PLA2R1基因rs4664308位點單核苷酸多態性與特發性膜性腎病易感性的Meta分析*

謝大星，郭廣鳳，鄭 笑，楊淑芬，陸 晨△

(1.安徽醫科大學新疆臨床學院/新疆維吾爾自治區人民醫院腎病科，烏魯木齊 830001；2.石河子大學醫學院，新疆石河子 832000)

膜性腎病是成人腎病綜合征最常見的病理類型之一，近年來其發病率明顯增加，以年輕人增加的最多[1-2]。膜性腎病按發病原因分為特發性膜性腎病(IMN)和繼發性膜性腎病(SMN)。病理特征為腎小球臟層上皮細胞下免疫復合物彌漫性沉積、基底膜增厚伴釘突形成。近年來許多研究表明IMN的主要靶抗原為M型磷脂酶A2受體(phospholipase A2receptor，PLA2R)，THSD7A(thrombospondin type-1 domaincontaining 7A，THSD7A)為IMN的第二靶抗原。Meta分析顯示約70%的IMN中可檢測到抗PLA2R抗體，在抗PLA2R抗體陰性的IMN患者中THSD7A陽性率為10%[3]。全基因組關聯分析研究檢測到PLA2R1和HLA-DQA1是IMN的主要風險位點[4]，目前國內外已發表的研究論文表明PLA2R1 rs4664308位點單核苷酸多態性與IMN相關。考慮到大多數研究樣本量相對較小，本文對7項已發表的論文進行分析，以確定PLA2R1 rs4664308位點與IMN風險之間的精確關聯。

1 資料與方法

1.1文獻檢索 檢索萬方數據庫、中國期刊全文數據庫(CNKI)、維普數據庫、PubMed、Web of science、Medline數據庫，中文檢索式為：(膜性腎病或MN)和rs4664308,英文檢索式為：(membranous nephropathy or MN) and rs4664308,盡量在全文或任意字段中檢索，檢索時間為建庫至2018年12月31日。對納入文獻全文的參考文獻進行手工檢索查看是否存在合格的研究。

1.2納入及排除標準 納入標準：(1)國內外發表的中英文文獻;(2)病例組通過腎活檢診斷為IMN;(3)隊列研究或病例-對照研究，對照組人群符合哈迪-溫伯格平衡定律(HWE);(4)暴露因素為PLA2R1基因 rs4664308位點G/A突變，結局指標為IMN的發病風險;(5)重復發表的文獻保留資料詳細、樣本量最大的文獻。排除標準：(1)評論文章、會議文章、綜述、病案報道、療效研究;(2)缺乏有效的原始數據，文獻的重復報道。

1.3數據提取與評價 嚴格按照納入及排除標準對檢索的文獻進行篩選，分別由兩位研究者根據納入及排除標準對文獻篩選，然后對納入文獻進行質量評估，提取文獻信息包括第一作者、年份、國家、樣本量、實驗方法、rs4664308各基因型分布。采用Newcastle-Ottawa Scale(NOS)量表對價納入文獻進行質量評估，主要包括3個方面(選擇、可比和暴露)，總分為9分，大于或等于6分為高質量文獻。

1.4統計學處理 采用Stata 15.0軟件進行統計分析。對納入文獻對照組進行Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗判斷基因型分布是否服從遺傳平衡定律，繪制森林圖、Deek漏斗圖。以I2統計量評價異質性，I2>50.0%異質性不顯著使用固定效應模型，I2≥50.0%使用隨機效應模型。通過刪除單個研究進行敏感性分析，進而確定個體數據對匯總結果的影響并測試結果的可靠性。計算病例組和對照組rs4664308位點顯性、隱性及共顯性模型下的OR值及其95%置信區間(95%CI)。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1對納入文獻的質量評估 檢索數據庫獲得中英文文獻44篇，通過閱讀題目及摘要排除重復文獻12篇，綜述8篇，會議報道2篇，與抗PLA2R抗體相關文獻7篇，其他9篇，通過其他途徑獲得2篇文獻包含rs4664308位點[5-6]，閱讀全文及參考文獻發現文獻[6]無法獲取完整數據,文獻[7]數據與[12]重復，故最終納入7篇文獻[5,8-13]。共納入7 225例參與者，其中IMN 2 508例，健康對照4 717例，2項研究來源于歐美人群，5項研究來源于亞洲人群。所有研究均采用外周血進行多態性檢測，文獻[8]采用SNP芯片，文獻[5]未提及實驗方法，剩下5篇文獻均采用Taqman探針基因分型+RealTime-PCR法檢測。納入文獻NOS≥6分，見表1。納入文獻的基本特征見表2。

表1 納入文獻的NOS(分)

