含羞草素對糖尿病大鼠腎臟缺氧損傷及HIF/PHD軸的影響

湯 蜜，李沁蕓，李少斌,2，顏曉勇，余麗梅,2，楊亦彬,2

(1.遵義醫科大學附屬醫院 腎內科，貴州 遵義 563099；2.遵義醫科大學附屬醫院 細胞工程實驗室再生醫學科，貴州 遵義 563099)

近年來大量國內外研究強調了缺氧在慢性腎臟疾病(Chronic kidney disease,CKD)進展中的重要性[1-2]。研究發現低氧狀態貫穿了糖尿病腎病(Diabetic nephropathy,DN)發生發展的全過程，并認為這種狀態與腎臟微血管病變以及局部新生血管生成密切相關[3-4]。一般情況下，機體可通過激活HIF/PHD軸上的缺氧誘導因子(Hypoxia-inducible factor,HIF)，進而激活下游靶基因(血紅素加氧酶-1(Heme oxygenase-1,HO-1)、血管內皮生長因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)和促紅細胞生成素(Erythropoietin,EPO)等，對缺氧做出適應性應答。但由于HIF半衰期短，易降解[5]，導致機體對缺氧狀態下的緩沖儲備能力下降，可能是推進DN進展的主要原因之一。脯氨酸羥化酶(Proline hydroxylase ,PHD)作為HIF降解反應的關鍵酶，在調節HIF/PHD軸的HIF表達上有重要作用[6]。含羞草素是一種PHD廣泛抑制劑，可通過抑制PHD促進HIF表達，改善機體腎氧平衡。本實驗用含羞草素治療糖尿病大鼠，觀察含羞草素對糖尿病大鼠腎臟缺氧及HIF/PHD軸上的相關因子(HIF-1α、PHD2、HO-1)表達的影響。

1 材料與方法

1.1 材料 200～240g SD大鼠(由重慶第三軍醫大學野戰外科研究所提供)，3～4月齡；共24只；鏈脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)、含羞草素 (Sigma公司)；小鼠抗大鼠HIF-1α單克隆抗體、兔抗大鼠PHD2多克隆抗體(NOVUS 公司)；小鼠抗大鼠HO-1單克隆抗體(Abcam 公司)；小鼠抗大鼠β-actin單克隆抗體(ZSGB-BIO公司)；缺氧探針Hypoxyprobe?-1 Kit(HPI公司)；RNA逆轉錄試劑盒、RNA引物、擴增試劑盒(Sangon Biotech公司)；安穩血糖儀(Sinocare 公司)。

1.2 方法

1.2.1 造模分組及采樣 本實驗由對照組、糖尿病組以及含羞草素治療組組成。采用腹腔注射STZ(55 mg/kg)模擬糖尿病模型，滿足：連續3d血糖>16.65 mmol/L、尿量>原尿量150%、尿蛋白排泄量>30 mg/24 h、尿糖強陽性4項即為模型建立成功。對照組……