延胡索咀嚼片質量標準研究

姜黎 趙森 紀開一 鄒明 孫涌津 徐保利

[摘要]目的 建立延胡索咀嚼片的薄層及高效液相測定方法。方法 采用1% NaOH制備硅膠G板上，以正己烷-氯仿-甲醇（7.5：4：1）為展開劑，利用延胡索乙素對延胡索咀嚼片進行鑒別。采用反相高效液相色譜（RP-HPLC）進行測定，色譜柱為Hypersil BDS C18（5 μm，4.6 mm×150 mm）;流動相為甲醇-0.1%磷酸（用三乙胺調節pH至6.0）（60：40）;檢測波長為280 nm。結果 延胡索咀嚼片薄層鑒別，置紫外燈（365 nm）下檢視，在供試品色譜中，與對照品相同位置上，顯相同顏色熒光斑點，陰性對照無此斑點。利用HPLC法對延胡索咀嚼片中的延胡索乙素進行測定，延胡索咀嚼片中延胡索乙素的線性范圍為0.0832～0.4160 μg，r=0.9997，平均回收率為99.94%（RSD=0.52%）。結論 所建立的延胡索咀嚼片定性及定量質量控制方法，操作簡單、重現性好、專屬性高，可作為質量控制的方法。

[關鍵詞]延胡索咀嚼片;延胡索乙素;薄層色譜;高效液相

[中圖分類號] R282.1? ? ? ? ? [文獻標識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1674-4721（2019）9（c）-0044-04

[Abstract] Objective To establish thin layer and high performance liquid phase determination methods for Corydalis Rhizoma Chewable Tablets. Methods The silica gel G plate was prepared with 1% NaOH， and the Corydalis Rhizoma Chewable Tablets were identified by tetrahydropalmatine， with n-hexane-chloroform-methanol （7.5：4：1） as the developing agent. It was determined by reversed phase high performance liquid chromatography （RP-HPLC）. The column was Hypersil BDS C18 （5 μm， 4.6 mm×150 mm）， the mobile phase was methanol-0.1% phosphoric acid （pH adjusted to 6.0 with triethylamine） （60：40）， and the detection wavelength was 280 nm. Results The thin layer of Corydalis Rhizoma Chewable Tablets was identified and placed under ultraviolet light （365 nm）. In the chromatogram of the test sample， the same color fluorescent spot was displayed at the same position as the reference substance， and the negative control did not have this spot. The content of tetrahydropalmatine in the Corydalis Rhizoma Chewable Tablets was determined by HPLC. The linear range of tetrahydropalmatine was 0.0832-0.4160 μg， r=0.9997， and the average recovery rate was 99.94% （RSD=0.52%）. Conclusion The qualitative and quantitative quality control methods of the Corydalis Rhizoma Chewable Tablets are easy to operate with good reproducibility and high specificity， and can be used as quality control methods.

[Key words] Corydalis Rhizoma Chewable Tablets; Tetrahydropalmatine; Thin layer chromatography; High performance liquid phase

延胡索咀嚼片（Corydalis Rhizoma Chewable Tablets）是由醋延胡索、枯礬、海螵蛸（去殼）組成的。原方安胃片，為《中國藥典》2015年版一部收載品種[1]。具有行氣活血、制酸止痛的功效，用于氣滯血瘀所致的胃脘刺痛、吞酸噯氣、脘悶不舒，胃及十二指腸潰瘍、慢性胃炎見上述癥候者[2]。本方原為吞服片劑，每次服用5～7片，服用劑量大，患者依從性較差，因此本研究將其劑型改為咀嚼片，并驗證了新劑型療效穩定、方便服用。方中君藥為延胡索（Corydalis Rhizoma），為罌粟科植物延胡索的塊莖，性溫、味苦，歸肝、心、脾經，功效為活血、行氣、止痛[3]?，F代藥理作用研究表明，延胡索具有抗潰瘍作用，對胃及十二指腸潰瘍有可靠的療效[4]。延胡索乙素可安定中樞，尤適用于疼痛引起的失眠[5]。因此本研究利用延胡索乙素為對照品，采用薄層色譜法對延胡索咀嚼片進行定性鑒別[6-7]，并采用高效液相色譜法（HPLC）測定延胡索咀嚼片中延胡索乙素含量[8-9]，結果表明，上述兩種方法操作簡便、快速、準確、重現性好、結果直觀，可用于該產品的質量控制。

1儀器與試藥

1.1儀器

日本島津LC-10Atvp高效液相色譜儀;Kromasil-C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）色譜柱;N-2000色譜工作站;ZF-2型三用紫外分光光度儀（上海市安亭儀器廠）;十萬分之一分析天平（瑞士）;KQ3200超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2試藥