2.2Meta分析結果 (1)rs4664308位點A等位基因較G等位基因合并OR值為2.480(95%CI:2.100～2.930),在顯性模型下合并OR值為2.920(95%CI:2.630～3.260)，在隱性模型下合并OR值為2.892(95%CI2.321～3.602);(2)在共顯性模型下AA基因型較GG基因型合并的OR值為4.320(95%CI：3.450～5.410)，AG基因型較GG基因型合并的OR值為1.640(95%CI：1.300～2.070)。 在A/G等位基因模型、顯性模型、隱性模型及共顯性模型下,差異有統計學意義(P<0.05),見表3、圖1。按地域分為歐洲組與亞洲組，歐洲組在隱性及共顯性模型(AGvs. GG)下差異無統計學意義(P>0.05)；亞洲組在等位基因模型、顯性模型、隱性模型、共顯性模型下差異均有統計學意義(P<0.05)；在等位基因及顯性模型下亞洲組對IMN易感性高于歐洲組，見表4。按文獻納入IMN數量分為IMN<300組和IMN≥300組，IMN<300組I2=78.3%，P=0.003，IMN≥300組I2=0.0%，P=0.951，見圖2。

表2 納入文獻的基本特征

表3 rs4664308位點與IMN的關聯性分析

表4 歐洲與亞洲組在不同模型下rs4664308位點與IMN的關聯性分析

圖1 等位基因模型森林圖(A vs. G)

1：IMN<300組；2：IMN≥300組

圖2亞組森林圖

圖3 等位基因模型下敏感性分析

2.3敏感性 等位基因模型(Avs. G)異質性I2=62.4%，進行敏感性分析顯示結果可靠，見圖3。

2.4發表偏倚 運用Begg和Egger檢驗來識別潛在的發表偏倚，Begg和Egger檢驗顯示rs4664308位點各模型發表偏倚對結果影響較小(P>0．05)。

3 討 論

近年來IMN的發病率逐年上升，從遺傳學角度研究IMN，認為其發展與某些基因位點的突變相關。PLA2R1由富含半胱氨酸的N-末端區、纖連蛋白樣Ⅱ型結構域、8個連續排列的C型凝集素樣結構域(C-typelectindomains，CTLD)、1個獨特的跨膜部分和1個短C-末端胞質尾區等結構組成[14]。SEITZ-POLSKI等[15]發現3個PLA2R1結構域參與抗PLA2R1結合：富含半胱氨酸(CysR)，C型凝集素結構域1(CTLD1)和C型凝集素結構域7(CTLD7)結構域中的反應性表位，約90%的人抗PLA2R自身抗體識別富含N-末端CysR結構域中的表位[16]。研究表明rs35771982基因位點突變可引起氨基酸的改變，從而連鎖引起CTLD結構變化，使PLA2R的抗原表位暴露，刺激機體產生特異性抗PLA2R抗體，最終導致IMN發生和發展[14]。目前PLA2R1單核苷酸多態性rs4664308位點對IMN的易感性機制尚不明確，可能與抗原表位暴露有關。膜性腎病的預后約1/3的患者自發緩解，約1/3的患者表現為持續的蛋白尿，約1/3在10年內進入到終末期腎臟病(end-stage renal disease，ESRD)，出現差異的原因尚不明確，而PLA2R1單核苷酸多態性rs4664308位點在多地區驗證是IMN的易感基因位點，隨著研究的不斷深入，rs4664308位點有可能成為IMN新的治療靶點。

本研究通過搜索中英文文獻，按照納入排出標準篩選出7篇文獻納入研究，結果表明病例組A等位基因、AA基因型和AG基因型頻率明顯高于對照組。筆者建立了不同的遺傳模型，rs4664308位點在共顯性模型(AAvs. GG)下與IMN的易感性最強，在共顯性模型(AGvs. GG)下與IMN的易感性最弱，攜帶AA基因型和AG基因型者患IMN的風險分別為攜帶GG基因型者的4.320倍和1.640倍。推測PLA2R1單核苷酸多態性rs4664308與IMN的易感性相關。在等位基因模型下異質性較大(I2=62.4%)，逐一刪除納入研究進行敏感性分析從而評價單一研究對總體結果的影響，結果表明單個納入研究均對總體研究結果無明顯影響，使用隨機效應模型進行敏感性分析提示結果穩定。對納入文獻進行亞組分析，按納入IMN患者數量進行分組時發現異質性主要來源于納入IMN患者數量小于300組。按地域分析發現歐洲組在隱性模型及共顯性模型(AGvs. GG)下，差異無統計學意義(P>0.05)。有研究表明PM濃度增高也會增加IMN的發病率[17]。ZHANG等[18]認為環境和基因的共同作用是IMN增長的潛在機制，地域差異，人群對IMN的易感性也不同。在國外膜性腎病的檢出率為8%～20%[19-23]，而中國膜性腎病的檢出率有逐年上升的趨勢，近幾年在20%以上[1-2]。種族、遺傳和環境等因素會影響患膜性腎病的風險。

本文的局限性：(1)納入的文獻數量較少，有1篇文獻的數據獲取失敗；(2)納入人群包括歐洲和亞洲，仍需要擴大研究人群，補充不同地區人群、種族的研究資料，使研究更具有可信性；(3)本研究納入文獻為中英文文獻，缺少其他語言文獻，有可能存在發表偏倚；(4)目前所知的膜性腎病的易感基因位點有多個，未考慮基因-基因之間存在交互作用。

綜上所述，PLA2R1基因rs4664308位點是IMN的易感基因位點，通過不同的模型分析發現亞洲人群在A/G等位基因模型、顯性模型、隱性模型和共顯性模型下均表現出易感性，而歐洲人群在隱性及共顯性模型(AGvs. GG)未表現出易感性，提示種族差異有可能影響發病機制。