胃癌合并幽門螺桿菌感染CYP2C19基因型與其預(yù)后的關(guān)系分析

佟鐵剛 張日來 馮瑞興

1.廣東省佛山市順德區(qū)北滘醫(yī)院內(nèi)四科，廣東佛山 528311；2.廣東省佛山市順德區(qū)北滘醫(yī)院急診科，廣東佛山 528311

胃癌在我國(guó)各種惡性腫瘤中居首位，有研究顯示，胃癌患者的Hp 感染率在60% 以上[1]，表明胃癌的發(fā)病可能與Hp 感染有關(guān)，且Hp 感染可加速胃癌的發(fā)展，因此，胃癌患者合并Hp 感染后，可加重病情，影響其生存預(yù)后水平[2]。而有研究認(rèn)為細(xì)胞色素P450 氧化酶2C19（CYP2C19）可參與前致癌的活化物和致癌物質(zhì)的滅活，當(dāng)CYP2C19 酶活性減弱時(shí)，致癌物質(zhì)在體內(nèi)代謝減慢，導(dǎo)致其在體內(nèi)堆積，從而增加了腫瘤的易感性，且由于其慢代謝作用，對(duì)癌物質(zhì)滅活過慢，可影響患者的治療，易導(dǎo)致腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，從而影響患者的生存質(zhì)量[3-4]。因此，CYP2C19 基因的表達(dá)水平可用于評(píng)價(jià)癌癥的預(yù)后，然而目前關(guān)于CYP2C19 基因型與胃癌合Hp 患者預(yù)后關(guān)系的研究較少見，因此本研究擬通過對(duì)我院2017 年1 月～2018 年12 月收治的100 例胃癌合并Hp 感染患者為研究對(duì)象，并采用病例對(duì)照的方式探討胃癌合并幽門螺旋桿菌感染CYP2C19 基因型與其預(yù)后的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院2017 年1 月～2018 年12 月收治的胃癌合并Hp 感染患者100 例作為觀察組，另選取同期胃癌無合并Hp 感染患者100 例作為對(duì)照組，納入標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)臨床檢查確診為胃癌；觀察組患者確診為合并Hp 感染，對(duì)照組患者無Hp 感染；所有患者均簽署知情同意書；排除標(biāo)準(zhǔn)：精神異常；合并腦血管疾病；血液系統(tǒng)疾病；嚴(yán)重肺部疾病；同時(shí)合并其他惡性腫瘤；臟器功能嚴(yán)重異常；未配合完成本研究者。觀察組男58 例，女42 例，年齡58 ～74 歲，平均（67.9±6.2）歲；對(duì)照組男55 例，女45 例，年齡59 ～72 歲，平均（67.7±6.1）歲，兩組患者性別、年齡比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），具有可比性，本研究并通過醫(yī)院倫理委員會(huì)審查。

1.2 方法

抽取靜脈血6mL，提取全血細(xì)胞DNA（采用TAKARA 公司提供的DNA 提取試劑直接從EDTA抗凝全血中提取DNA，溶解于50μL TE 緩沖液中），采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)- 限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性法檢測(cè)兩組患者CYP2C19 的基因多態(tài)性，即50μL反 應(yīng) 體 系：10×Buffer 5μL，DNTP 4μL，Taq 酶0.25μL，模板DNA 100ng，上下游引物各20pmol，滅菌水至50μL。擴(kuò)增條件：94℃ 4min，35 個(gè)循環(huán)[94℃ 30s，60℃（SOD1 為55℃）30s，72℃ 30s]，72 ℃ 10min，酶 切 體 系20μL：10×NEB 緩 沖 液2μL，DNA 片段≤1ng，內(nèi)切酶0.5μL，雙蒸滅菌水至20μL，60℃孵育14h。2% 瓊脂糖，電泳1.45h，紫外成像后，判定基因型。并通過通過電話、復(fù)診等方式對(duì)所有患者隨訪2 年，記錄其生存情況，依據(jù)是否生存分為死亡組和生存組，采用單因素分析法分析CYP2C19 的基因多態(tài)性對(duì)胃癌患者Hp 感染及預(yù)后的影響，采用Logistic分析法篩選其中危險(xiǎn)基因型，分析CYP2C19 基因型與該疾病及其預(yù)后的關(guān)系，指導(dǎo)實(shí)施針對(duì)性治療方案。

