基于高分辨質譜技術的嬰幼兒食品中過敏原蛋白質的高靈敏檢測

顧艷

（南京市食品藥品監督檢驗院 江蘇南京210000）

1 前言

食品檢測行業中對食品過敏原檢測的方法有3種，分別是液相色譜-串聯質譜檢測法、聚合酶鏈式反應法和酶聯免疫吸附法。酶聯免疫吸附法具有敏感性強、特異性高和實用性強的優點，檢測通量較低，在檢測時很容易受到其他因素的影響，如抗原-抗體反應不完全、抗體種類限制等，導致檢測靈敏度大大降低[1]；聚合酶鏈式反應法可實現多種目標物同時檢測，同樣也會受到各種因素的影響，無法檢測復雜食品基質中的過敏原；液相色譜-串聯質譜檢測法具有高通量、高準確度和高靈敏度的特點，目前被廣泛應用在食物過敏原蛋白質檢測中[2]。目前，在嬰幼兒食品過敏原蛋白質檢測技術中，仍缺乏高準確度和高靈敏度的檢測技術。本文使用高效液相色譜-質譜聯用技術和平行反應監測技術，對嬰幼兒食品中過敏原成分進行檢測分析。

2 實驗材料與方法

2.1 實驗材料

2.1.1 儀器與設備

超聲破碎儀、真空濃縮儀、LC-3000 高效液相質譜儀、3000 Purifier 色譜系統，所使用到的儀器都定期進行校準，檢測結果參考性價值高。

2.1.2 材料與試劑

為了確保檢測結果的可靠性和真實性，本次實驗選擇靈敏度高、穩定性好的過敏原蛋白質特征肽段。堅果類選擇VGFNTNSLK 和QGQVLTIPQNFAVAK；雞蛋類選擇YPILPEYLQCVK；黃豆類選擇SQSDN FEYVSFK；魚類選擇SGFILEEDELK；花生類選擇GTGN-LELVAVR；牛奶類選擇FALPQYLK。

牛胰蛋白酶、FA、IAA、DTT、EDTA、Tris、Triton X-100、尿素、甲醇、ACN、BCA 試劑盒、C18 硅膠填料、超濾離心管；實驗用水經過純化處理。

2.2 方法

2.2.1 樣品提取

使用i-FASP 方法、原位過濾輔助樣品預處理、膜上原位樣品預處理方法等方法提取樣品1[3]。……