LC-MS/MS法測(cè)定玉米植株和土壤中磺?；锹埩袅?/h1>
2019-12-18 01:44:06高宗軍李瑞娟李如美
現(xiàn)代農(nóng)藥 2019年6期
高宗軍，李瑞娟，戴 爭(zhēng)，李如美
（山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所山東省植物病毒學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，濟(jì)南 250100）
磺?；锹。╯ulfosulfuron）是美國(guó)孟山都公司和日本武田公司共同開(kāi)發(fā)的磺酰脲類(lèi)除草劑，于1997年上市，2002年在歐盟獲得登記[1-2]。其作用靶標(biāo)是乙酰乳酸合成酶（ALS），可用于小麥田防除野燕麥、早熟禾等一年生和多年生禾本科和部分闊葉雜草，對(duì)小麥安全，但對(duì)后茬敏感作物玉米、水稻有生長(zhǎng)抑制作用[3-4]。因此，磺酰磺隆在農(nóng)田環(huán)境中的持久性和安全性備受關(guān)注。
目前，有關(guān)磺酰磺隆的研究主要集中在室內(nèi)生物活性測(cè)定、田間藥效和持效期、高效液相色譜法定量檢測(cè)、酶聯(lián)免疫吸附分析等方面[3-6]。利用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS），對(duì)玉米植株和土壤中磺?；锹埩袅康亩繖z測(cè)分析未見(jiàn)報(bào)道。本文采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS），檢測(cè)玉米植株和土壤中磺?；锹〉臍埩袅浚瑸榛酋；锹≡谵r(nóng)田環(huán)境中的使用提供試驗(yàn)依據(jù)。
1 材料與方法
1.1 儀器和試劑
高效液相色譜-質(zhì)譜儀：Agilent1260-6460Eclipse plus C18色譜柱（50 mm×3.0 mm，2.7 μm），安捷倫科技有限公司；Z326K高速冷凍離心機(jī)，德國(guó)哈默公司；SQP百分之一電子天平，BSA224S-CW萬(wàn)分之一電子天平，賽多利斯科學(xué)儀器有限公司。
95%磺?；锹?biāo)準(zhǔn)品，德國(guó)Dr.Ehrenstorfer公司；乙腈（色譜純），山東禹王和天下新材料有限公司；甲苯（色譜純），國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；甲醇（色譜純），賽默飛世爾科技有限公司；純水，屈臣氏有限公司。
1.2 磺?；锹?biāo)準(zhǔn)溶液的制備
用電子天平稱(chēng)取95%磺?；锹?biāo)準(zhǔn)品0.010 5 g于100 mL燒杯中，用2 mL二氯甲烷溶解后，加入甲醇稀釋定容至100 mL，即得100 mg/L標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用甲醇梯度稀釋配制5、10、50、100、200 μg/L的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，待用。
1.3 試驗(yàn)樣品的前處理
玉米植株樣品：稱(chēng)取待測(cè)玉米植株勻漿液5.00 g，置于50 mL塑料離心管中，加入10 mL乙腈和2.00 g NaCl，渦旋超聲10 min后加入5.00 g無(wú)水Na2SO4，渦旋振蕩30 s，5 000 r/min離心3 min；上清液置于雞心瓶中，旋蒸，用5 mL甲苯-乙腈（體積比1∶3）定容，同時(shí)用5 mL甲苯-乙腈（體積比1∶3）對(duì)Bond Elut Carbon固相萃取柱進(jìn)行2次活化處理；將Bond Elut Carbon固相萃取柱置于雞心瓶?jī)?nèi)，待凈化樣品經(jīng)渦旋振蕩器渦旋后轉(zhuǎn)移至Bond Elut Carbon固相萃取柱，靜置過(guò)濾5min后，用5mL甲苯-乙腈（體積比1∶3）洗脫2次；旋蒸濃縮近干，用甲醇定容至5 mL容量瓶，過(guò)0.22 μm濾膜，待測(cè)。
