酸堿度對秀珍菇新品種福秀163菌絲體形態及鎖狀個數的影響①

黃敏敏 劉 洋 顏振蘭 張閩春 李 巍 姚清華③ 羅 欽③

(1福建省農業科學院農業質量標準與檢測技術研究所 福建福州350003;2福建省南平市農業局 福建南平353000;3福建省武夷山市食用菌站 福建武夷山354300)

秀珍菇 （Pleurotus geesteranus），又名紫孢側耳、小平菇、姬菇、黃白平菇、美味側耳等，屬于真菌門，擔子菌綱，傘菌目，側耳科，側耳屬，是近年來栽培面積最廣的珍稀食用菌之一。該菇富含鮮味氨基酸、甜味氨基酸、支鏈氨基酸、脂肪酸、蛋白多糖及維生素和鐵、鈣、磷、鋅等微量元素。尤為值得一提的是，秀珍菇的蛋白質含量高于蘑菇、香菇、草菇等食用菌，有“菇中極品”之稱。掃描電鏡已廣泛應用于番茄、水稻、甘藍、烤煙等農作物［1-6］和野兔、扁蛾、嗜尸性蠅等動物［7-9］及多種細菌和真菌［10-16］的亞微機構和超微結構研究。培養基酸堿度不僅能夠促進食用菌菌絲加快、提高食用菌產量，而且具有改善食用菌品質的作用。但關于應用掃描電子顯微鏡觀察不同酸堿度的液體培養基對福秀163菌絲體大小、鎖狀個數和表面結構等的影響尚未見報道。本研究就不同酸堿度的液體培養基對福秀163菌絲體大小、鎖狀個數和表面結構影響進行研究，以期為福秀163生產等提供科學參考。

1 材料與方法

1.1 材料

供試菌種：供試品種為福秀163，由福建省農業科學院土壤肥料研究所環保研究室食用菌育種課題組提供。

培養基配方：土豆200g、白糖20g、水1000mL。

試劑：鹽酸和氫氧化鈉等，均為分析純，購于國藥集團化學試劑有限公司。試驗用儀器為日本電子（JEOL） JSM-6380Lv型掃描電子顯微鏡.購于日本電子有限公司。

1.2 方法

1.2.1 試驗設計

先將配制好的液體培養基用鹽酸和氫氧化鈉制成pH 4（A1）、pH 5（A2）、pH 6（A3）、pH 7（A4）、pH 8（A5） 5個梯度。試驗共分5個處理，每處理3個重復，每重復1瓶，每三角瓶裝量為50 mL，高壓滅菌。待培養基溫度冷卻至26℃左右接種。接種后放入26℃生化培養箱培養，取培養18 d的菌絲樣品作電鏡觀測。

1.2.2 電鏡觀測方法

切取不同酸堿度處理的新鮮福秀163菌絲體，迅速投入濃度為5%的戊二醛固定液中固定，并在4℃冰箱中存放4h。用0.2 mol/L磷酸緩沖液漂洗3次，15 min/次。再用1%濃度的鋨酸對樣品進行第二次固定，放在4℃冰箱存放2 h。將雙固定好的樣品先用0.2 mol/L磷酸緩沖液沖洗3次，每次10～15 min，再用乙醇進行梯度脫水：50%、70%、80%、90%，各10～15 min，100%的乙醇脫水3次，每次10 min，用環氧丙烷溶液置換2次。最后將樣品置于日立HCP-2臨界點干燥儀中進行干燥處理。干燥后的樣品用銅臺和導電膠粘好后放入離子鍍膜儀上噴鍍黃金，再用掃描電子顯微鏡進行觀察拍照。

1.2.3 測定方法［17］

采用直接測定方法計算菌絲寬窄和菌絲鎖狀個數。每個樣品的每個項目均分別觀察3個視野，據以（菌絲鎖狀、菌絲）計算個數及測量其大小，按放大倍率換算成實際長度；采用了DPS軟件進行差異顯著性檢驗。

2 結果與分析

2.1 不同酸堿度對福秀163菌絲干重的影響

由圖1看出，A4處理的福秀163菌絲干重最重，分別比pH 4、pH 5、pH 6和pH 8處理的福秀163菌絲干重重了6.60%、4.31%、2.42%和10.78%，經生物統計差異極顯著水平（p＜0.01）。

圖1 酸堿度對福秀163菌絲干重的影響

2.2 不同酸堿度對福秀163菌絲直徑的影響

2.2.1 不同酸堿度對福秀163菌絲最大直徑的影響

由圖2可知，pH 5、pH 6和pH 7處理的福秀163菌絲最大直徑之間差異不顯著（p＞0.05）。但pH 7處理的福秀163菌絲最大直徑比pH 4和pH 8處理的福秀163菌絲分別增加了31.25%和35.49%，經統計差異達極顯著水平（p＜0.01）。

圖2 酸堿度對福秀163菌絲最大直徑的影響

2.2.2 不同酸堿度對福秀163菌絲最小直徑的影響

由圖3看出，pH 4、pH 5、pH 6和pH 7處理的福秀163菌絲最小直徑之間經生物統計差異不顯著（p＞0.05）。但A5處理的福秀163菌絲最小直徑比pH 4、pH 5、pH 6和pH 7處理的福秀163菌絲窄大了69.23%、69.23%、83.33%和120.00%，差異極顯著水平（p＜0.01）。

圖3 酸堿度對福秀163菌絲最小直徑的影響

2.3 不同酸堿度對福秀163菌絲體中鎖狀個數的影響

由圖4看出，pH 7處理的福秀163菌絲鎖狀個數最多，分別比pH 4、pH 5、pH 6和pH 8處理的福秀163鎖狀個數多了200.00%、125.00%、60.71%和400.00%，經生物統計差異極顯著水平（p＜0.01）。

