HPLC法測定銀菊感冒膠囊中馬來酸氯苯那敏的含量及含量均勻度

云南省曲靖市食品藥品檢驗(yàn)檢測中心，云南 曲靖 655000

銀菊感冒膠囊為曲靖市中醫(yī)醫(yī)院的院內(nèi)制劑(批準(zhǔn)文號：滇ZJGF/2005-538)，由金銀花、菊花、射干、氨基比林、馬來酸氯苯那敏等組成，具有清熱解毒、解熱鎮(zhèn)痛的作用。臨床用于感冒、發(fā)熱、頭痛、咽喉腫痛等癥[1]。制劑中馬來酸氯苯那敏僅有薄層色譜定性鑒別，未建含量測定方法。本文參照相關(guān)文獻(xiàn)[2-4]，采用高效液相色譜法(HPLC)對該品種中馬來酸氯苯那敏含量及含量均勻度進(jìn)行測定，結(jié)果表明本方法簡單快捷，穩(wěn)定性及重現(xiàn)性較好，可有效控制銀菊感冒膠囊質(zhì)量。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Agilent1200型高效液相色譜儀(四元泵，自動進(jìn)樣器，柱溫箱， 紫外檢測器)；METTLE MS205DU電子天平(上海梅特勒-托利多儀器有限公司)MS205DU電子天平(上海梅特勒-托利多儀器有限公司)；一體式超純水儀(PURELAB Flex 3，英國ELGA公司)。

1.2 藥品與試劑 銀菊感冒膠囊(規(guī)格0.25g/粒，批號181007、181118、181220)樣品均來自云南省曲靖市中醫(yī)醫(yī)院；馬來酸氯苯那敏(批號100047-201507，含量99.7%)購于中國食品藥品檢定研究院；乙腈為色譜純，磷酸二氫銨和磷酸為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 色譜柱：Amethyst C18(4.6 mm×200 mm，5 μm)； 磷酸鹽緩沖液(取磷酸二氫銨11.5 g，加水適量使溶解，加磷酸1 mL，用水稀釋至1000 mL)-乙腈(80∶20)為流動相；流速：1.0 mL· min-1； 柱溫：30 ℃,；檢測波長：262 nm；進(jìn)樣量：10 μL。理論板數(shù)按氯苯那敏峰計(jì)算不低于4000，氯苯那敏峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合要求。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液制備 取馬來酸氯苯那敏對照品17.86 mg，精密稱定，置200 mL容量瓶中，加流動相使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.2 供試品溶液制備 取銀菊感冒膠囊20粒，計(jì)算平均裝量，取內(nèi)容物，研細(xì)，混勻，取適量(約相當(dāng)于馬來酸氯苯那敏4 mg)，精密稱定，置50 mL容量瓶中，加流動性30 mL,超聲處理15 min,放冷，加流動相至刻度，搖勻，濾過，濾液再用0.45 μm微孔濾膜濾過，即得。

2.2.3 陰性樣品溶液制備 根據(jù)制劑處方及工藝，配制缺馬來酸氯苯那敏的陰性樣品(由云南省曲靖中醫(yī)醫(yī)院提供)，再按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備,即得。

2.3 結(jié)果

2.3.1 專屬性試驗(yàn) 在上述色譜條件下，分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性樣品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果如圖1所示。結(jié)果表明，馬來酸氯苯那敏分離較好，無干擾，說明測定方法專屬性較好。

2.3.2 線性關(guān)系試驗(yàn) 精密吸取“2.2.1”項(xiàng)下的對照品溶液0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0 mL，分別置于 10 mL容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。分別重復(fù)進(jìn)樣3次，記錄峰面積。以進(jìn)樣量X(μg)為橫坐標(biāo)，峰面積(以氯苯那敏計(jì))平均值(Y)為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：Y=9226.8829X-0.6386，r=0.999 9。結(jié)果表明，馬來酸氯苯那敏質(zhì)量濃度在0.893～44.65 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3.3 檢測限和定量限 取“2.2.1”項(xiàng)下的對照品溶液適量，等倍逐級稀釋進(jìn)樣測定，記錄峰面積。當(dāng)信噪比為3∶1時，得檢測限為 2.025 ng；當(dāng)信噪比為10∶1時，得定量限為 6.211 ng。