1.3 觀察指標(biāo)

檢測(cè)兩組患者CYP2C19 的三種基因型[ 純合子快代謝型（EM）、雜合子快代謝型（IM）、慢代謝型（PM）] 所占的比例。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

本研究采用SPSS22.0 軟件完成全部數(shù)據(jù)處理分析，對(duì)無序分類資料采用χ2檢驗(yàn)，采用單因素分析CYP2C19 的基因型對(duì)胃癌患者Hp 感染及預(yù)后的影響，對(duì)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的基因型進(jìn)一步采用Logistic分析法篩選其中危險(xiǎn)基因型，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者CYP2C19型分布比較

兩組患者在純合子快代謝型及雜合子快代謝型分布比例比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），觀察組慢代謝型基因型比例顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），見表1。

表1 兩組基因型分布比較[n（%）]

2.2 CYP2C19基因多態(tài)性對(duì)胃癌患者生存預(yù)后的影響

由表2 可見死亡組慢代謝基因型所占比例顯著高于生存組（P＜0.001）；而生存組與死亡組純合子快代謝基因型、雜合子快代謝基因型所占比例比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），見表2。

表2 CYP2C19基因多態(tài)性及Hp感染對(duì)胃癌患者生存預(yù)后的影響[n（%）]

2.3 CYP2C19基因多態(tài)性對(duì)胃癌患者Hp感染及預(yù)后的Logistic回歸分析

經(jīng)Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)，慢代謝CYP2C19 基因型是影響胃癌患者Hp 感染及預(yù)后的危險(xiǎn)基因型（P＜0.05），見表3 ～ 4。

表3 CYP2C19基因多態(tài)性對(duì)胃癌患者Hp感染的Logistic回歸分析

表4 CYP2C19的基因多態(tài)性對(duì)胃癌患者生存預(yù)后的Logistic分析

3 討論

胃癌在我國(guó)各種惡性腫瘤中居于首位，其發(fā)生與Hp 感染、癌前病變、飲食、生活習(xí)慣、情緒、環(huán)境等多種因素有關(guān)。同時(shí)大量研究均表明Hp 感染與慢性胃炎、胃潰瘍及胃癌的發(fā)病密切相關(guān)[5-7]。原因可能是由于Hp 可引起胃腸道的持續(xù)感染并誘發(fā)持續(xù)的輕度炎癥反應(yīng)從而導(dǎo)致慢性胃潰瘍，隨著時(shí)間的推移，可引起胃部組織的癌前病變，最終導(dǎo)致胃癌的發(fā)生[8-9]。且Hp 感染可加速或加重胃癌的發(fā)生發(fā)展，對(duì)患者預(yù)后產(chǎn)生不良影響[10]。因此對(duì)胃癌合并Hp 感染患者進(jìn)行Hp 根除治療，可有效改善患者的預(yù)后。研究發(fā)現(xiàn)在治療過程中，CYP2C19 基因多態(tài)性對(duì)Hp 根治效果有顯著影響[11-12]。CYP2C19可參與前致癌的活化物和致癌物質(zhì)的滅活，當(dāng)CYP2C19 酶活性減弱時(shí)，致癌物質(zhì)在體內(nèi)代謝減慢，導(dǎo)致其在體內(nèi)堆積，增加了致癌物在體內(nèi)的濃度及作用時(shí)間，從而增加了腫瘤的易感性，且由于其慢代謝作用，對(duì)癌物質(zhì)滅活過慢，可影響患者的治療，更易導(dǎo)致癌癥的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移等不良生物學(xué)行為，繼而影響患者的生存質(zhì)量，增加患者死亡的風(fēng)險(xiǎn)[13]。因此，不同代謝類型的CYP2C19 基因表達(dá)水平或許可作為胃癌預(yù)后的評(píng)價(jià)指標(biāo)。

