黃芪丹參組方對多柔比星所致大鼠心肌結(jié)構(gòu)的改善作用

吳文宇 楊兵 黃雯琪 劉杰 唐東昕 羅莉（通訊作者）

（1 貴州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院腫瘤科 貴州 貴陽 550001）

（2 貴航貴陽醫(yī)院腫瘤科 貴州 貴陽 550006）

多柔比星（Doxorubicin Hydrochloride for Injection，DOX）屬蒽環(huán)類抗生素[1]，是非常經(jīng)典的抗癌藥物之一，但是臨床上發(fā)現(xiàn)，長期使用會導(dǎo)致發(fā)生充血性心力衰竭的幾率增加，而且劑量越大心臟毒性越大。因此，研究如何防治蒽環(huán)類化療藥物的心臟毒性對惡心腫瘤的治療具有重要的臨床意義。黃芪丹參組方（HQDS）是芪參益氣滴丸里面的重要組成藥物按照1：1比例組成的中藥復(fù)方制劑。臨床常用于治療冠心病、心絞痛。前期研究顯示含有黃芪、丹參的芪參益氣滴丸對壓力負(fù)荷引起的心肌肥厚大鼠的對心肌損傷，心肌纖維化，心臟灌流量，心臟功能都有明顯的改善作用[2]。上述研究提示HQDS對大鼠心肌損傷有保護(hù)作用，本研究重點探討HQDS對DOX導(dǎo)致的大鼠心肌結(jié)構(gòu)損傷的改善作用。

1.資料與方法

1.1 動物

SD大鼠，雄性，體重（189±12）g，合格證號SCXK(渝)2009-0007（重慶騰鑫比爾實驗動物銷售有限公司提供）。動物飼養(yǎng)在溫度為22±2℃，濕度為40±5%的條件下，自由食水，光照/黑暗交替12h。實驗前動物禁食飼養(yǎng)于貴州中醫(yī)藥大學(xué)中心實驗室動物房。

1.2 主要試劑

黃芪（批號：8031982）和丹參（批號：8050442）顆粒劑均購自廣東一方制藥有限公司，規(guī)格：每袋10g。注射用鹽酸多柔比星（批號：H33021980），規(guī)格：10mg/瓶，粉劑，購自浙江海正藥業(yè)股份有限公司。

1.3 造模方法及動物分組

隨機(jī)選取SD大鼠24只，用超聲心動圖檢測左室射血分?jǐn)?shù)留底，然后通過腹腔注射DOX造模。每只大鼠按照2.5mg/kg的給藥量腹腔注射DOX，隔日一次，每周三次，連續(xù)注射2周，DOX總劑量控制為15mg/kg。2周后復(fù)測左室射血分?jǐn)?shù)，分?jǐn)?shù)降低10%者視為造模成功。最終將造模成功的14只大鼠按完全隨機(jī)法分為模型對照組（DOX 4W+NS）和模型治療組（DOX 4W+HQDS）。模型對照組組從第12日起，連續(xù)2周給與生理鹽水1ml灌胃。模型治療組連續(xù)2周給予HQDS 1ml灌胃（給藥量：0.2g/mL）。另外隨機(jī)選取正常大鼠作為正常對照組（Control 4W），連續(xù)2周隔日腹腔注射生理鹽水1ml，每周三次。從第12日后，停止注射生理鹽水，連續(xù)2周給予生理鹽水1ml灌胃。

1.4 大鼠左心室壁厚度以及心功能測定

在實驗開始前、實驗第14d、實驗第28d，用高頻超聲診斷儀測定實驗各組大鼠左室舒張期后壁厚度（LVPWd）、左室收縮期后壁厚度（LVPWs）、左室舒張末期內(nèi)徑（LVIDd）、左室收縮末期內(nèi)徑（LVIDs）。

1.5 大鼠心肌形態(tài)觀察

在HQDS治療第14d，取心臟，4%多聚甲醛固定24h，常規(guī)脫水、透明、浸蠟、包埋、切片，伊紅-蘇木精染色，體示顯微鏡下觀察大體形態(tài)，光學(xué)顯微鏡下觀察心肌形態(tài)學(xué)的變化。

1.6 統(tǒng)計學(xué)處理

2.結(jié)果

2.1 HQDS對DOX導(dǎo)致大鼠左心室壁增厚的改善作用

在不同條件下大鼠心臟的代表性超聲心動圖，用于測定左室內(nèi)徑和左室肥厚，與正常對照組（Control 4W）相比，給與多柔比星2周（A2）大鼠的LVID明顯增大、LVPW顯著變薄，證明造模成功。給與多柔比星4周而沒有治療藥物的DOX 4W+NS組（A3）LVID及LVPW沒有恢復(fù)。而給與HQDS 2周后（A4），LVD、LVPW明顯好轉(zhuǎn)。見圖1。

圖1 A1：Control 4W組，A2：DOX 2W組，A3：DOX 4W+NS組，A4：DOX 4W+HQDS組。LVID：舒張末期的左心室內(nèi)徑；LVPWd：舒張末期的左心室后壁。

2.2 HQDS對DOX引起的大鼠心肌形態(tài)學(xué)變化

圖2顯示，與正常對照組（Control 4W）比較，模型對照組（DOX 4W+NS）左心室內(nèi)徑明顯增大，左心室后壁顯著變薄（A2），并且出現(xiàn)了水腫以及纖維斷裂（B2）。而模型治療組（DOX 4W+HQDS）左心室內(nèi)徑、左心室后壁、水腫以及纖維斷裂等情況均得到較好的恢復(fù)。

圖2 HQDS對大鼠心肌組織切片的影響。A：HE染色顯示樣品的定位。B：高倍放大的心肌組織。E：水腫；FB：纖維斷裂。標(biāo)尺=20μm。

3.討論

很多既往經(jīng)典的研究都證實腹腔注射多柔比星可引起大鼠左室內(nèi)徑增大，室壁變薄。本研究也成功模擬出這一現(xiàn)象。并且證實在給予黃芪黨參組方治療后，可明顯地改善大鼠左心室內(nèi)徑增大，左心室后壁變薄的現(xiàn)象。這就提示了黃芪黨參組方能恢復(fù)由于化療藥多柔比星導(dǎo)致的心肌結(jié)構(gòu)異常。形態(tài)學(xué)的結(jié)果也顯示，HQDS后給藥可以改善多柔比星引起大鼠心肌損傷。黃芪黨參組方是將中醫(yī)補(bǔ)氣和活血功效有效融合的復(fù)方制劑，也是芪參益氣滴丸中的重要藥物組成，以往研究證實芪參益氣滴丸具有改善模型大鼠心臟灌流量和心臟功能，以及減輕大鼠心肌損傷、心肌纖維化的作用[2][3]。本研究進(jìn)一步證實了芪參益氣滴丸中的黃芪黨參組方也可以改善多柔比星引起的心肌損傷，可以為解決蒽環(huán)類化療藥臨床應(yīng)用的毒副反應(yīng)提供潛在的可能。綜上所述，黃芪黨參組方能改善多柔比星導(dǎo)致大鼠的心肌結(jié)構(gòu)改變，具有抗心肌毒性的作用。