某全自動血細胞分析儀的方法學性能評價

戚世娟,趙世巧,冉 燕

(重慶市中醫院檢驗科 400021)

為加強設備的管理,保障醫療質量與安全，必須對新安裝儀器的性能進行分析和評價。只有檢測系統的各項性能指標符合質量安全要求,才能用于臨床[1]。檢測系統的性能評價是臨床檢驗質量管理的重要內容。本文旨在對本科新引進的BC-5390CRP全自動血細胞分析儀的方法學性能做以下評價，以驗證該產品性能的可靠性和臨床適用性，現報道如下。

1 資料與方法

1.1標本來源 標本來自本院住院患者和健康體檢者，使用真空采血管(EDTA-K2抗凝管)采集靜脈全血2 mL，采集后3 h內檢測完畢。

1.2試劑與儀器 儀器：深圳邁瑞公司生產的BC-5390CRP全自動血細胞分析儀；日本Olympus CX-21型顯微鏡。試劑：采用邁瑞公司配套標準品及質控品。全血細胞室間質評標本來自國家衛生健康委員會臨床檢驗中心。EDTA-K2真空采血管購自湖北金杏科技發展有限公司，瑞氏-吉姆薩染料購自珠海貝索生物技術有限公司。

1.3方法

1.3.1檢測指標 性能評價前用配套標準品對儀器進行定標，每天用配套質控品進行室內質控，在室內質控條件下按要求用血細胞分析儀檢測白細胞(WBC)、紅細胞(RBC)、血紅蛋白(Hb)、血細胞比容(HCT)、平均紅細胞容積(MCV)和血小板(PLT)等指標。

1.3.2本底/空白計數 采用稀釋液代替標本測試3 次，計算均值[2]。判定標準：WBC≤0.5×109/L、RBC≤0.05×1012/L、Hb≤2 g/L、PLT≤10×109/L。

表1 攜帶污染率

1.3.3攜帶污染率檢測 取高濃度血液標本，混合均勻后連續測定3次，測定值分別為H1、H2、H3；再取低濃度血液標本，連續測定3次，測定值分別為L1、L2、L3。按公式計算攜帶污染率。攜帶污染率=(L1-L3)/(H3-L3)×100%，各檢測項目攜帶污染率均要求小于1%[2]。

1.3.4精密度評價 批內精密度：根據NCCLS EP15-A文件[3]取低、中、高 3個水平的新鮮血液，連續重復測定10次，計算變異系數(CV)、標準差(SD)。CV要求如下：WBC≤2.5%、 RBC≤1.5%、Hb≤1.0%、HCT≤1.5%,MCV≤1.0%、PLT≤4.0%。批間精密度：用高、中、低3個水平的質控品，每天測定4次，每次檢測間隔2 h，連續檢測5 d，一共收集20個數據求CV。批間精密度CV要求:WBC≤5.0%、RBC≤2.0%、Hb≤2.0%、HCT≤2.0%、MCV≤2.0%、PLT≤8.0%。

1.3.5線性范圍評價 按NCCLS EP6-A文件[4]選取1份接近預期上限的高值全血標本(H)，分別按100%、80%、60%、40%、20%的比例進行稀釋，每個稀釋度重復測定3次，計算均值。將實測值Y與理論值X做比較(偏離應小于國標規定范圍)，計算Y=aX+b，驗證線性范圍。

1.3.6正確度驗證 采用10份檢測結果在參考區間內的新鮮血標本，每份標本檢測2次，計算20次檢測結果的均值，以BC-6800(使用配套試劑、用配套校準品定期進行儀器校準、儀器性能良好、規范地開展室內質量控制、室間質量評價成績優異)的測定均值為標準，計算偏倚[2]。正確度驗證的允許偏倚:WBC≤5.0%、 RBC≤2.0%、Hb≤2.5%、HCT≤2.5%、 MCV≤3.0%、PLT≤6.0%。

1.3.7模式之間結果的比對 校準后，取5份臨床標本分別使用自動進樣模式和手動模式進行檢測，每份標本各測2次，分別計算兩種模式下檢測結果均值間的相對差異，符合要求的比例應大于或等于80%。差異要求如下：WBC≤±5%、 RBC≤±2%、Hb≤±2%、HCT≤±3%、PLT≤±7%[2]。

1.3.8WBC分類 取100份標本按照《全國臨床檢驗操作規程(第3版)》的WBC鏡檢分類方法，由2名經驗豐富的工作人員將每份血液標本推2張血片，瑞氏染色，選擇體尾交界處進行人工鏡檢分類[5]，每人每片油鏡分類200個WBC，每份標本重復2次，計算均值,以人工顯微鏡WBC分類百分比結果為參考方法，并與儀器分類百分比結果進行回歸分析。

1.4統計學處理 采用SPSS17.0統計軟件進行分析。線性范圍驗證時，采用Pearson相關系數，并對其進行直線回歸分析。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1本底/空白計數 采用稀釋液替代標本測試3次,連續3次測定結果均為0,本底均低于最大允許范圍，本底檢測合格，滿足衛生行業標準(WS/T406-2012)。

