兩頭尖紅外光譜指紋圖譜

趙麗茹，趙利利，蔡廣知?，曲 帥，李金花，王 晶

（1.吉林省生物研究所，吉林 長春130012；2.長春中醫(yī)藥大學(xué)，吉林 長春130017；3.長春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，吉林 長春130012）

兩頭尖藥材為毛茛科植物多被銀蓮花Anemone raddeanaRegel 的干燥根莖，性辛、熱；有毒。歸脾經(jīng)。具有祛風(fēng)濕、消癰腫的功效［1］。研究表明其具有顯著的抗腫瘤、抑菌、抗炎鎮(zhèn)痛等作用［2-8］。臨床上被廣泛應(yīng)用，如被患者熟知的中成藥活絡(luò)丹、再造丸，其主要成分就是兩頭尖［3］。

近年來，紅外光譜檢測技術(shù)廣泛的應(yīng)用于各個領(lǐng)域［9］，包括中藥材、中藥炮制、中成藥的質(zhì)量控制等方面［10-13］。它不但具有操作簡單、速度快等特點，還能夠提供藥材的綜合信息，從而反應(yīng)中藥材內(nèi)在的質(zhì)量。本研究利用紅外光譜技術(shù)對不同產(chǎn)地的兩頭尖中藥材進(jìn)行分析，圖譜比對，首次建立了兩頭尖藥材的紅外光譜指紋圖譜的共有模式，以期為更好、更快速的評價其質(zhì)量提供依據(jù)。

1 材料

Vector 33型傅立葉變換紅外光譜儀（德國Bruker 公司）；DZF-6050型真空干燥箱（上海精宏實驗設(shè)備有限公司）；AB-135-S 型電子天平（梅特勒-托利多儀器上海有限公司）；FZ102微型植物試樣粉碎機(jī)（北京市永光明醫(yī)療儀器廠）。溴化鉀（光譜純）。兩頭尖藥材經(jīng)長春中醫(yī)藥大學(xué)肖寄平教授鑒定均為毛莨科銀蓮花屬多被銀蓮花Anemone raddeanaRegel 的干燥根莖，信息見表1。3個混淆品為天葵子、九節(jié)菖蒲、香附。

2 方法

2.1 樣品處理 采用溴化鉀壓片法［14］。取兩頭尖藥材，粉碎，過200目篩，在115 ℃干燥至恒定質(zhì)量，備用。精密稱取樣品粉末2 mg，KBr 100 mg，置瑪瑙研缽中混合研磨，均勻放入模具內(nèi)，12.5 MPa 下作用10 min，壓片，所壓出來的片子應(yīng)為透明的薄片，作為樣品片。同法制得KBr 空白片。

2.2 光譜條件［15］中紅外檢測器（德國Bruker 公司）；數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)OPUS 5.0；分辨率4 cm-1；掃描次數(shù)32次；掃描范圍4 000～400 cm-1。

2.3 數(shù)據(jù)預(yù)處理 每個樣品測定3次，所有圖譜進(jìn)行基線矯正，歸一化處理，然后將各次測得的光譜曲線做平均處理，得到平均圖譜，再對圖譜作13點平滑，即得。

2.4 方法學(xué)驗證［16］

2.4.1 精密度試驗 取同一產(chǎn)地的兩頭尖藥材，按“2.1”項下方法處理，連續(xù)測定6次，測得樣品紅外圖譜間相關(guān)系數(shù)的平均值為0.999 9，RSD 為0.008 4%（n=6）。表明儀器精密度良好。

2.4.2 穩(wěn)定性試驗 取同一產(chǎn)地的兩頭尖藥材，按“2.1”項下方法處理，置干燥器內(nèi)保存，分別于0、1、2、4、6、8、12 h 進(jìn)樣，測得各樣品紅外譜圖間相關(guān)系數(shù)的平均值為0.999 0，RSD 為0.094 17%（n=7）。表明樣品在12 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4.3 重復(fù)性試驗 取同一產(chǎn)地的兩頭尖藥材6份，按“2.1”項下方法處理，用紅外光譜儀測定。測得各樣品紅外譜圖間相關(guān)系數(shù)的平均值為0.998 9。RSD 為0.123 8%（n=6），表明該方法重復(fù)性良好。

2.5 紅外光譜指紋圖譜建立

2.5.1 兩頭尖藥材測定 取不同產(chǎn)地的兩頭尖樣品和混淆品，按“2.1”項下方法處理，用紅外光譜儀測定，結(jié)果見圖1。

圖1 不同產(chǎn)地樣品及混淆品紅外光譜圖

2.5.2 相似度分析 利用OPUS 處理軟件對不同產(chǎn)地兩頭尖樣品的紅外圖譜以及平均圖譜進(jìn)行基線校正、歸一化、一階導(dǎo)、矢量歸一化處理，并對其進(jìn)行相似度分析，結(jié)果見表2。

表2 樣品紅外譜圖相似度值

結(jié)果表明，18批不同產(chǎn)地樣品圖譜與平均圖譜的相似度均大于0.97，不同產(chǎn)地樣品紅外圖譜與平均圖譜的相似度較高，而3個混淆品與平均圖譜的相似度分別為0.432 6、0.576 1、0.567 7。

3 討論

本研究將18批兩頭尖藥材和3個混淆品，采用溴化鉀壓片法進(jìn)行紅外光譜測定。將所得圖譜處理后，加以分析。從而確定共有峰，計算相似度，結(jié)果顯示，樣品之間的相似度均值為0.991 7，相似度比較高，同比之下煙臺和濟(jì)南樣品的相似度相對比較低。表明這2種樣品和其他產(chǎn)地樣品相比較，成分略有差異，但相似度也在0.97以上。而3個混淆品的相似度值較低，表明混淆品的成分和正品相比較差別較大。通過相似度分析表明，兩頭尖藥材的紅外光譜指紋圖譜的共有模式可以與混淆品種相區(qū)別，具有鑒別藥材真?zhèn)蔚淖饔?，表明用紅外光譜法建立的兩頭尖藥材的指紋圖譜，可以作為其質(zhì)量評價的一種手段。

兩頭尖藥材在質(zhì)量研究方面的文獻(xiàn)研究報道甚少。除張彥飛等［17-18］對兩頭尖進(jìn)行了液相指紋圖譜研究和竹節(jié)香附素A 的含有量測定外，尚未見關(guān)于兩頭尖藥材光譜鑒別的研究報道。液相鑒別方法雖具有準(zhǔn)確度、靈敏度高等特點。卻不及紅外光譜鑒別方法簡單、方便。故本研究采用紅外光譜鑒別法，為兩頭尖藥材提供了一種更簡便快捷的鑒別方法。