有學(xué)者對(duì)Hp 感染者進(jìn)行了相關(guān)調(diào)查，發(fā)現(xiàn)慢代謝者胃癌風(fēng)險(xiǎn)較高[14]，還有研究表明CYP2C19 慢代謝基因型對(duì)胃癌發(fā)生有一定促進(jìn)作用[15]。本研究對(duì)胃癌合并Hp 感染及未合并Hp 感染患者進(jìn)行CYP2C19 基因類型檢測(cè)發(fā)現(xiàn)胃癌合并Hp 感染患者體內(nèi)CYP2C19 慢代謝型比例顯著高于未合并Hp感染者，與以往的研究[15]結(jié)果類似，表明CYP2C19慢代謝基因型與Hp 感染有關(guān)，慢代謝基因型表達(dá)水平高的患者其發(fā)生Hp 感染的可能性較高。其原因可能在于：胃癌的發(fā)生與飲食、生活習(xí)慣密切相關(guān)，如長(zhǎng)期酗酒、吸煙、暴飲暴食等，以及情緒、環(huán)境等因素均可能導(dǎo)致胃癌的發(fā)生，此外真菌、細(xì)菌、毒素等感染也是引起胃癌的危險(xiǎn)因素，而幽門螺桿菌感染是胃癌發(fā)生的最重要的因素之一。慢代謝型CYP2C19 患者體內(nèi)代謝較緩慢，對(duì)外來毒素及病菌清除過程較慢，導(dǎo)致其在體內(nèi)作用時(shí)間延長(zhǎng)，因此增加了Hp 感染的可能。另外本研究還顯示隨訪2年內(nèi)慢代謝基因型胃癌患者死亡率顯著高于另外兩種基因型患者（P＜0.001），而純合子快代謝基因型與雜合子快代謝基因型間死亡率比較無顯著差異（P＞0.05），這表明CYP2C19 慢代謝型對(duì)胃癌患者的治療預(yù)后有一定影響，而純合子快代謝基因型與雜合子快代謝基因型與胃癌的治療預(yù)后無明顯影響。由此可推測(cè)慢代謝CYP2C19 表達(dá)水平較高的胃癌患者預(yù)后可能較差。其原因與慢代謝型CYP2C19 酶活性降低，對(duì)體內(nèi)致癌物質(zhì)的滅活作用減弱，導(dǎo)致致癌物質(zhì)在體內(nèi)堆積水平過高，對(duì)人體的作用時(shí)間相對(duì)較長(zhǎng)有關(guān)[15]。因此提示臨床對(duì)于胃癌的治療可通過進(jìn)行CYP2C19 基因型檢測(cè)，來預(yù)測(cè)及評(píng)價(jià)患者的療效，同時(shí)提示或許可針對(duì)改變不同類型的CYP2C19 基因表達(dá)水平來干預(yù)胃癌患者的治療，對(duì)于胃癌高危因素的慢代謝型的HP 感染患者應(yīng)進(jìn)行正規(guī)根除HP 治療。

綜上所述，CYP2C19 基因型對(duì)胃癌合并幽門螺旋桿菌感染及預(yù)后均有密切關(guān)系，胃癌合并幽門螺旋桿菌感染患者CYP2C19 慢代謝基因型率表達(dá)較高，且CYP2C19 慢代謝基因型胃癌患者相對(duì)其他基因型的患者預(yù)后差，因此，臨床可針對(duì)胃癌患者的基因型檢測(cè)結(jié)果評(píng)估其療效及預(yù)后。但本研究存在不足之處在于未結(jié)合患者的病理類型及臨床分期進(jìn)行分析，且缺乏大樣本量的研究，以后的研究者可對(duì)此深入研究。