HPLC法測(cè)定助消膏中桉油精的含量

班騰敏　毛建國(guó)

摘 要：目的： 采用高效液相色譜法（HPLC）建立助消膏桉油精含量測(cè)定的質(zhì)量控制方法。方法：采用C18 4.6×150mm色譜柱，經(jīng)過(guò)試驗(yàn)以乙腈-水（64∶36）為流動(dòng)相，流速1.0ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為203nm，柱溫為25℃。結(jié)果：桉油精在0.218mg/ml～2.18mg/ml范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系，y=1×107x-65561（r2=0.9999）。定量和檢測(cè)分別為1.33μg/ml和0.4μg/ml。回收率為99.44%，RSD值為0.76%，回收率良好。樣品中桉油精含量平均值為33.40mg/g。結(jié)論：該方法科學(xué)、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，能有效控制助消膏中桉油精含量測(cè)定的質(zhì)量。

關(guān)鍵詞：HPLC 桉油精 助消膏

中圖分類號(hào)：R284文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1003-9082（2019）11-0-01

助消膏是大果木姜子、五倍子、木香等中藥的提取物組成，散寒止痛，收斂止瀉（苗醫(yī)：漳射擋孟，苣斂擋渣;久代加嘎奴，久代吉嘎奴）的功效，用于脾胃虛寒所致的小兒腹瀉、腹痛、腹脹[1]，為貴州省特色苗藥。原助消膏標(biāo)準(zhǔn)中僅有食子酸的含量測(cè)定，而大果木姜子揮發(fā)油中含有大量的桉油精， 有理氣止痛的作用， 也是助消膏的主要藥效成分之一。故對(duì)助消膏中桉油精的含量測(cè)定方法進(jìn)行了研究，桉油精含量文獻(xiàn)報(bào)道多采用GC法測(cè)定，本文采用HPLC測(cè)定桉油精含量，方便，快速，為標(biāo)準(zhǔn)的修訂提供了科學(xué)的數(shù)據(jù)。

一、材料與方法

1.材料

1.1儀器 島津LC-20AT高效液相色譜儀， Diamonsil 5?m 4.6mm×150mm ，島津UV1700紫外分光光度計(jì);賽多利斯CPA225D電子天平（十萬(wàn)分之一）。

1.2試劑與試藥 桉油精對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：10788-201105，99.9%）、助消膏樣品為貴州金橋藥業(yè)有限公司產(chǎn)品。乙腈（色譜純），甲醇（分析純）。

2.方法

2.1 溶液的制備

2.1.1對(duì)照品溶液的制備 取桉油精對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含桉油精0.6mg的溶液，即得。

2.1.2 供試品溶液的制備 取本品，除去蓋村，剪成小塊，稱取約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲30分鐘，放冷，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，濾過(guò)，即得。

2.2 色譜條件的選擇 采用C18 4.6×150mm色譜柱，經(jīng)過(guò)試驗(yàn)以乙腈-水（64∶36）[2～4]為流動(dòng)相，流速1.0ml/min;紫外光譜掃描在203m附近有最大吸收，選定203nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

二、結(jié)果

1.方法學(xué)驗(yàn)證

1.1專屬性試驗(yàn) 標(biāo)準(zhǔn)制備工藝條件下，制備缺桉油精的陰性樣品，按上述色譜條件檢測(cè)，陰性樣品未見(jiàn)吸收峰;測(cè)定樣品中桉油精峰的保留時(shí)間，與對(duì)照品溶液中桉油精的保留時(shí)間一致。

1.2系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 按上述色譜條件測(cè)定制劑中桉油精的含量，桉油精峰拖尾因子、分離度符合要求。理論板數(shù)不得低于2000。

