高效液相色譜法測定谷物及其制品中玉米赤霉烯酮

耿振 姜延國 尹晶

（遼寧省丹東市衛生健康服務中心 遼寧丹東 118000）

1 前言

玉米赤霉烯酮的檢驗方法包括免疫親和-液相色譜法、薄層層析法和酶聯免疫（ELISA）法[1]等，其中，免疫親和-液相色譜法最普遍，其原理是：目標物質經免疫活性物質特異性分離后，以高效液相色譜-熒光檢測器或高效液相色譜-質譜檢測。玉米赤霉烯酮不僅危害玉米，還大面積危害大麥、小麥等谷類作物，且還會由于儲存條件不善，污染其他作物制品[2]。玉米赤霉烯酮會導致一些擬/抗雌激素效應，損傷DNA，誘發腫瘤，也會對血液和免疫毒性方面造成影響[3]。

本文采用免疫親和-高效液相色譜-熒光檢測法，檢測玉米、小麥等谷物及其制品中玉米赤霉烯酮的含量。

2 材料和方法

2.1 儀器與試劑

LC-20AT 高效液相色譜儀配熒光檢測器（日本島津公司）；Milli-Q 純水系統（美國Millipore 公司）；AUW120電子天平（日本島津公司）；玉米赤霉烯酮標準溶液：ZearaStar（ROMER 國際貿易有限公司）密度ρ=100.4 μg/mL；玉米赤霉烯酮免疫親和柱：ZEARALE NONE IN ACETONITRILE（ROMER 國際貿易有限公司）；甲醇（色譜純）、乙腈（色譜純）（山東禹王實業有限公司化工分公司）；本實驗用水均為純水（電阻率為18.25 MΩ·cm）。

磷酸鹽（PBS）緩沖液的配制：稱取8.000 g 氯化鈉、1.200 g 磷酸氫二鈉、0.200 g 磷酸二氫鉀、0.200 g氯化鉀，用990 mL 純水溶解上述試劑，然后用濃鹽酸調節pH 至7.0，再用水稀釋至1 L。

2.2 方法

2.2.1 樣品前處理方法

樣品經粉碎后，準確稱取（40.000±0.010）g 于具塞三角瓶中，加入100 mL 乙腈∶去離子水84∶16 提取，振蕩1 h，過濾后得提取液。將3.00 mL 提取液和25.00 mL PBS 緩沖液均勻混合，后通過免疫親和柱，控制流速為1～3 mL/min，依次用10 mL PBS 緩沖液和10 mL 去離子水分別淋洗免疫親和柱，再用3×0.50 mL 甲醇洗脫免疫親和柱收集洗脫液于試管中。將收集的洗脫液于60℃氮吹近干后，用1.00 mL 混合溶液（乙腈∶水∶甲醇=46∶46∶8）復溶，待漩渦混合均勻后，復溶液過0.45 μm 濾膜上機檢測。

2.2.2 儀器條件

色譜柱：ThermoFisher BDS Hypersil C18 色譜柱，150 mm×4.6 mm（內徑），粒度5 μm；流動相：乙腈∶水∶甲醇=46∶46∶8；流速：1.000 mL/min；檢測波長：激發波長274 nm，發射波長440 nm；柱溫：30℃；進樣量：100 μL。保留時間定性，外標法定量。

3 結果

本檢測方法的各項指標測定結果詳見表1。

表1 檢測方法各項指標及其結果

3.1 精密度與準確度結果分析

選取50 μg/L 的標準使用液，做了7 次重復測定，考查熒光檢測器的精密度。結果表明，7 次重復測量的RSD 為0.19%，說明熒光檢測器具備較高的精密度。

分別稱取40 g 樣品（精確至0.001 g）4 份，分別添加2 μg 和3 μg 玉米赤霉烯酮標準品，添加回收率均為91.3%～99.5%，說明免疫親和-高效液相色譜法準確度較高。

3.2 方法標準曲線線性范圍及檢出限結果分析

選取的標準溶液濃度系列1 μg/L、5 μg/L、10 μg/L、20 μg/L、50 μg/L 和100 μg/L，具有較寬的線性范圍；標準曲線的相關系數為0.999 9，大于相關系數0.999 0的要求；由標準曲線的斜率可見，該方法具有較高的靈敏度；3 倍信噪比的檢出限為0.8 μg/kg，10 倍信噪比的定量限為2.7 μg/kg。

4 結論

本文建立了谷物及其制品中玉米赤霉烯酮的免疫親和-高效液相色譜檢測方法。該方法標準曲線線性較好，檢測濃度范圍較寬，具有較高的精密度和準確度，檢出限較低，適應性較強，各項檢測指標均符合GB/T 27404—2008《實驗室質量控制規范 食品理化檢測》[4]中痕量污染物檢測的要求。免疫親和-高效液相色譜法的核心是免疫活性物質可以和靶標物質特異性結合，經過甲醇洗脫后，靶標物質基本上可以全部被保留和洗脫下來。該檢測方法的回收率好、精密度高，適用于谷物及其制品中玉米霉烯酮的檢測。