2.3.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取經(jīng)“2.2.2”項(xiàng)方法制備的樣品(批號181007)供試品溶液，按照“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行分析,分別在0、2、4、6、8、12、24 h不同時間進(jìn)樣測定。結(jié)果峰面積RSD為1.36%(n=7)。結(jié)果表明供試品溶液在 24 h 內(nèi)色譜峰面積變化不大，溶液較穩(wěn)定。

2.3.5 回收率試驗(yàn) 取已知含量的同一批樣品(批號：181007)5份，每份約 0.5 g，精密稱定；另取馬來酸氯苯那敏對照品 25.12 mg，精密稱定，置 25 mL容量瓶中，加流動性使溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取 2 mL置已稱定樣品中，按“2.2.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，按照“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行分析,結(jié)果見表1。

2.3.6 精密度試驗(yàn) 精密取經(jīng)“2.2.1”項(xiàng)方法制備的樣品(批號181007)供試品溶液 10 μL，按照“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行分析,連續(xù)6次。結(jié)果馬來酸氯苯那敏峰面積的RSD分為0.30%，結(jié)果表明儀器平行精密度良好。

2.3.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批次的樣品(批號：181007)，平行6份(1.0 g)，精密稱定，按“2.2.1”項(xiàng)下的方法操作，按照“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行分析,每1 g樣品中含馬來酸氯苯那敏 3.9424 mg，RSD為0.26%，結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。

2.3.8 樣品測定 含量測定：取樣品3批次(批號181007、181118、181220)分別按“2.2.1”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，按照“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行分析，計(jì)算標(biāo)示含量，結(jié)果3批樣品中馬來酸氯苯那敏的平均標(biāo)示含量分別為98.56%、98.96%、99.05%。含量均勻度測定：取3個批號的樣品各10粒，分別置于 25 mL容量瓶中，加流動性 15 mL,超聲處理 15 min,放冷，加流動相至刻度，搖勻，濾過，續(xù)濾液再用 0.45 μm微孔濾膜濾過，濾液按照“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行分析，計(jì)算標(biāo)示含量，結(jié)果見表2，符合《中國藥典》2015年版通則0941含量均勻度項(xiàng)下有關(guān)規(guī)定(A+2.2S≤ L,L=15.0)。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果 ( n=5)

表2 樣品含量均勻度測定結(jié)果 (n=3)

3 討論

3.1 檢測波長的選擇 通過實(shí)驗(yàn)馬來酸氯苯那敏在262.5 nm波長處有最大吸收，結(jié)合中國藥典及相關(guān)文獻(xiàn)報道[5-8]最終選用 262 nm作為檢測波長。

3.2 提取條件選擇 試驗(yàn)中曾采用甲醇、水、乙醇、流動相等溶媒超聲15 min，進(jìn)行提取，經(jīng)比較，以流動相作為提取溶劑為佳；再以流動相為提取溶劑，對同一批號樣品的超聲時間進(jìn)行考察，選擇超聲10、15、30、45、60 min后處理的樣品溶液分別進(jìn)行分析，結(jié)果各樣品含量基本接近，故選擇超聲時間 15 min處理樣品。

3.3 分離條件選擇 本試驗(yàn)曾采用了3種流動相進(jìn)行成分分離[9-11]。①乙腈:磷酸鹽緩沖液②甲醇-水 ；③甲醇-乙腈-水。結(jié)果發(fā)現(xiàn)磷酸鹽緩沖液(取磷酸二氫銨11.5 g，加水適量使溶解，加磷酸 1 mL，用水稀釋至1000 mL)-乙腈(80∶20)為流動相保留時間合適且各成分獲得較好的分離。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)中采用高效液相色譜法測定銀菊感冒膠囊中馬來酸氯苯那敏的含量及含量均勻度，該方法操作簡便，準(zhǔn)確可靠，可有效控制該制劑質(zhì)量。