1.3線性關(guān)系的考察 精密稱取桉油精對(duì)照品（110788-201105，99.9%）101.0mg，置50ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，制成每1ml含2.180mg的對(duì)照品儲(chǔ)配液。分別精密量取上述對(duì)照品溶液1ml、2ml、3ml、5ml、10ml置10ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，制成每1ml含0.218mg、0.436mg、0.654mg、1.09mg、2.18mg的對(duì)照品溶液，分別精密量取10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以濃度x（μg/ml）為橫坐標(biāo)，峰面積y（mv）縱坐標(biāo)，作圖，得到基本過(guò)原點(diǎn)的直線方程，回歸方程y=1×107x-65561，相關(guān)系數(shù)r2=0.999，以對(duì)照品測(cè)定所得峰面積代入前述回歸方程計(jì)算含量，所得結(jié)果與真實(shí)含量平均偏差小于2%，故可認(rèn)為標(biāo)準(zhǔn)曲線近似過(guò)原點(diǎn)。由此含量測(cè)定可采用外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算。

試驗(yàn)結(jié)果表明∶桉油精在0.218mg/ml～2.18mg/ml范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。定量和檢測(cè)分別為0.13μg/ml和0.4μg/ml。

1.4精密度試驗(yàn) 精密量取同一桉油精對(duì)照品溶液（0.01090mg/ml）10μl，進(jìn)樣6次，記錄色譜圖，峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為0.9%，試驗(yàn)結(jié)果表明精密度良好。

1.5穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，分別于0 h、2 h、4 h、6 h、8h，連續(xù)進(jìn)樣6次，峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為0.91%。試驗(yàn)結(jié)果表明，供試品溶液在8小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性良好。

1.6重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)（181001）樣品6份，精密稱定，按含量測(cè)定項(xiàng)下的方法進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜圖，計(jì)算桉油精含量：平均含量為33.31mg/g，RSD為1.88%;試驗(yàn)結(jié)果表明，重復(fù)性良好。

1.7加樣回收率試驗(yàn) 取同一批號(hào)（131001）的樣品9份，精密稱定，精密加入0.6661mg/ml的對(duì)照品溶液20、25、30ml，按含量測(cè)定項(xiàng)下的方法進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜圖，回收率（99.44%，n=9）。試驗(yàn)結(jié)果表明，回收率良好。

1.8樣品含量測(cè)定 分別取十批樣品適量，精密稱定，按含量測(cè)定項(xiàng)下的方法進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算樣品含量。結(jié)果得出十批樣品含量測(cè)定平均值為33.40mg/g。

三、討論

1.流動(dòng)相選擇 別以甲醇-水（70∶30）、（65∶35）和乙腈-水（40∶60）、（64∶36）、（70∶30）為流動(dòng)相，考察桉油精峰分離度及拖尾因子，測(cè)定結(jié)果表明，以乙腈-水（64∶36）為 流動(dòng)相桉油精峰分離度較好，出峰時(shí)間短，故選擇乙腈-水（64∶36）作為桉油精含量測(cè)定用流動(dòng)相。

2.取方式的考察 同一批號(hào)的樣品分別以回流、超聲提取30分鐘，測(cè)定桉油精含量分別為3.36mg/g、3.26mg/g，提取方式對(duì)含量無(wú)明顯差異，故選擇超聲提取。

3.回流時(shí)間考察 以同一批號(hào)的樣品分別超聲提取20分鐘、30分鐘、45分鐘，測(cè)定含量分別為31.66mg/g、33.40mg/g、33.49mg/g，從測(cè)定含量上看，提取30分鐘后，隨提取時(shí)間的延長(zhǎng)，桉油精含量未顯著增加，故確定為30分鐘。

參考文獻(xiàn)

[1]WS-11609-（ZD-1609）-2002.助消膏質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[S].

[2]何兵，田吉，劉艷，等.HPLC 測(cè)定 11 種中藥揮發(fā)油中桉油精的含量[J].藥物分析雜志，2012，32（5），769-771.

[3]張琳，朱麗萍，張愛(ài)軍.香芍膠囊揮發(fā)油中桉油精的HPLC含量測(cè)定方法研究[J].中國(guó)醫(yī)藥科學(xué)，2015，5（15），45-47.