,其引起的血栓形成和斑塊破裂可誘發嚴重的心血管疾病,如冠心病、心肌梗死等。近年來分子生物學及AS治療學的進步使AS從不治到可治，但高熱量、高飽和脂肪酸食物攝入過多及缺乏體力活動等不良生活方式促使AS發病率和死亡率持續上升，對其進行有效地防治尤為重要。研究發現熊果酸(UA)具有抗AS的作用，且安全，不良反應小〔1〕。UA又名烏索酸、烏蘇酸是一種存在于多科植物中的五環三萜類化合物，分子式為C30H48O3。UA在自然界中分布廣泛，常以游離或結合成糖苷的形式存在于山楂、白花蛇舌草、女貞子、車前草、夏枯草、杜鵑花、連翹和苦丁茶科熊果的葉、果實等植物中，其抗腫瘤、抗AS、降血脂、降低血糖、保肝、抗菌、抗炎、抗病毒、抗氧化、鎮靜和安定等藥理作用已被證實，且安全和不良反應小，作為一種高效低毒的多用途新藥，被國內外學者普遍關注〔2～8〕。本研究旨在觀察UA在AS形成過程中對巨噬細胞吞噬脂質形成泡沫細胞的影響，并對其作用機制進行探討。

1 材料與方法

1.1實驗動物及分組 本實驗選用40只8周齡、體重200～250 g的健康Wistar雌性大鼠，飼養于重慶醫科大學動物實驗中心。飼養環境照明12 h，溫度保持為(22±1)℃，濕度保持為(60±5)%。AS造模分為兩組：隨機選用20只Wistar雌性大鼠作為干預治療組，剩余20只Wistar雌性大鼠作為模型組。

1.2主要試劑及儀器 UA粉劑選用成都健騰生物技術有限公司產品，其純度>95%，用二甲基亞砜(DMSO)溶解，并調整 DMSO終濃度為0.06%。奧林巴斯顯微鏡、熒光顯微鏡、徠卡密閉式全自動組織脫水機、組織包埋機、恒溫冰凍切片機、恒溫展片臺、病理圖像分析儀、低溫冰箱、全自動酶標儀、全自動生化分析儀及臺式低溫冷凍離心機。

1.3方法

1.3.1造模 采用Wistar大鼠作為研究對象，通過高脂飼養加維生素D喂養的方法建立AS模型(n=20),10 w后對兩組Wistar大鼠取血測定血清總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C),并取損傷側頸動脈行HE染色制作病理切片，觀察巨噬細胞吞噬脂質形成泡沫細胞的病理學變化，檢測動物模型建立是否成功。

1.3.2血生化分析 在第10周末處死Wistar大鼠收集血清樣本，采用全自動血生化分析儀檢測血清TG、TC、LDL-C和HDL-C。

1.3.3標本采集及形態學染色 在第10周末，將各組Wistar大鼠麻醉后處死，取出右側股動脈近心端1 cm經等滲生理鹽水灌洗后，立即置于4℃多聚甲醛溶液中，常溫固定12 h后，進行脫水和石蠟包埋，沿橫斷面行連續切片(5 μm/片)，進行HE染色。采用Image-ProPlus6.0圖像分析軟件分析圖片。

1.4統計學方法 采用SPSS17.0軟件進行t及χ2檢驗。

2 結 果

2.1兩組血生化指標比較 與模型組與給藥前比較組比較，干預治療組給藥后TC、TG、HDL-C和LDL-C顯著降低(P<0.05)，差異有統計學意義(P<0.05)，見表1。

2.2兩組細胞學檢測比較 干預治療組給藥前和模型組大鼠股動脈內膜明顯增厚，兩組均觀察到有脂質沉積、泡沫細胞、少量紅細胞和纖維組織增生，內膜壞死脫落，伴有炎性細胞浸潤。給藥后干預治療組大鼠股動脈內膜纖維細胞減少甚至消失，平滑肌增生，沉積脂質減少，單核巨噬細胞增生(圖1)。

表1 兩組血生化指標比較

與干預治療組治療后比較：1)P<0.05

圖1 干預治療組給藥前、后股動脈細胞學檢測(HE)

3 討 論

UA又名烏索酸、烏蘇酸是一種存在于多科植物中的五環三萜類化合物，分子式為C30H48O3，分子量456.68。熊果酸為山楂、白花蛇舌草、女貞子、車前草、夏枯草、杜鵑花、連翹和苦丁茶科熊果的葉、果實等植物的提取物，其抗腫瘤、抗動脈粥樣硬化、降血脂等藥理作用已被證實，且安全和不良反應小〔9～15〕。

高脂導致大量脂質沉積于血管壁，引發巨噬細胞的聚集，巨噬細胞吞噬脂質后，變成泡沫細胞進一步介導血管壁的損傷，降低血清血脂水平，可以抑制損傷斑塊中巨噬細胞的聚集，減輕AS〔16～20〕。本研究顯示UA能夠降低高脂飲食大鼠血清TC、TG和LDL-C水平，提示其調脂作用可能成為其抗AS的一部分。同時UA對脂質沉積和泡沫細胞形成有一定的抑制作用，促進平滑肌增生，但血管壁仍然有少量脂質沉積、炎性細胞和泡沫細胞，這可能與本研究給藥時間較短有關。研究證明，UA可以抑制脂質沉積，促進平滑肌增生、血管修復和單核巨噬細胞增生，而這些單核巨噬細胞在AS中發揮著相當的作用，在AS中UA是否可以抑制這些炎癥發生，降低內膜損傷將在以后的研究中進一步探討。