土壤樣品：稱(chēng)取30.00 g土壤于250 mL錐形瓶中，依次加入40、40、20 mL乙腈，各超聲1次，每次超聲15 min；取上清液經(jīng)漏斗轉(zhuǎn)移至100 mL的具塞量筒，重復(fù)3次；過(guò)濾合并3次離心所得上清液，向具塞量筒內(nèi)加入7.00 g無(wú)水NaCl，振蕩2 min，靜置1 min，再振蕩1 min，靜置40 min。取20 mL提取液于雞心瓶中，旋蒸濃縮近干，用甲醇定容至5 mL容量瓶，過(guò)0.22 μm濾膜，待測(cè)。
1.4 色譜檢測(cè)條件
離子源為電噴霧離子源ESI；掃描方式為正離子源；毛細(xì)管電壓4 kV（-）；脫溶劑溫度300℃；脫溶劑氣流量8 L/min；霧化器壓力0.24 MPa?；酋；锹z測(cè)方式為多重反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM），具體參數(shù)見(jiàn)表1。
表1MRM掃描參數(shù)
進(jìn)樣體積5 μL；流速0.3 mL/min；柱溫35℃；采用1 mmol/L乙酸銨＋0.1%甲酸（A）和1 mmol/L乙酸銨＋0.1%甲酸甲醇（B）組成的流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫。洗脫程序：0～1 min，90%→60%（A）、10%→40%（B）；1～3 min，60%→10%（A）、40%→90%（B）；3～6 min，10%（A）、90%（B）；6～6.01 min，10% →90%（A）、90%→10%（B）；6.01～10 min，90%（A）、10%（B）。
1.5 添加回收率的測(cè)定
稱(chēng)取玉米植株樣品5.00 g，分別添加磺?；锹?biāo)準(zhǔn)溶液，使磺?；锹√砑訚舛葹?、10、100 μg/kg，每個(gè)處理設(shè)5次重復(fù)。按照上述提取、凈化步驟和儀器條件測(cè)定樣品中磺?；锹〉暮浚?jì)算添加回收率。
稱(chēng)取土壤樣品30.00 g，分別添加磺?；锹?biāo)準(zhǔn)溶液，使磺?；锹√砑訚舛葹?、10、100 μg/kg，每個(gè)處理設(shè)5次重復(fù)。按照上述提取、凈化步驟和儀器條件測(cè)定樣品中磺酰磺隆的含量，計(jì)算添加回收率。
2 結(jié)果與分析
2.1 方法的線性關(guān)系、靈敏度
按照上述儀器條件，對(duì)5、10、50、100、200 μg/L的磺酰磺隆系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液進(jìn)行豐度測(cè)定，以磺?；锹≠|(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，磺?；锹∩V豐度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖1）。其線性回歸方程為y=2 746.8x＋2 519.8（R2=0.994 4）。結(jié)果表明，在5～200 μg/L范圍內(nèi)，磺?；锹∩V豐度與進(jìn)樣質(zhì)量濃度之間線性關(guān)系良好。儀器對(duì)磺酰磺隆的最小檢出量（LOD）為0.3 μg/L，本試驗(yàn)中磺酰磺隆在玉米植株和土壤中的最低檢測(cè)濃度（LOQ）均為5 μg/kg，保留時(shí)間為5.01 min。
圖1 磺?；锹?biāo)準(zhǔn)曲線
2.2 方法的準(zhǔn)確度、精密度
添加回收率測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。在5、10、100 μg/kg添加水平下，磺酰磺隆在玉米植株中的平均回收率為94.48%～96.92%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.42%～3.60%。
磺酰磺隆在土壤中的平均回收率為93.96%～95.73%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.99%～3.28%。方法的準(zhǔn)確度和精密度滿(mǎn)足試驗(yàn)質(zhì)量控制要求。
表2 玉米植株和土壤中磺?；锹〉奶砑踊厥章?/p>
3 結(jié)論
利用LC-MS/MS法測(cè)定玉米植株和土壤中磺?；锹埩袅?，準(zhǔn)確度、精密度和靈敏度較高，線性關(guān)系良好，具有簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確及分離效果好的優(yōu)點(diǎn)，符合磺?；锹《糠治鲆?。