2.2攜帶污染率 各檢測項目攜帶污染率均小于1%，見表1。

表2 批內、批間精密度情況(%)

表3 線性范圍

表4 正確度評價試驗結果

2.3精密度 各參數精密度均滿足要求，見表2。

2.4線性范圍 各稀釋度的實測值和理論值之間具有良好的相關性，r>0.999，a值在1.000±0.005且線性范圍較寬，見表3。

2.5正確度 正確度以偏倚為評價指標，各指標偏倚均滿足衛生行業標準(WS/T406-2012)，見表4。

2.6模式對比 以手動模式為基準模式，5份標本手動模式和自動模式差異小，各項指標均滿足衛生行業標準(WS/T406-2012),見表5。

表5 模式對比(%)

2.7WBC分類情況 儀器分類結果與手工分類比較,中性粒細胞、嗜酸性粒細胞和淋巴細胞的相關性較好，而單核細胞、嗜堿性粒細胞的相關性相對較差，見表6。

表6 儀器分類與手工分類WBC檢測結果比較

3 討 論

近年來，全自動血液分析儀廣泛應用于臨床檢驗診斷學領域[6]。BC-5390CRP是邁瑞公司于2015年5月正式推出的一款集血常規五分類和C反應蛋白(CRP)檢測于一體的全自動血液細胞分析儀。這款儀器具有用血量少、檢測速度快、操作簡便快速等特點，尤其適合綜合醫院門診(急診)和兒童醫院使用，但關于該儀器的性能評價鮮有報道。該分析儀采用庫爾特原理檢測WBC/嗜堿性粒細胞、RBC和PLT的數量及體積分布，半導體激光流式細胞技術對WBC進行分類，比色法測量Hb水平。檢測系統的分析性能能夠達到質量指標的要求是醫學實驗室認可和檢驗結果互認的根本保證[7]。本文就BC-5390CRP作相關性能評價，以證實其是否能夠滿足臨床預期用途。

本研究主要依據國家衛生行業標準(WS/T406-2012)《臨床血液學檢驗常規項目分析質量要求》和NCCLS EP系列文件中的性能評價標準對BC-5390CRP進行性能驗證和評價。針對儀器的主要分析性能：本底計數、攜帶污染率、精密度、線性范圍、正確度、不同模式間比較，以及WBC分類。攜帶污染率是衡量各標本間交叉污染的指標[8-9]。本研究顯示，該儀器本底計數、攜帶污染率均在允許范圍內，達到要求。說明儀器的管路和反應池沖洗干凈，高值標本對低值標本的干擾在允許范圍。精密度是反映檢測系統隨機誤差大小的指標[10-11]。臨床實驗室對臨床標本一般只做單次檢測便發出檢驗報告，如果隨機誤差大、結果不可靠，會給臨床工作帶來極大的困擾和風險。精密度好，是儀器其他性能優良的前提和保障。本研究結果顯示，各項目批內和批間的精密度均小于行業標準的要求，儀器的重復性好。線性范圍評價結果顯示，5個項目各稀釋度的實測值和理論值之間均具有良好的相關性(r>0.999)，a值在1.000±0.005，線性范圍寬，能覆蓋臨床上可能出現的極高值和極低值，滿足臨床檢測的需求。正確度以偏倚表示，代表檢測系統的系統誤差[12-13]。試驗結果顯示，各檢測項目的偏倚均在要求的范圍內，檢測結果可靠。BC-5390CRP具有手動模式和自動模式，為確保兩種模式檢測結果的一致性，還需對不同進樣模式間進行比對。本研究結果顯示，自動模式和手動模式檢測結果具有一致性，差異在可接受的范圍內。

為提高工作效率，在保證質量的前提下，可盡量減少推片檢查的標本數量[14]。本研究對比了該儀器WBC分類結果和人工鏡檢分類結果。與人工鏡檢分類結果比較，儀器對中性粒細胞、淋巴細胞、嗜酸性細胞的分類結果相關性高，在臨床工作中只有當遇到異常提示和觸發血常規復檢規則時，需要進行人工顯微鏡確認，這樣既保證了質量又提高了效率。而儀器對單核細胞和嗜堿性細胞的分類結果相關性較低。可能與單核細胞雖體積比一般淋巴細胞大，核酸含量高，熒光方向和側向散色光位置高，但與大淋巴細胞、單核型異型淋巴細胞等接近，甚至與原始細胞也不易完全區分，可引起計數誤差，因此對單核細胞儀器法計數高的標本需進行人工復檢；嗜堿性細胞可能因為細胞少、比例低，手工鏡檢計數的細胞與儀器分析幾千個細胞相比誤差較大。

綜上所述，該分析儀本底計數低、攜帶污染率低、批內和批間精密度高、準確性好、線性范圍寬、不同模式間差異小，各項技術指標均達到了臨床的要求，可用于臨床標本的檢測，滿足臨床需求。