延胡索乙素對照品（批號：110726-201819）采購自中國食品藥品檢定研究所;乙醇、甲醇為色譜純;水為純水;延胡索咀嚼片（自制）;其余均為分析純。

2方法與結果

2.1延胡素咀嚼片薄層鑒別

2.1.1對照品溶液制備? 取延胡素乙素對照品2.08 mg，精密稱定，加甲醇50 ml溶解，即得。

2.1.2供試品溶液制備? 取延胡索咀嚼片3 g，粉碎，藥粉加甲醇50 ml，超聲30 min后，濾過，蒸干濾液，殘渣用水溶解后，以濃氨液調至pH值為堿性，乙醚提取3次，每次10 ml，合并乙醚液，蒸干，用甲醇1 ml溶解，即得。

2.1.3陰性溶液制備? 取處方中除延胡索外的兩味藥材，按供試品溶液制備方法制備，即得。

2.1.4薄層色譜條件? 分別吸收上述溶液10 μl，點于同一硅膠G板上，以正己烷-氯仿-甲醇（7.5：4：1）為展開劑，展開，晾干后，置碘缸中約3 min后取出，揮盡板上吸附的碘后，置紫外燈下（365 nm）檢視，在供試品色譜中，與對照品溶液相同的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，陰性液無斑點，結果如圖1所示。

1：延胡索乙素對照品;2：供試品溶液;3：陰性對照液

2.2延胡素咀嚼片中延胡素乙素的含量測定

2.2.1色譜條件? 采用反相高效液相色譜（RP-HPLC）法，Hypersil BDS C18（5 μm，4.6 mm×150 mm），流動相為甲醇-0.1%磷酸（60：40）（用三乙胺調節pH至6.0），體積流速1.0 ml/min，檢測波長為280 nm，進樣量為10 μl。典型色譜圖具體見圖2。

“1”表示延胡索乙素

A：延胡素乙素;B：延胡索咀嚼片;C陰性對照品

2.2.2對照品溶液的制備? 精密稱取延胡索乙素對照品適量，加甲醇制成41.6 μg/ml的對照品溶液。

2.2.3供試品溶液的制備? 取延胡索咀嚼片30片，研細，精密稱定，采用以下三種方法分別進行處理，作為供試品溶液，進行測定，結果進行比較。

方法1[10]：取2 g，精密稱定，置索氏提取器中，加入乙醚適量，濃氨液2 ml浸泡過夜，加熱回流提取，取乙醚液，水浴蒸干，殘渣加甲醇1 ml溶解后轉移至10 ml容量瓶中，定容后，以0.45 μm微孔濾膜濾過，取續濾液，即得。

方法2[11]：置具塞三角瓶中，精密加入濃氨試液-甲醇（1：15）混合溶液50 ml，稱定重量，冷浸1 h后，回流提取60 min，放涼，精密稱定，以濃氨試液-甲醇（1：15）補足減少重量，濾過后，取續濾液25 ml蒸干，殘渣加水30 ml溶解，并移至分液漏斗中，加鹽酸調pH值至2～3，用石油醚（60～90℃）洗滌2次，每次20 ml，棄去石油醚層。水層加濃氨試液調pH值至9～10，用氯仿提取4次，30 ml/次，合并氯仿層，用水20 ml洗滌，氯仿層置水浴蒸干，殘渣加甲醇使溶解，轉移至10 ml容量瓶中，定容后，以0.45 μm微孔濾膜濾過，取續濾液，即得。

方法3[12]：精密加水50 ml，水浴加熱溫浸1 h使溶解，用氨水調節pH值至10后，至分液漏斗中，乙醚萃取4次（30、30、20、20 ml），合并乙醚液，水浴揮干，殘渣加甲醇定容至10 ml，搖勻，濾過，以0.45 μm微孔濾膜濾過，取續濾液，即得。

取以上三種不同方法制備的供試品溶液各10 μl，分別注入高效液相色譜儀，經實驗觀察結果顯示，方法1中成分分離較好，延胡索乙素含量較高;方法2分離較好，但延胡索乙素含量低;方法3種雜質成分多，不能完全分離。比較決定采用方法1的處理方法作為樣品溶液的制備方法。

2.2.4陰性對照溶液的制備? 取處方中除延胡索外的兩味藥材，按供試品溶液制備方法制備，即得。

2.2.5線性關系考察? 精密吸取0.1664 mg/ml延胡索對照品溶液5、10、12.5、15、20 μl，分別注入高效液相色譜儀，以濃度為橫坐標，對照品鋒面積為縱坐標，進行線性回歸，得回歸方程y=13794x+4042.9，r=0.9997（n=5），結果顯示，在0.0832～0.4160 μg內線性關系良好。

2.2.6精密度試驗考察? 精密吸取對照品溶液10 μl，按上述色譜條件，連續進樣（n=6），計算色譜峰面積，對照品及供試品RSD分別為1.01%和1.79%，結果符合規定。