高宗軍，李瑞娟，戴 爭(zhēng)，李如美
（山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所山東省植物病毒學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，濟(jì)南 250100）
磺?；锹。╯ulfosulfuron）是美國(guó)孟山都公司和日本武田公司共同開(kāi)發(fā)的磺酰脲類(lèi)除草劑，于1997年上市，2002年在歐盟獲得登記[1-2]。其作用靶標(biāo)是乙酰乳酸合成酶（ALS），可用于小麥田防除野燕麥、早熟禾等一年生和多年生禾本科和部分闊葉雜草，對(duì)小麥安全，但對(duì)后茬敏感作物玉米、水稻有生長(zhǎng)抑制作用[3-4]。因此，磺酰磺隆在農(nóng)田環(huán)境中的持久性和安全性備受關(guān)注。
目前，有關(guān)磺酰磺隆的研究主要集中在室內(nèi)生物活性測(cè)定、田間藥效和持效期、高效液相色譜法定量檢測(cè)、酶聯(lián)免疫吸附分析等方面[3-6]。利用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS），對(duì)玉米植株和土壤中磺?；锹埩袅康亩繖z測(cè)分析未見(jiàn)報(bào)道。本文采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS），檢測(cè)玉米植株和土壤中磺?；锹〉臍埩袅浚瑸榛酋；锹≡谵r(nóng)田環(huán)境中的使用提供試驗(yàn)依據(jù)。
1 材料與方法
1.1 儀器和試劑
高效液相色譜-質(zhì)譜儀：Agilent1260-6460Eclipse plus C18色譜柱（50 mm×3.0 mm，2.7 μm），安捷倫科技有限公司；Z326K高速冷凍離心機(jī)，德國(guó)哈默公司；SQP百分之一電子天平，BSA224S-CW萬(wàn)分之一電子天平，賽多利斯科學(xué)儀器有限公司。
95%磺?；锹?biāo)準(zhǔn)品，德國(guó)Dr.Ehrenstorfer公司；乙腈（色譜純），山東禹王和天下新材料有限公司；甲苯（色譜純），國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；甲醇（色譜純），賽默飛世爾科技有限公司；純水，屈臣氏有限公司。
1.2 磺?；锹?biāo)準(zhǔn)溶液的制備
用電子天平稱(chēng)取95%磺?；锹?biāo)準(zhǔn)品0.010 5 g于100 mL燒杯中，用2 mL二氯甲烷溶解后，加入甲醇稀釋定容至100 mL，即得100 mg/L標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用甲醇梯度稀釋配制5、10、50、100、200 μg/L的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，待用。
1.3 試驗(yàn)樣品的前處理
玉米植株樣品：稱(chēng)取待測(cè)玉米植株勻漿液5.00 g，置于50 mL塑料離心管中，加入10 mL乙腈和2.00 g NaCl，渦旋超聲10 min后加入5.00 g無(wú)水Na2SO4，渦旋振蕩30 s，5 000 r/min離心3 min；上清液置于雞心瓶中，旋蒸，用5 mL甲苯-乙腈（體積比1∶3）定容，同時(shí)用5 mL甲苯-乙腈（體積比1∶3）對(duì)Bond Elut Carbon固相萃取柱進(jìn)行2次活化處理；將Bond Elut Carbon固相萃取柱置于雞心瓶?jī)?nèi)，待凈化樣品經(jīng)渦旋振蕩器渦旋后轉(zhuǎn)移至Bond Elut Carbon固相萃取柱，靜置過(guò)濾5min后，用5mL甲苯-乙腈（體積比1∶3）洗脫2次；旋蒸濃縮近干，用甲醇定容至5 mL容量瓶，過(guò)0.22 μm濾膜，待測(cè)。
土壤樣品：稱(chēng)取30.00 g土壤于250 mL錐形瓶中，依次加入40、40、20 mL乙腈，各超聲1次，每次超聲15 min；取上清液經(jīng)漏斗轉(zhuǎn)移至100 mL的具塞量筒，重復(fù)3次；過(guò)濾合并3次離心所得上清液，向具塞量筒內(nèi)加入7.00 g無(wú)水NaCl，振蕩2 min，靜置1 min，再振蕩1 min，靜置40 min。取20 mL提取液于雞心瓶中，旋蒸濃縮近干，用甲醇定容至5 mL容量瓶，過(guò)0.22 μm濾膜，待測(cè)。
