平菇液體菌種保存期初探

關艷麗

（遼寧省微生物科學研究院，遼寧朝陽122000）

液體菌種有發菌周期短、發菌整齊的優點[1]，隨著食用菌工廠化栽培發展，液體菌種的應用越來越廣泛。但液體菌種都有一定的保存期，超過保存期，菌種的生活力下降，菌種萌發慢，接種后污染率上升。試驗以平菇（Pleurotusostreatus）為例，探討了液體菌種在不同保存溫度的保存期以及不同發酵時間的液體菌種菌絲體萌發及吃料速度，為從事液體菌種生產的工作者確定液體菌種最佳保存期提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

（1）平菇菌株，平菇CCEF89，由遼寧省微生物菌種保藏中心提供。（2）培養基。斜面培養基：PDA培養基。搖瓶液體培養基：玉米粉3%，葡萄糖1%，豆餅3%，KH2PO40.3%，MgSO40.15%，瓊脂0.1%。pH自然。固體培養基：木屑78%，麩皮20%，石膏1%，白糖1%。先將鋸木屑（最好是闊葉樹的鋸木屑）、麩皮、石膏粉混勻，再拌入白糖水，調節含水量至60%左右即可。

1.2 試驗方法

1.2.1 液體菌種制備

將平菇斜面菌種接入平板，放入培養箱中，于25℃恒溫培養，7d左右菌絲長滿平板。取1塊大小為1cm2生長最旺盛的平板邊緣菌絲塊，在無菌條件下接入500mL三角瓶中，瓶中裝液量為100mL，避光、160r/min、25℃恒溫振蕩培養6d，得液體菌種[2，3]。

1.2.2 最佳菌齡的確定

將不同菌齡的平菇液體菌種轉接到固體培養基上。在無菌條件下分別吸取液體菌種于固體培養基中，每瓶接液體菌種1mL，25℃，暗光培養，觀察菌絲體萌發及吃料情況，取其平均值。

1.2.3 菌種萌發試驗

設保存溫度5℃，10℃，15℃，20℃，做保存時間為3d、6d、9d、12d、15d、18d的菌種萌發試驗。每瓶隨機挑取6個菌絲球，置PDA培養基上，25℃恒溫培養，取6個點萌動時間的平均數，記錄菌球萌發情況。

1.2.4 菌種成活率試驗

將在25℃、160r／min、暗光培養好的最佳菌齡的液體菌種用500mL三角瓶分裝約300mL封口，分別置于5℃，10℃，15℃，20℃溫度保存，保存時間為3d、6d、9d、12d、15d、18d。取上述保存的液體菌種，每瓶隨機挑取6個菌絲球，置PDA培養基上，25℃恒溫培養，以接種后3d菌種的萌動為準，計算成活率。

1.2.5 菌種吃料試驗

分別吸取不同保存條件下的平菇液體菌種1mL接種在固體培養基中，25℃，暗光培養，每個處理3個重復，測定菌絲吃料速度，取其平均值。

表1 不同菌齡菌種吃料試驗結果

2 結果與分析

2.1 平菇液體菌種最佳菌齡

從表1可以看出不同菌齡液體菌種吃料速度相差較大，其中培養96h菌種吃料速度最快，達到0.66cm/d。隨著菌齡的繼續延長菌種吃料速度減慢，因此在后續的試驗中以培養96h的液體菌種作為研究對象。

2.2 菌種萌發試驗結果

液體菌種平皿萌發試驗結果見表2。由表2可看出：供試保存溫度隨著保存期的延長菌種活力下降，萌發時間均延長，試驗保存溫度保存期為3d液體菌種萌發時間差異不大；保存期相同，菌種活力隨保存溫度升高而下降，萌發時間延長。

表2 菌種萌發時間試驗結果

2.3 菌種成活率試驗結果

液體菌種平皿成活率試驗結果見表3。由表3可看出：保存溫度低于10℃，保存期在18d之內對菌種成活率沒有影響；保存溫度超過15℃時，隨著保存時間的延長菌種的成活率明顯下降；超過18d，菌種有產氣，分層現象，但菌種沒有污染，接種后，菌種萌發遲，易被雜菌感染。

表3 菌種成活率試驗結果

2.4 菌種吃料試驗

前期試驗表明保存溫度高，菌種的活力明顯下降，所以只進行了兩個保存溫度不同保存時間液體菌種吃料的試驗，結果見表4。

表4 不同溫度不同保存時間平菇液體菌種吃料情況

由表4可知，4℃保存液體菌種均比15℃保存菌種吃料速度快，同一溫度條件，隨著保存時間的延長，菌種的吃料速度會逐漸下降。

3 小結

試驗考察了不同保存溫度及不同保存期平菇液體菌種的萌發時間、成活率及吃料情況。試驗結果表明，平菇液體菌種的活力受保存溫度和保存時間的影響較大，隨著保存溫度的升高、保存時間的延長，菌種的活力逐漸下降。試驗條件下培養96h平菇液體菌種活力最強，接種后菌絲的吃料速度最快，吃料速度達到0.66cm/d；4℃、保存期為12d左右不會影響菌種萌發及菌種活力，保存溫度25℃最多可保存3d。