2.2.7重復性試驗考察? 取延胡索咀嚼片，研細，精密稱定6份，按“2.2.3供試品溶液的制備”項下的方法制備，分別精密吸取10 μl注入高效液相色譜儀。測得延胡索乙素含量RSD為1.00%，重復性良好，結果符合規定。

2.2.8穩定性試驗考察? 取同一供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、10 h進樣，結果表明，10 h內穩定，RSD為1.30%，結果符合規定。

2.2.9回收率試驗考察? 分別取樣品6份，每份1 g，精密稱定，加入一定量的延胡索乙素的對照品溶液，按“2.2.3供試品溶液的制備”項下制備方法制備，進樣，測定含量，并計算加樣回收率，結果見表1。

2.2.10樣品測定? 取3批次延胡索咀嚼片，按上述供試品制備方法，制備延胡索咀嚼片供試品溶液，分別精密吸取10 μl注入HPLC進行分析，記錄峰面積，計算測得各批次延胡索乙素的含量，結果見表2。根據上述測定結果，暫定本品每片含延胡索以延胡索乙素計算，不得少于1.71 mg。

3討論

3.1指標成分選擇

延胡索咀嚼片中君藥為延胡索，且藥理活性強[13]，主要指標成分為延胡索乙素，以HPLC測定延胡索咀嚼片中延胡索乙素含量[14]，方法簡單、專屬性強、準確度高、重現性良好，可作為延胡索咀嚼片的質量控制依據。

3.2提取條件優化

查閱文獻對延胡索咀嚼片的提取條件進行優化[15]，對比回流提取法與索氏提取法的提取效率，結果提示，索氏提取法提取效率高，提取完全，故采用索氏提取法進行提取。同時對提取溶媒進行考察，對比氨水及乙醚混合液[16]、氨水及氯仿混合液兩種溶媒[17]，結果提示，氨水及乙醚混合液提取效率較高，故選用氨水及乙醚混合液作為提取溶媒。

綜上所述，對延胡索咀嚼片進行質量標準研究，采用薄層色譜法對延胡索咀嚼片中對延胡索進行定性鑒別，采用HPLC對處方中的延胡索乙素進行含量測定，該方法操作簡單、重現性好、專屬性高，可作為含量測定的指標。

[參考文獻]

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典一部[M].北京：化學工業出版社，2015：139，877-878.

[2]趙麗沙，董宇，壽旦.延胡索生物堿類化學成分及質量控制研究進展[J].中華中醫藥學刊，2017，35（2）：299-302.

[3]楊波，紀宏宇，鄭東友，等.中藥延胡索的炮制工藝和藥理作用的研究進展[J].藥學實踐雜志，2017，35（2）：112-115.

[4]顏晶晶，俸珊，何麗娜，等.延胡索乙素對映體對人肝微粒體細胞色素P450酶抑制作用機制研究[J].中草藥，2015， 46（4）：534-540.

[5]何曉鳳，張晶，張梅.延胡索化學成分、藥理活性及毒副作用研究進展[J].上海中醫藥雜志，2017，51（11）：97-100.

[6]張丹，王昌利，卜雕雕，等.高效液相色譜法同時測定延胡索中5種生物堿含量的方法學研究[J].中南藥學，2018， 16（12）：1759-1762.

[7]黃傳奇，熊鑫，馬浩然，等.醋延胡索飲片及其混偽品零余子的系統鑒別[J].時珍國醫國藥，2018，29（6）：1363-1366.

[8]杜穎川.高效液相色譜法對復方健胃分散片中延胡索乙素的含量測定及分析[J].中國民康醫學，2018，30（21）：79-81.

[9]胡珂，何忠臻，彭華勝，等.延胡索塊莖中延胡索乙素含量分布的研究[J].中國現代中藥，2018，20（7）：825-828.

[10]龔青，周蒂，王碧娟.HPLC法測定延胡索中延胡索乙素的含量[J].中國現代應用藥學，2000，17（4）：177-179.

[11]趙君穎.胃安舒顆粒質量標準的研究[J].中醫學報，2007， 22（5）：24-25.

[12]房方，丁選勝.延胡索藥材中延胡索乙素的含量測定[J].現代中藥研究與實踐，2005，19（1）：54-56.

[13]李凱，楊靖，彭晶晶，等.中藥延胡索研究進展[J].陜西農業科學，2018，64（6）：93-96.

[14]馮自立，趙正棟，劉建欣.延胡索化學成分及藥理活性研究進展[J].天然產物研究與開發，2018，30（11）：2000-2008.

[15]唐逸豐.延胡索化學成分與藥理作用研究概況[J].中國臨床研究，2018，10（23）：144-146.

[16]接強，賀吉香.延胡索提取工藝研究[J].遼寧中醫藥大學學報，2017，19（2）：49-52.

[17]徐忠坤，陳廣波，殷洪梅，等.延胡索藥材提取工藝研究[J].世界科學技術-中醫藥現代化，2015，17（11）：2318-2321.

（收稿日期：2019-03-28? 本文編輯：任秀蘭）