1.4 色譜檢測(cè)條件
離子源為電噴霧離子源ESI；掃描方式為正離子源；毛細(xì)管電壓4 kV（-）；脫溶劑溫度300℃；脫溶劑氣流量8 L/min；霧化器壓力0.24 MPa?；酋；锹z測(cè)方式為多重反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM），具體參數(shù)見(jiàn)表1。
表1MRM掃描參數(shù)
進(jìn)樣體積5 μL；流速0.3 mL/min；柱溫35℃；采用1 mmol/L乙酸銨＋0.1%甲酸（A）和1 mmol/L乙酸銨＋0.1%甲酸甲醇（B）組成的流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫。洗脫程序：0～1 min，90%→60%（A）、10%→40%（B）；1～3 min，60%→10%（A）、40%→90%（B）；3～6 min，10%（A）、90%（B）；6～6.01 min，10% →90%（A）、90%→10%（B）；6.01～10 min，90%（A）、10%（B）。
1.5 添加回收率的測(cè)定
稱(chēng)取玉米植株樣品5.00 g，分別添加磺?；锹?biāo)準(zhǔn)溶液，使磺?；锹√砑訚舛葹?、10、100 μg/kg，每個(gè)處理設(shè)5次重復(fù)。按照上述提取、凈化步驟和儀器條件測(cè)定樣品中磺?；锹〉暮浚?jì)算添加回收率。
稱(chēng)取土壤樣品30.00 g，分別添加磺?；锹?biāo)準(zhǔn)溶液，使磺?；锹√砑訚舛葹?、10、100 μg/kg，每個(gè)處理設(shè)5次重復(fù)。按照上述提取、凈化步驟和儀器條件測(cè)定樣品中磺酰磺隆的含量，計(jì)算添加回收率。
2 結(jié)果與分析
2.1 方法的線性關(guān)系、靈敏度
按照上述儀器條件，對(duì)5、10、50、100、200 μg/L的磺酰磺隆系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液進(jìn)行豐度測(cè)定，以磺?；锹≠|(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，磺?；锹∩V豐度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖1）。其線性回歸方程為y=2 746.8x＋2 519.8（R2=0.994 4）。結(jié)果表明，在5～200 μg/L范圍內(nèi)，磺?；锹∩V豐度與進(jìn)樣質(zhì)量濃度之間線性關(guān)系良好。儀器對(duì)磺酰磺隆的最小檢出量（LOD）為0.3 μg/L，本試驗(yàn)中磺酰磺隆在玉米植株和土壤中的最低檢測(cè)濃度（LOQ）均為5 μg/kg，保留時(shí)間為5.01 min。
圖1 磺?；锹?biāo)準(zhǔn)曲線
2.2 方法的準(zhǔn)確度、精密度
添加回收率測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。在5、10、100 μg/kg添加水平下，磺酰磺隆在玉米植株中的平均回收率為94.48%～96.92%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.42%～3.60%。
磺酰磺隆在土壤中的平均回收率為93.96%～95.73%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.99%～3.28%。方法的準(zhǔn)確度和精密度滿(mǎn)足試驗(yàn)質(zhì)量控制要求。
表2 玉米植株和土壤中磺?；锹〉奶砑踊厥章?/p>
3 結(jié)論
利用LC-MS/MS法測(cè)定玉米植株和土壤中磺?；锹埩袅?，準(zhǔn)確度、精密度和靈敏度較高，線性關(guān)系良好，具有簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確及分離效果好的優(yōu)點(diǎn)，符合磺?；锹《糠治鲆?。