圖4 酸堿度對福秀163菌絲體中鎖狀個數的影響

2.4 不同酸堿度對福秀163菌絲體表面結構的影響

掃描電鏡觀察顯示，不同酸堿度下福秀163菌絲體形態發生明顯改變，甚至菌絲和鎖狀形態嚴重改變；有的菌絲體扁，有的菌絲體大小不均勻還出現凹或凸現象，且表面紋飾或清晰或模糊，有的鎖狀大小均勻，有的干癟或無紋飾。

從圖5可以看出，pH 4處理的福秀163菌絲上有較淺紋飾，大小較均勻，部分呈圓形，部分呈腸形；鎖狀大小均勻，部分紋飾模糊。A2處理時，菌絲大小不均勻，部分呈圓形，部分呈扁條形，表面光滑或有較淺紋飾，有竹節狀菌絲；鎖狀大小不均勻。A3處理的菌絲大小不均勻，呈圓形；鎖狀大小不均勻，有的還出現干癟。當pH 7處理時，菌絲大小不均勻，部分沒紋飾，部分有紋飾，形態變化大；鎖狀無紋飾且個數最多。當pH 8處理時，菌絲大部分呈豬大花腸狀，大小較均勻。

圖5 酸堿度對福秀163菌絲體表面結構的影響

3 討論

酸堿度對食用菌的產量和品質具有一定的影響。宮志遠等［18］研究了酸堿度對5種珍稀食用菌——阿魏蘑、杏鮑菇、真姬菇、酒紅球蓋菇和楊樹菇菌絲生長的影響，結果表明：阿魏蘑、杏鮑菇、真姬菇、酒紅球蓋菇和楊樹菇菌絲生長的最適pH分別為6.0、5.4、6.0、5.4和6.8。楊順強等［19］研究在食用菌菌種制作、培養過程中，培養基是關鍵性因素。其中，培養基的酸堿度對食用菌菌種的生長尤為重要，關系到菌種制作的成敗。為此，以平菇和香菇為試驗材料，以PDA培養基作為基礎培養基，將培養基的pH分別調至5.0、6.0、8.0、9.0，對照（CK）為自然酸堿度，接種培養平菇和香菇母種。接種后觀察菌絲生長、污染狀況，同時測定菌落直徑。結果表明：香菇在偏酸環境下長勢優于堿性環境，其中在pH 6處理下長勢最好，污染最低，成活率達70%；平菇對酸堿度的適應范圍較寬，在所設處理下均能正常生長，其中在自然酸堿度下長勢最好，污染最低，成活率達80%。郝冊等［20］為了確定北京懷柔地區的墨汁鬼傘菌絲體生長的最佳酸堿度和溫度，為人工馴化栽培提供依據，采用平板培養法分別研究了不同酸堿度及溫度對該地區墨汁鬼傘菌絲體生長的影響。結果表明，在PDA+玉米粉培養基上，墨汁鬼傘菌絲體在pH 5～10均能生長，pH 6～8菌絲生長健壯，生長速度稍慢。pH為9時菌絲濃密，生長速度最快，為最適合的酸堿度。肖興等［21］研究不同培養基和pH對巨大口蘑菌絲生長的影響。在pH為7.0時，菌絲生長速度最快，菌絲粗壯、濃白、致密。黃俊軒等［22］用飽和D-最優設計方法，探討了馬鈴薯汁濃度和酸堿度對姬松茸菌絲體生長的影響，得出pH 6.201能提高菌絲生長速度。江枝和等［23］研究發現，pH為8.5的培養料栽培的虎奶菇菌核的蛋白質氨基酸評分和營養指數分別為30.91和10.68，均居5種pH處理的第一位；化學評分、必需氨基酸指數和生物價分別為29.67、79.56和75.02，均居第二位，氨基酸比值系數分為24.76，均居第3位，綜合評價（pH為6.5、7.0、7.5、8.0、8.5）的結果表明，以pH 8.5的培養料栽培虎奶菇菌核的蛋白質營養價值較高。陳志松［24］研究發現，金針菇適宜pH為5.5～6.2，pH超過6.5，菌絲生長稀疏纖細，生長速度變慢，超過7.5，生長基本停止，培養料散發一種臭味，容易感染雜菌；pH低于5.0以下，菌絲生長速度明顯變慢，菌種塊形成一個濃的白毛團。劉葉高等［25］發現茶薪菇、杏鮑菇、阿魏菇菌絲生長最適宜的pH為7～7.5，茶薪菇在pH為6.5～7.5菌絲滿袋最快為44 d，生物轉化率最高為47%，杏鮑菇在pH為6.5～7.5菌絲滿袋最快為34 d，生物轉化率為46%，阿魏菇在pH為6.5～7.5菌絲滿袋最快為38 d，生物轉化率最高為42%。毛順興［26］研究發現，以草代料栽培阿魏菇在pH為8～10菌絲生長健壯，污染率減少，最適pH比常規栽培阿魏菇高1.5～2.5。但未見秀珍菇及其食藥用菌的其它菇形態等特征掃描電鏡觀察的報道。

本研究結果表明，pH 7處理的福秀163菌絲干重、菌絲大小極顯著高于其它處理（p＜0.01）。掃描電鏡觀察結果顯示，pH 7處理的菌絲大小不均勻，部分沒紋飾，部分有紋飾，形態變化大；鎖狀無紋飾且鎖狀個數最多，極顯著高于其它處理（p＜0.01）。

筆者主要從形態學的角度就酸堿度對秀珍菇新品種福秀163菌絲得影響展開研究，今后將繼續在細胞、亞細胞及分子水平上進行深入研究，以進一步探討酸堿度值對食（藥）用菌的作用機理。